Plackett-Burman试验设计及响应面法优化超声辅助提取明绿豆SOD工艺

为了充分提取明绿豆中的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD),选用Plackett-Burman试验设计对影响磷酸盐缓冲液提取明绿豆SOD比活力的7个因素进行评价,筛选出具有显著效应的3个因素液固比、磷酸盐缓冲液p H值和超声水浴温度。在此基础上,采用响应面分析法优化出主要影响因素的最佳参数水平。结果表明:采用液固比22∶1(m L/g)、磷酸盐缓冲液p H 7、超声功率140 W、超声时间20 min、超声水浴温度44℃、水浴浸提时间1.5 h、水浴浸提温度60℃的组合,明绿豆SOD的实际比活力为856.95 U/mg。与传统SOD源相比,明绿豆SOD含量处于较高水平,可成为一种新的植物SOD源。

明绿豆活性蛋白的分离纯化及抗菌性鉴定

利用25％及75％饱和度的硫酸铵沉淀、阳离子交换层析CM-52和葡聚糖凝胶SephadexG-75对明绿豆蛋白进行了分离纯化。实验结果表明：分离纯化出的该蛋白对两种真菌：棉花枯萎病菌（Fusariumoxysporumfsp．vasinfectum）、玉米纹枯病菌（Rhizoctoniasolani地地）的生长具有一定的抑制作用；对金黄色葡萄球菌（Staphy-lococcusAureus）的细菌生长虽有一定的抑制作用，但较其抗真菌活性相对偏弱。利用高效液相色谱法（HPLC）对分离出的抗菌蛋白的分子量进行了测定，其分子量在29．7～33．8kDa之间。

明绿豆苯丙氨酸解氨酶的分离纯化及性质初步研究

为了研究明绿豆中苯丙氨酸解氨酶（PAL）的动力学特性，采用35％和65％饱和度的硫酸铵分级沉淀、DE-52阴离子交换层析方法对明绿豆中的PAL进行了分离纯化，并对其基本性质做了初步研究。结果表明，PAL的纯化倍数为6．9829，蛋白质得率为4．65％，酶得率为32．45％。PAL在硼砂-硼酸缓冲溶液中适宜的pH范围为7．6～9．0，最适pH有2个：8．0和8．6。PAL适宜的温度范围为35—45℃，最适反应温度为40℃。得到PAL的2个Km值，分别是：Km1为6.94×10^-5 mol/L,Km2为1.23×10^-4 mol/L。本研究结果可为进一步研究和开发明绿豆的PAL提供参考。