伪狂犬病病毒Min-A株糖蛋白gE基因真核表达质粒的构建

根据已发表的伪狂犬病病毒 (PRV)Rice株的 gE基因序列设计了 1对引物 ,用PCR法特异性地扩增出了PRVMin A株的 gE基因 ,并克隆到 pUC19中 ,再与杆状病毒转座质粒pFastBac1连接得到 pFastBac gE ,pFastBac gE转化穿梭载体Bacmid ,得到了重组rBacmid

伪狂犬病病毒Min-A株糖蛋白gE基因真核表达质粒的构建

根据已发表的PRV -Rice株的gE基因序列设计了一对引物 ,以PRV -MinA株的DNA为模板 ,用PCR法特异性地扩增出了PRVMin-A株的 gE基因 ,并克隆到 pUC19中 ,再与杆状病毒转座质粒 pFastBac1连接得到pFastBac -gE ,pFastBac-gE转化穿梭载体Bacmid,得到了重组rBacmid-gE表达载体。

伪狂犬病病毒Min-A株gD基因的克隆及其真核表达质粒的构建

参考GeneBank收录的伪狂犬病病毒gD基因的序列设计了一对引物,对PRVMin＿A株进行了PCR扩增,扩增产物克隆于pGEM＿TEasy载体。对重组质粒PGTE＿gD进行限制性内切酶分析和基因测序,证实了克隆片段的可靠性。测序结果表明目的片段包含一个1203bp的开放性阅读框(ORF),编码400个氨基酸组成的多肽。将gD基因亚克隆至真核表达载体pcDVA3.1＿的CMV启动子下游,构建了真核表达质粒pcDNA＿gD,为下一步基因免疫奠定了基础。