超临界CO_2萃取益智油及益智油的抗氧化活性

运用超临界CO2分离技术萃取益智仁中的抗氧化性物质,以l,1-二苯基-2-苦基苯肼(DPPH)清除率和过氧化值为检验指标,采用气相色谱-质谱联用技术分析超临界CO2萃取的益智油的化学成分.分析结果表明,在40℃,15MPa下分离萃取的益智油中含有诺卡酮、益智酮A和益智酮B.不同条件萃取的益智油对花生油的抗氧化性顺序为:40℃,15MPa下的萃取油>2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)>35℃,25MPa下的萃取油>50℃,12MPa下的萃取油>35℃,25MPa(乙醇夹带)下的萃取油.超临界CO2萃取所得的益智油对DPPH的清除率明显高于水蒸气萃取油,其中,40℃和15MPa下所得的萃取油对DPPH的清除率最高;高温萃取油对DPPH的清除率有所降低.

益智挥发油的气相指纹图谱的研究

[目的]建立不同产地益智挥发油的气相指纹图谱分析方法,为其质量评价提供参考。[方法]采用气相色谱法测定来自10个不同产地益智挥发油,并用SPSS软件对气相指纹图谱数据进行聚类分析和相似度分析,研究10种不同产地益智挥发油气相指纹图谱的相似性。[结果]10个产地制备的益智精油得率在0.21%-0.96%,以广东阳江产益智产油率最高。各色谱峰的相对保留时间的相对标准偏差为0.02%-1.00%,相对峰面积的为0.6%-2.5%,符合指纹图谱的要求。不同产地的益智挥发油的成分含量相似但个别存在差异。质量不尽相同,海南产益智较好,为地道药材,广东次之,广西较差。[结论]该研究建立的测定益智药材挥发油的气相指纹图谱分析方法准确可靠,可用于药材质量评价。

益智有效抗氧化成分的分离条件的研究

探讨了干柱层析法分离益智渣及益智乙醇提取物的抗氧化成分。实验中采用乙酸乙酯/环己烷(3∶7)、氯仿/甲醇(9∶1)为展开剂依次二次干柱层析分离出抗氧化物质。结果表明,益智渣及益智乙醇提取物均有较强的抗氧化性,益智渣的H2O2清除能力强于益智乙醇提取物。

南药益智果实的总RNA提取方法比较研究

目的筛选从南药益智不同发育时期的果实中提取出高质量RNA的试剂盒。方法以南药益智果实为研究对象,比较了3种Mag Zol TM Reagent,Takara RNAiso plus和RNAprep Pure Plant Kit试剂盒提取方法,利用琼脂糖凝胶电泳、Nano Drop TM 2000分光光度计和Aligent 2100生物分析仪对3种方法提取的总RNA进行质量检测。结果采用RNAprep Pure Plant Kit试剂盒从南药益智不同发育时期果实中提取的RNA电泳条带清晰、RNA完整性好,其纯度(OD260/280)分别为2.04、2.08和2.06;浓度分别为68.12 ng/μl、140.20 ng/μl和181.51 ng/μl。结论试剂盒RNAprep Pure Plant Kit可有效地从富含多酚益智果实中提取高质量RNA,为南药益智的高通量转录组测序等分子生物学研究奠定基础。

海南益智传粉昆虫及其访花行为的初步研究

对海南省种植的益智访花昆虫种类、访花频次、时间及访花行为进行了初步研究。结果表明,益智访花昆虫有4个目(膜翅目、双翅目、鞘翅目、鳞翅目),7个科,13种昆虫,根据其访花频次及访花行为的观察,明确中华蜜蜂和大蜜蜂为益智的主要传粉昆虫。日活动规律观察表明,中华蜜蜂属于双峰型,访花高峰为9:00～9:30和16:00～16:30;大蜜蜂属于单峰型,访花高峰在13:00～13:30。

基于SRAP技术分析海南产南药益智的遗传多样性

目的海南产南药益智为道地药材,为探究海南岛不同产地的南药益智资源的遗传多样性。方法通过对144对SRAP引物进行筛选和优化,获得12对较好的引物,用以对海南岛内15个不同产地的90份样品进行遗传多样性分析。结果SRAP-PCR扩增结果获得总条带数(TNB)为92,多态性条带数(NBP)为82,平均多态率(PPB)为89.1%。再以最佳引物f9-r10对90份益智样品进行SRAP-PCR分析,统计共获得407个条带,多态性条带数为407个,多态性比率为100%。聚类结果分析表明,不同产地益智的遗传相似系数在0.67-1.0之间,在遗传相似系数0.67处90份益智样品被分为Ⅰ和Ⅱ两大类,在遗传相似系数0.77处可分为6个亚类。结论不同产地的南药益智遗传多样性与产地具有一定的相关性,来自五指山的益智遗传多样性最为丰富,为种质资源保护提供理论基础。

