HPLC法同时测定健腰密骨片浸膏粉中5种指标成分

目的:建立健腰密骨片浸膏粉的多成分定量分析方法,为评价浸膏粉中间体的质量提供依据。方法:采用HPLC法,以乙腈-磷酸盐缓冲液为流动相,梯度洗脱,测定健腰密骨片浸膏粉中5种成分的含量。结果:木兰花碱、丹酚酸B、朝藿定C、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ5种成分在各自质量浓度范围内呈良好线性关系,r≥0.9997;5种化合物的平均回收率分别为100.47%、104.37%、95.38%、95.93%、96.66%。该方法的专属性、重复性均良好。结论:该分析方法准确、重复性好,可作为健腰密骨片浸膏粉的质量控制方法。

密骨片对绝经后骨质疏松症骨密度、血清骨保护蛋白及其配体水平和骨代谢指标的影响

目的观察密骨片治疗绝经后骨质疏松症患者骨密度(BMD)、血清骨保护蛋白(OPG)和骨保护蛋白配体(OPGL)水平及骨代谢指标的变化。方法将年龄48～65岁的192名自然绝经的妇女进行骨密度测定,对其中160例骨质疏松妇女进行随机分组,其中密骨片组54例,仙灵骨葆组53例,乐力钙组53例;其余BMD正常32例作为对照组。各组均于用药前、后12、24周,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清OPG与OPGL水平、骨碱性磷酸酶(sBAP)、骨钙素(sOC)、Ⅰ型胶原交联C端肽(sCTx)和尿Ⅰ型胶原交联N端肽(uNTx),用双能X线吸收法(DEXA)测定腰椎正位、股骨颈、Ward’s三角和大粗隆的BMD。结果治疗24周后,密骨片组和仙灵骨葆组BMD均有不同程度的提高,OPGL、sBAP、sOC均有明显升高,而OPG、sCTx、uNTx/Cr明显下降,乐力钙组和对照组变化不明显。结论密骨片治疗绝经后骨质疏松症疗效较显著,与仙灵骨葆相仿。单纯服用钙剂不能治疗绝经后骨质疏松症,且继续骨流失。

密骨片对PMOP的骨密度、MMP-2及骨代谢指标的影响

目的：观察密骨片（Migutablet）治疗绝经后骨质疏松症的血清基质金属蛋白酶-2（MMP-2）水平及骨密度（BMD）、骨代谢指标的变化。方法：将年龄55～62岁的192名自然绝经的妇女进行骨密度测定，骨质疏松妇女160例随机分为：密骨片（MG）组68例，仙灵骨葆（XLGB）组50例，钙剂组42例；绝经后正常妇女32例作为正常组。各组均于用药前后12，24周，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定的血清MMP-2水平、骨碱性磷酸酶（sBAP）、骨钙素（sOC）、I型胶原交联C端肽（sCTx）和尿Ⅰ型胶原交联N端肽（uNTx），用双能X线吸收法（DEXA）测定腰椎正位，股骨颈，Ward’s三角和大粗隆的骨密度（BMD）。结果：经治疗后，密骨片组和仙灵骨葆组骨密度均有不同程度的提高，而钙剂组和正常组骨密度均下降；密骨片组和仙灵骨葆组的sBAP，sOC均有明显升高，而MMP-2，sCTx，uNTx明显下降，钙剂组和正常组变化不明显。结论：密骨片治疗绝经后骨质疏松症疗效显著，与仙灵骨葆相仿。单纯服用钙剂不能治疗绝经后骨质疏松症，且继续骨流失。

补肾密骨片对去卵巢骨质疏松大鼠胫骨生物力学的影响

目的探究补肾密骨片治疗骨质疏松的机制。方法选择10月龄Wistar大鼠,采用去除卵巢饲养1个月的方法复制骨质疏松症模型,模型复制成功后,采用补肾密骨片进行治疗,治疗4周和8周后,分别取各组胫骨测定抗弯强度、刚性系数、弹性模量、最大挠度和韧性系数。结果与西药组和模型组比较,治疗4周后中药组胫骨抗弯强度和弹性模量显著增加(P<0.05)。结论补肾密骨片可以使去卵巢诱导骨质疏松大鼠的骨代谢恢复平衡。

密骨片对绝经后妇女骨密度的影响

采用 QDR2 0 0 0型双能 X线骨密度测定仪观察中药密骨片与西药利维爱对绝经后妇女骨密度及骨代谢的影响。结果显示 ,经密骨片与利维爱治疗 6个月后 ,两组腰椎、股骨颈、粗隆处骨密度及 E2 测定值略有上升 ,与治疗前比较经 t检验无明显差异 (P>0 .0 5 ) ;密骨片组治疗 6个月后股骨三角区骨密度及血清碱性磷酸酶明显上升 ;尿钙与肌酐比值、尿羟脯氨酸与肌酐比值明显下降 ,与治疗前比较有显著差异 (P<0 .0 5 )。提示密骨片具有抑制骨丢失和促进骨形成作用。

