Mipu1蛋白在脑星形细胞瘤中的亚细胞定位

目的Mipu1是在脑缺血预处理时表达上调的基因,本研究拟通过观察Mipu1蛋白在脑星形细胞瘤中的亚细胞定位,为进一步探讨其功能提供线索和思路。方法通过加端PCR扩增1.8 kb的Mipu1开放阅读框插入绿色荧光蛋白编码区的3’末端,构建Mipu1与绿色荧光蛋白GFP的融合表达质粒,并通过脂质体将重组质粒导入脑星形细胞瘤中,通过荧光显微镜观察Mipu1蛋白在正常和H2O2刺激时的亚细胞分布。结果成功构建了Mipu1与GFP的融合表达质粒Mipu1-pEGFP-N1,并观察到Mipu1蛋白在正常和H2O2刺激时均定位于细胞核内。结论Mipu1为一核蛋白,结合其蛋白质结构特征,推测其可能为一核转录因子。

Mipu1基因在内毒素血症小鼠组织中的表达研究

Mipu1是本研究室首次克隆的一个核转录因子,其在内毒素血症中的表达改变情况目前尚不清楚.本研究采用real-time PCR方法检测了Mipu1基因在内毒素血症(12 mg/kg,2 h)小鼠心、肝、肺、脾、脑、肠和骨骼肌7个器官组织中的表达改变.结果发现,LPS(12 mg/kg,2 h)处理可促进小鼠肺和脾组织中Mipu1基因表达增高;但可抑制小鼠心、肝、脑、肠和骨骼肌组织中Mipu1基因的表达.Mipu1基因在内毒素血症小鼠各器官中表达的改变可能与其在内毒素血症中的生物学功能密切相关.

过表达MIPU1降低阿霉素所致人胚胎肾HEK293细胞的凋亡

目的探讨过表达MIPU1对阿霉素(Doxorubicin,DOX)所致细胞凋亡的影响及其可能的分子机制,为预防DOX抗肿瘤治疗过程中的毒副作用提供新的思路。方法 1)MTT实验观察DOX处理下过表达MIPU1对细胞存活率的影响;2)Hoechst染色和流式细胞术分析过表达MIPU1对DOX所致细胞凋亡的影响;3)RT-PCR和Western blot分析过表达MIPU1对DOX所致Bcl-2、P53和Bax在mRNA水平和蛋白水平上表达变化的影响。结果过表达MIPU1后,细胞存活率明显升高(P<0.05 vs p EGFP+DOX),凋亡率显著下降(P<0.01 vs p EGFP+DOX),P53和Bax的表达显著下降(P<0.05 vs p EGFP+DOX),而Bcl-2的表达则明显增多(P<0.05 vs p EGFP+DOX)。结论过表达MIPU1能降低DOX引起的HEK293细胞凋亡,可能与抑制P53和Bax的表达同时促进Bcl-2的表达有关。

Mipu1在人脑星形细胞瘤中的表达及临床意义初步探讨

目的研究心肌缺血预适应上调蛋白1(Mipu1)在人脑星形细胞瘤中mRNA及蛋白水平的表达情况,并探讨其临床意义。方法收集24例临床上病理级别分别为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级的脑星形细胞瘤组织标本,应用逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白印迹技术(Western blot)分别检测Mipu1的mRNA和蛋白质表达水平。结果 RT-PCR结果显示Mipu1的mRNA的表达水平随着星形细胞瘤病理级别的升高而上调;相似,Western blot分析结果显示Mipu1蛋白表达水平也随着星形细胞瘤病理级别的升高而上调,差异有显著性(P<0.05)。结论 Mipu1在脑星形细胞瘤中表达上调,其表达水平与星形细胞瘤病理级别成正相关,可作为判别星形细胞瘤分化程度的指标之一。

