组织研磨器细胞破碎法提取霞水母(Cyanea sp.)毒素的初步研究

采用Mini-Beadbeater组织研磨器破碎的方法进行了提取霞水母刺丝囊细胞毒素的研究。首先制备霞水母刺丝囊细胞,然后研究破碎频率、破碎时间对提取霞水母刺丝囊细胞毒素浓度的影响。结果表明,组织研磨器能够在2—3min内破碎约90%的霞水母刺丝囊细胞,从而提高水母毒素的提取效率。SDS-PAGE结果显示,提取的水母毒素蛋白条带没有发生明显差异,是一种有效提取霞水母毒素的方法。

发形霞水母毒素分离产物溶血活性的比较及其影响因素分析

目的:分离发形霞水母刺丝囊毒素(nematocyst venom,NV)与无刺丝囊触手提取物(tentacle-only extract,TOE),比较二者的溶血活性,分析其影响因素。方法:采用自溶、离心方法分离发形霞水母NV和TOE,比较二者的溶血活性,观察提取物浓度、温度和pH值等因素对二者溶血活性的影响。结果:成功分离到NV与TOE;二者浓度相关溶血活性曲线均呈"S"形,溶血分数50%时所对应的质量浓度(HU50)分别为8μg/ml和67μg/ml,前者溶血活性强度约为后者的8.4倍;温度对二者溶血活性影响较大,最大溶血活性都出现在40℃;pH值对二者溶血活性也有影响,在pH8处二者都具有最大的溶血活性,但后者较前者更为敏感。结论:发形霞水母毒素分离产物NV和TOE均具有溶血活性,且前者强于后者;二者溶血活性受浓度、温度和pH值的影响。

蛋白酶抑制剂对霞水母毒素溶血活性的影响

目的研究蛋白酶抑制剂对霞水母毒素溶血活性的影响。方法首先制备霞水母刺丝囊细胞,再利用Mini-Beadbeater组织研磨器破碎细胞提取毒素,然后向获得的霞水母毒素中加入不同种类及剂量的蛋白酶抑制剂,如金属酶抑制剂EDTA、酸性蛋白酶抑制剂Pepstantin A、丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF和Aprotinin,巯基蛋白酶抑制剂Leupeptin,并且测定蛋白酶抑制剂对霞水母毒素溶血活性的影响。结果 EDTA和Pepstantin A能够明显抑制蛋白酶的活性从而增强霞水母毒素的溶血活性,1 mmol.L-1EDTA和4μg.ml-1 Pepstantin A使其溶血率分别从40%上升到93%和5%上升到78%;而PMSF、Aprotinin和Leupeptin却对霞水母毒素溶血活性的影响较小。结论金属蛋白酶抑制剂EDTA和酸性蛋白酶抑制剂Pepstantin A能有效地保护霞水母毒素的溶血活性,为深入研究霞水母毒素提供帮助。