益智油雪花膏对小鼠皮肤光老化的保护作用

讨论了皮肤外用益智油对紫外线(UV)照射引起的小鼠光老化皮肤的影响.实验采用清洁级雌性昆明种小鼠28只,随机分成4组:正常对照组(I组)、模型组(II组)、模型+外涂5%益智雪花膏组(III组)、模型+外涂雪花膏组(IV组),每组7只.模拟日光紫外线长期照射,形成皮肤光老化小鼠模型.用组织切片HE染色,观察皮肤结构改变.以生化分析方法测定羟脯氨酸(HYP)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力以及丙二醛(MDA)的含量.结果表明:与II组相比,III组和IV组的HYP含量、SOD活力明显升高(P<0.05),MDA含量明显降低(P<0.05);与IV组相比,III组的HYP含量、SOD活力较高,MDA含量较低.显微镜观察真皮层,III组和IV组均有不同程度的胶原纤维组织增生及多少不等的炎细胞浸润,但III组纤维细胞分化更为成熟,说明细胞修复功能增强.因此,益智油雪花膏对紫外线照射引起的小鼠皮肤光老化具有保护作用.

南药益智SRAP-PCR体系优化及引物筛选

为了建立适用于南药益智的SRAP-PCR体系,并筛选特异性引物用于研究不同地理居群的南药益智的遗传多样性,采集了海南不同地理居群的益智资源,利用植物基因组DNA提取试剂盒提取益智基因组DNA,并检测其纯度和浓度。采用正交试验对SRAP-PCR体系进行优化,最终建立了最优反应体系(总体积为25μL):Taq酶0.5 U,d NTPs 4mmol/L,Mg^(2+)2 mmol/L,引物各2μmol/L,DNA模板10 ng,10×PCR buffer 2.5μL。再利用最优反应体系对144对引物进行筛选,共获得7对特异性引物,其扩增片段的大小均在100~2 000 bp以内且分布较均匀,多态性条带比率皆达85%以上。该研究结果为南药益智遗传多样性的研究奠定了基础。

南药益智ITS-PCR体系的建立与优化

为了建立适合南药益智的ITS-PCR体系来研究不同地理居群益智遗传多样性,本研究利用植物基因组试剂盒法提取益智基因组DNA为模板,采用单因素和正交试验对ITS-PCR过程中的关键影响因素进行优化,并对ITS-PCR产物进行测序鉴定。实验结果表明最佳ITS-PCR反应体系(25μL)为:Taq酶1.0 U,d NTPs 4 mmol/L,Mg2+0.5 mmol/L,引物2.0μmol/L,模板20 ng,10×PCR Buffer(不含Mg2+)2.5μL;最佳扩增程序为:94℃预变性2 min;94℃变性30 s,55℃退火30 s,72℃延伸1 min,共32个循环;最后72℃延伸5 min。采用该最佳体系对益智基因组DNA进行PCR扩增,获得扩增产物经单向测序获得了益智ITS部分序列。建立了稳定的ITS-PCR体系,为研究益智遗传多样性分析奠定了基础。

基于PCR技术的分子标记在南药益智研究中的应用

益智为中国著名南药,其野生资源日渐枯竭,已成为濒危药用植物,致使其种质资源多样性和保护研究显得尤为重要。本综述简要阐述了RAPD、AFLP、SSR和ISSR等4种基于PCR技术的分子标记的基本原理及其优缺点,并总结这些标记技术在南药益智药材鉴定、居群间的亲缘关系、遗传多样性等研究中的应用现状。最后,提出分子标记技术在南药益智研究中存在的主要问题,并对今后研究方向和前景进行展望。

南药益智AFLP-PCR体系的建立与优化

[目的]建立适合南药益智的扩增片段长度多态性(AFLP)扩增体系来研究不同地理居群益智遗传多样性。[方法]利用植物基因组试剂盒法提取高质量的益智基因组DNA,采用单因素和正交试验对AFLP过程中的酶切和PCR相关影响因素进行优化,并对适合益智AFLP分析的引物组合进行筛选。[结果]实验结果表明最佳酶切反应体系:模板DNA 0.6μg,酶量20 U,酶切时间2 h;最佳AFLP-PCR选择性扩增反应体系(总体积为25μL):10×PCR Buffer(不含Mg2+)2.5μL,d NTPs 2μL,Mg2+(25mmol/L)1.5μL,引物(10 pmol/μL)各2.0μL,Taq酶(5 U/ml)0.5μL,模板稀释25倍2μL。利用建立的最佳扩增体系从64对引物中筛选获得8对选择性引物适合益智AFLP分析。[结论]建立了稳定的AFLP-PCR体系,为研究益智遗传多样性的AFLP分析奠定了基础。