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犬博卡病毒非结构基因NP1多克隆抗体的制备与鉴定 被引量:2
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作者 闫琰 张茜 +3 位作者 马婧 李建宁 张薇 孙玉宁 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期864-869,I0006,共7页
目的:制备犬博卡病毒(MVC)的非结构基因NP1的兔多克隆抗体,并进行特异性鉴定。方法:以MVC的感染性克隆pI-MVC为模板,构建NP1基因的原核表达质粒pGEX-4T-3-NP1,转化大肠杆菌BL21后,在异巯基-1-硫代-β呋喃半乳糖(IPTG)诱导下,表达谷胱甘... 目的:制备犬博卡病毒(MVC)的非结构基因NP1的兔多克隆抗体,并进行特异性鉴定。方法:以MVC的感染性克隆pI-MVC为模板,构建NP1基因的原核表达质粒pGEX-4T-3-NP1,转化大肠杆菌BL21后,在异巯基-1-硫代-β呋喃半乳糖(IPTG)诱导下,表达谷胱甘肽S-转移酶(GST)-NP1蛋白。用亲和层析纯化的融合蛋白免疫大白兔,制备NP1抗血清并用ELISA法测定抗血清效价。采用Western blotting和免疫荧光法检测NP1抗血清的特性。结果:成功构建MVC NP1基因的原核表达质粒pGEX-4T-3-NP1,在大肠杆菌中获得高效表达。表达产物经亲和层析纯化后得到高纯度的NP1融合蛋白,以其免疫大白兔获得NP1多抗血清,ELISA法检测效价达到1∶400 000。Western blotting法及免疫荧光检测,所得抗血清具有较高的效价及特异性。结论:本研究利用原核表达的MVC GST-NP1融合蛋白制备的NP1抗血清效价高、特异性高,为进一步深入研究NP1在MVC感染及致病分子机制中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 犬博卡病毒 NP1基因 多克隆抗体
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犬博卡病毒结构蛋白VP1多克隆抗体的制备及特异性鉴定 被引量:1
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作者 穆乐 孙锦涵 +3 位作者 张健 张淋然 丁彦琴 孙玉宁 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2021年第6期55-61,共7页
为深入研究犬博卡病毒(MVC)结构蛋白VP1及其抗体在MVC感染及致病分子机制中的作用,本研究以先期构建的MVC感染性克隆载体pI-MVC为模板,构建VP1结构蛋白(独特区)原核表达载体pET32a(+)-VP1N,转化于大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导... 为深入研究犬博卡病毒(MVC)结构蛋白VP1及其抗体在MVC感染及致病分子机制中的作用,本研究以先期构建的MVC感染性克隆载体pI-MVC为模板,构建VP1结构蛋白(独特区)原核表达载体pET32a(+)-VP1N,转化于大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达后进行蛋白可溶性分析;用镍柱亲和层析法纯化诱导表达产物,以纯化的VP1N融合蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,获得特异性抗VP1N多克隆抗体;通过ELISA的方法测定VP1N多克隆抗体效价,并采用Western blot和免疫荧光鉴定VP1N抗体的特异性。结果表明:重组蛋白VP1N可高效可溶性表达,分子量约为34 kDa;VP1N融合蛋白免疫兔后,ELISA法测定VP1N多抗效价达1∶1600 000;Western blot结果显示,VP1N多克隆抗体能够与MVC感染靶细胞后的天然VP1蛋白反应;细胞免疫荧光结果显示,该抗体也可与MVC感染WRD细胞中的天然VP1蛋白反应,且发现VP1大量分布于WRD细胞的胞核中。本研究所制备的VP1N抗体具有很好的反应性和特异性,为进一步深入研究VP1蛋白在博卡病毒致病性及感染机制中的研究提供实验基础。 展开更多
关键词 犬博卡病毒 VP1结构蛋白 多克隆抗体 特异性
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Oxymatrine Inhibits Bocavirus MVC Replication, Reduces Viral Gene Expression and Decreases Apoptosis Induced by Viral Infection 被引量:2
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作者 Yanqin Ding Na Li +4 位作者 Jinhan Sun Linran Zhang Jianhui Guo Xueqi Hao Yuning Sun 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2019年第1期78-87,共10页
Oxymatrine(OMT), as the main active component of Sophoraflavescens, exhibits a variety of pharmacological properties,including anti-oxidative, anti-inflammatory, anti-tumor, and anti-viral activities, and currently is... Oxymatrine(OMT), as the main active component of Sophoraflavescens, exhibits a variety of pharmacological properties,including anti-oxidative, anti-inflammatory, anti-tumor, and anti-viral activities, and currently is extensively employed to treat viral hepatitis; however, its effects on parvovirus infection have yet to be reported. In the present study, we investigated the effects of OMT on cell viability, virus DNA replication, viral gene expression, cell cycle, and apoptosis in Walter Reed canine cells/3873 D infected with minute virus of canines(MVC). OMT, at concentrations below 4 mmol/L(no cellular toxicity), was found to inhibit MVC DNA replication and reduce viral gene expression at both mRNA and protein levels, which was associated with the inhibition of cell cycle S-phase arrest in early-stage of MVC infection.Furthermore, OMT significantly increased cell viability, decreased MVC-infected cell apoptosis, and reduced the expression of activated caspase 3. Our results suggest that OMT has potential application in combating parvovirus infection. 展开更多
关键词 OXYMATRINE (OMT) minute virus of canines (mvc) Infection REPLICATION APOPTOSIS
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