shRNA干扰MIPU1基因对脑星形细胞瘤U251细胞生物学行为的影响

目的:探讨特异性短发夹RNA(shRNA)干扰心肌缺血预适应上调基因1(myocardial ischemia preconditioning upregulated gene 1,MIPU1)对人脑星形细胞瘤U251细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭能力的影响。方法:采用瞬时转染MIPU1 shRNA干扰质粒,蛋白质印迹检测其干扰效率,MTT法检测各组细胞的增殖情况,Hoechest染色法和caspase-3活性检测细胞凋亡程度,划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力。结果:转染MIPU1shRNA可明显降低MIPU1蛋白的表达(P<0.05);与对照组比较,MIPU1 shRNA组的U251细胞增殖能力下降,凋亡明显增加,细胞迁移及侵袭能力减弱(均P<0.05)。结论:MIPU1 shRNA能有效降低U251细胞中MIPU1蛋白的表达,干扰MIPU1的表达可促进U251细胞凋亡,抑制U251细胞的增殖、迁移及侵袭。

Mipu1和HIF-1α在人脑胶质瘤中表达及相关性分析

[目的]探讨脑胶质瘤标本中Mipu1和HIF-1α表达及其相关性。[方法]胶质瘤患者24例,根据WHO病理分级分低级别组12例(Ⅰ级5例,Ⅱ级7例),高级别组12例(Ⅲ级7例,Ⅳ级5例),以其中10例低级别胶质瘤患者瘤旁部分脑组织作为对照组。对三组标本进行针对Mipu1和HIF-1的免疫组化、实时荧光定量核酸扩增检测和免疫印迹分析检测,对所得得数据进行统计分析。[结果]免疫组化结果显示Mipu1和HIF-1α表达蛋白均主要定位在细胞核内,且有随着胶质瘤病理级别升高而增强表达的趋势。三组标本的Mipu1和HIF-1α的相对mRNA表达量和相对蛋白表达量组间差异有统计学意义(P<0.05);且Mipu1和HIF-1α在胶质瘤中的表达呈正相关(P<0.05)。[结论 ]HIF-1α和Mipu1在胶质瘤中表达升高,且两者表达呈正相关。

MiR-766-3p下调Mipu1表达促进小鼠单核巨噬细胞凋亡

MiR-766-3p可以调控细胞凋亡,但其在动脉粥样硬化中对巨噬细胞的凋亡机制尚不清楚。本研究构建了高脂喂养的ApoE敲除小鼠动脉粥样硬化模型,采用定量PCR检测了动脉粥样硬化组织中miR-766-3p的表达水平。结果发现,miR-766-3p在小鼠动脉粥样硬化组织中表达上调。生物信息学预测发现,Mipu1可能为miR-766-3p调控的潜在靶基因。采用荧光素酶报告基因分析验证了miR-766-3p对Mipu1的调控作用。采用定量PCR和Western blot检测miR-766-3p对Mipu1表达的调控作用,采用流式细胞仪和Western blot检测miR-766-3p调控Mipu1对RAW264.7细胞凋亡的影响。结果发现,miR-766-3p可促进RAW264.7细胞凋亡,其机制可能与其下调Mipu1表达有关。本文初步探索了miR-766-3p对巨噬细胞的凋亡调控在动脉粥样硬化发病中的作用机制,为进一步防治动脉粥样硬化提供了新思路。

氯化钴对H9c2心肌细胞新基因Mipu1表达的影响

目的:研究氯化钴(CoCl2)对大鼠胚胎心脏来源的H9c2心肌细胞中新基因Mipu1表达的影响。方法:利用不同浓度的CoCl2(0、100、200、300、400、500μmol/L)处理H9c2细胞9h,及200μmol/L CoCl2处理H9c2细胞不同的时间(0、6、9、12、24h)后,用RT-PCR和Western Blot分别观察H9c2细胞Mipu1 mRNA和蛋白的表达情况。结果:CoCl2可以诱导H9c2细胞中Mipu1 mRNA和蛋白表达升高,200μM CoCl2处理组的Mipu1的表达水平高于100μM CoCl2处理组,但是更高浓度的CoCl2(>200μM)不能使Mipu1的表达进一步升高。随着CoCl2作用时间的延长,Mipu1的表达逐步升高,在12h达到高峰,但是在24h后下降。结论:CoCl2能够促进H9c2细胞新基因Mipu1的表达,并且具有一定的剂量和时间依赖性。