密骨片对破骨细胞基质金属蛋白酶-9mRNA表达的影响

目的:探讨白细胞介素-1(IL-1)诱导的破骨细胞性骨吸收过程中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA 的表达及补肾中药密骨片的调控作用。方法:从出生24 h 的乳鼠长骨中分离破骨细胞,从1月龄大鼠长骨中分离骨髓基质细胞,建立破骨细胞培养和骨髓基质细胞、破骨细胞培养系。在重组 IL-1α(rhIL-α)作用的同时,加入不同剂量的密骨片药液,分别与牛骨片共同培养20 h,计数骨吸收陷窝数及测算陷窝面积;并采用原位杂交技术研究破骨细胞 MMP-9 mRNA 的表达。结果:在基质细胞存在的条件下,IL-1可使骨吸收活性提高2～4倍,MMP-9 mRNA 呈高表达;而用密骨片药液处理后,MMP-9 mRNA 表达下降,作用呈量效关系。结论:密骨片可对抗 IL-1对基质细胞的影响,抑制破骨细胞重要的蛋白分解酶 MMP-9的表达而减少骨吸收。

密骨颗粒联合阿仑膦酸钠维D3片治疗老年性骨质疏松症的多中心临床研究

目的探讨密骨颗粒联合阿仑膦酸钠维D3片治疗骨质疏松症的临床疗效与安全性。方法随机将受试者分为试验组(n=109)和对照组(n=75),试验组给予密骨颗粒联合阿仑膦酸钠维D3片,对照组给予阿仑膦酸钠维D3片,疗程为12个月。分别于治疗前、治疗后6、12个月时行骨代谢、骨密度(bone mineral density,BMD)、血常规、肝肾功能等检查,并记录VAS与SF-36评分,观察受试者的不良反应。结果①12个月后,试验组和对照组受试者的腰椎BMD分别增加3.70%和4.18%,两组间比较差异无统计学意义(P>0.05);髋部BMD分别下降0.89%和17.02%,对照组下降更明显(P<0.05);②12个月,试验组和对照组受试者的PTH分别增加44.29%和72.03%,25(OH)D分别下降11.83%和9.29%,β-CTX分别下降32.25%和20.0%,PINP分别下降36.70%和58.95%,BGP分别下降22.82%和27.24%,ALP分别下降20.43%和25.97%,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05);③两组受试者治疗后腰痛VAS评分均下降(P<0.05),组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗9、12个月后试验组SF-36PCS及MCS功能评分高于对照组,比较差异有统计学意义(P<0.05);④两组均未出现严重不良反应。结论密骨颗粒联合阿仑膦酸钠维D3片治疗骨质疏松症可以降低骨转换速度,同时还可以促进成骨,提升腰部骨密度,保持髋部骨密度,降低骨流失,降低患者躯体疼痛,改善生活质量。未出现不良反应与肝肾功能损害,具有较好的安全性。

健腰密骨片中丹酚酸B的质量控制方法建立

目的:建立健腰密骨片中丹酚酸B的质量控制方法。方法:通过条件摸索,建立复方健腰密骨片中丹酚酸B薄层色谱定性鉴别方法和高效液相色谱定量检测方法。结果:制剂中丹酚酸B在薄层层析板上显示一清晰斑点、且重现性好、专属性强、阴性对照无干扰。HPLC测定显示丹酚酸B在0.191~15.291 mg范围内呈良好线性关系,回归方程为Y=1190.30X-253.63,r=0.9999;平均加样回收率及RSD分别为96.72%和1.46%。结论:新建的检测方法简便、快速、准确,重复性好,可作为健腰密骨片中丹酚酸B的质量控制方法,可以更好地保证制剂的整体质量,具有很强的实用性。

ELSD-HPLC法测定健腰密骨片中黄芪甲苷的含量

目的建立健腰密骨片中黄芪甲苷的ELSD-HPLC含量测定方法,为评价健腰密骨片质量提供依据。方法采用ELSD-HPLC法,用沃特世XBridge C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈和水作为流动相,进行梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为25℃,测定健腰密骨片中黄芪甲苷含量。结果黄芪甲苷进样量在0.4966~7.946μg范围内,其对数与峰面积对数呈良好线性关系(r=0.9990);平均加样回收率以及RSD分别为101.86%和3.97%。结论该方法准确、简便,重复性好,为健腰密骨片质量评价提供可靠的分析方法。

微波消解-ICP-MS同时测定健腰密骨片中5种重金属及有害元素及其不确定度评定

目的建立微波消解-电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)同时测定健腰密骨片中铜(^(63)Cu)、砷(^(75)As)、镉(^(111)Cd)、汞(^(202)Hg)和铅(^(208)Pb)的含量,并科学评估含量结果不确定度。方法加入硝酸并按设定的程序进行微波消解处理,选取锗(^(72)Ge)、铟(^(115)In)、铋(^(209)Bi)元素作为内标物质,采用ICPMS法同时测定5种重金属及有害元素含量,并参考CNAS-GL006:2019《化学分析中的不确定度评估指南》进行不确定度评估。结果建立的5种重金属及有害元素测定方法线性关系良好,r均大于0.999,重复性RSD均小于8%,加样回收率结果在83.3%~103.4%范围内,计算扩展不确定度后,5种元素测定结果分别为^(63)Cu(0.621±1.89×10^(-2))mg/kg、^(75)As(0.108±1.09×10^(-2))mg/kg、^(111)Cd(0.004±4.68×10^(-4))mg/kg、^(202)Hg(0.045±1.89×10^(-3))mg/kg、^(208)Pb(0.014±8.88×10^(-4))mg/kg,均未超过标准限度。结论建立的方法准确、高效,灵敏度高,并为ICP-MS检测不确定度评估提供依据。

不同剂量健腰密骨片对骨形成和小鼠骨髓间充质干细胞BMP-7、OC表达的影响

目的:研究健腰密骨片对骨形成及骨髓间充质干细胞(BMSCs)骨形态发生蛋白(BMP-7)、骨钙素(OC)表达的影响。方法:选取1月龄昆明小鼠60只,雌雄各半,按体质量随机分为健腰密骨片高、中、低剂量组,仙灵骨葆组,生理盐水组,灌胃8周后取材。用Micro-CT扫描分析L4腰椎,免疫组化染色观察不同剂量健腰密骨片对椎体BMP-7、OC表达的影响;分离培养获得各组小鼠原代BMSCs,利用碱性磷酸酶(ALP)染色、实时荧光定量RT-PCR法检测BMSCs成骨分化过程中BMP-7、OC的表达情况。结果:与生理盐水组比较,健腰密骨片高剂量组能够改善小鼠椎体三维结构,明显升高小鼠椎体骨密度(P<0.05),增加椎体骨小梁数目和骨小梁厚度增加(P<0.05),降低骨小梁分离度(P<0.05),促进椎体BMP-7、OC蛋白的表达;健腰密骨片高剂量组能够明显促进BMSCs中ALP的表达,上调成骨基因BMP-7、OC m RNA的表达量,其中OC m RNA升高显著(P<0.05)。结论:健腰密骨片高剂量组能够明显提高小鼠椎体骨密度,促进BMSCs成骨分化,上调椎体和BMSCs成骨分化过程中BMP-7、OC表达,从而促进骨形成。

密骨片防治去睾大鼠骨质疏松症的研究

使用不同剂量的补肾中药密骨片对去睾大鼠骨质疏松模型进行治疗，并与正常对照组、模型组和对照药物氟钙定组进行了比较。统计学结果显示，密骨片可明显抑制去睾大鼠造成的大鼠骨质丢失，对骨骼有保护作用；治疗后大鼠骨载荷，骨桡度等生物力学指标与模型组比较明显提高（Ｐ＜０．０５或＜０．０１）。使用密骨片治疗的大鼠部分骨检验指标与药物对照组比较亦有明显提高，差异有显著性（Ｐ＜０．０５或＜０．０１），提示该药促进骨生成的作用可能优于氟钙定。

健腰密骨片对成骨细胞增殖分化和BMP信号通路报导基因活性的影响

目的:探讨健腰密骨片对成骨细胞的影响及作用机制。方法:常规培养转染12×SBE-OC-Luc报导基因的成骨细胞株OCT-1细胞(以下简称12×SBE-OC-Luc-OCT1细胞),采用健腰密骨片含药血清进行干预48 h,并以骨形态发生蛋白(BMP)2纯化蛋白(50 ng/ml)为阳性对照。用MTT法检测成骨细胞增殖率,实时荧光定量RT-PCR法检测成骨细胞中Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen)、骨钙素(osteocalcin)和BMP2mRNA的表达以及荧光素酶活性检测法检测成骨细胞12×SBE-OC-Luc的活性。结果:与正常对照组比较,健腰密骨片能明显促进成骨细胞的增殖(P<0.05);显著增加成骨细胞中typeⅠcollagen、osteocalcin和BMP2的mRNA表达量(P<0.05);能明显促进成骨细胞中BMP报导基因12×SBE-OC-Luc的荧光素酶活性(P<0.05)。结论:健腰密骨片可通过促进BMP2、typeⅠcollagen和osteocalcin的表达及BMP信号通路报导基因12×SBE-OC-Luc的活性,从而促进成骨细胞的增殖与分化。