LncRNA-NEAT1调控miR-182-5p表达对狼疮性肾炎肾系膜细胞损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)核旁丛组装转录本1(NEAT1)在狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)中通过微小RNA(miR)-182-5p/叉头盒蛋白O1(FoxO1)/β-连环蛋白(β-catenin)轴对肾系膜细胞损伤的影响。方法收集2019年3月至2021年7月凉山州第二人民医院收治的32例LN患者(LN组)外周血和32例体检健康者(健康对照组)外周血,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测外周血单个核细胞中NEAT1以及miR-182-5p、FoxO1、β-catenin mRNA表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-1β含量。采用20%LN患者血清处理肾系膜细胞的方法构建LN肾系膜细胞模型,造模完成后将细胞分为对照组(正常培养,不转染)、模型组(加入5μg/mL脂多糖培养)、si-NC组(转染si-NC后加入5μg/mL脂多糖培养)、si-NEAT1组(转染si-NEAT1后加入5μg/mL脂多糖培养)、si-NEAT1+anti-miR-NC组(共转染si-NEAT1和anti-miR-NC后加入5μg/mL脂多糖培养)、si-NEAT1+anti-miR-182-5p组(共转染si-NEAT1和anti-miR-182-5p后加入5μg/mL脂多糖培养)。qRT-PCR法检测各组细胞NEAT1、miR-182-5p表达水平;ELISA法测定各组细胞炎症因子水平;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组细胞LDH含量;细胞计数试剂盒8(CCK-8)实验检测各组细胞增殖活力;流式细胞仪分析各组细胞凋亡情况;免疫印迹法检测各组细胞FoxO1、β-catenin蛋白表达水平。结果与健康对照组比较,LN组患者外周血单个核细胞中NEAT1、FoxO1、β-catenin mRNA表达水平以及血清中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β含量均显著上升,miR-182-5p表达水平显著下降(P<0.05)。与对照组比较,模型组肾系膜细胞增殖活力、FoxO1和β-catenin蛋白水平以及LDH、TNF-α、IL-6和IL-1β水平均明显增加,miR-182-5p表达水平明显降低(P<0.05)。敲低NEAT1后,细胞增殖活力和炎症反应减弱,FoxO1和β-catenin蛋白表达明显下调(P<0.05);抑制miR-182-5p表达可减轻NEAT1敲低对LN肾系膜细胞模型细胞增殖、炎症因子及FoxO1、β-catenin蛋白表达的影响(P<0.05)。各组细胞间凋亡率无显著变化(P>0.05)。结论敲低NEAT1可通过靶向负调控miR-182-5p表达,抑制LN肾系膜细胞过度增殖,降低炎症反应,其可能与抑制FoxO1/β-catenin通路有关。

LncRNA TUSC7通过调控miR-182/TBX5轴抑制 结直肠癌的增殖迁移和侵袭

目的:探讨长链非编码RNA抑癌候选基因7(long non-coding RNA tumor suppressor candidate 7,LncRNA TUSC7)通过调控微小RNA-182(microRNA-182,miR-182)/T-框蛋白5(T-box5,TBX5)轴对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)增殖、迁移和侵袭的影响。方法:实时荧光定量PCR检测LncRNA TUSC7、miR-182和TBX5在90对CRC腺癌组织及远端正常组织中的表达水平,通过临床样本数据分析三者的相关性,并检测LncRNA TUSC7在人CRC细胞系LoVo、SW1116、CaCO 2、HCT116和SW480以及正常人结肠粘膜细胞系NCM460中的表达。RNA荧光原位杂交实验检测LncRNA TUSC7的亚细胞定位。SW480细胞分10组,敲减TUSC7(shTUSC7)组和敲减对照(shNC)组、过表达TUSC7(oeTUSC7)组和过表达对照(oeNC)组、miR-182过表达(miR-182 mimic)组和过表达对照(NC mimic)组、干涉miR-182(miR-182 inhibitor)组和干涉对照(NC inhibitor)组、同时过表达TUSC7和miR-182(oeTUSC7+miR-182 mimic)组及同时过表达TUSC7、miR-182和TBX5(oeTUSC7+miR-182 mimic+oeTBX5)组,分别进行shTUSC7、shNC、oeTUSC7、oeNC、miR-182 mimic、NC mimic、miR-182 inhibitor、NC inhibitor转染及oeTUSC7+miR-182 mimic共转染和oeTUSC7+miR-182 mimic+oeTBX5共转染。CCK8、克隆形成、流式细胞术和Transwell实验测定LncRNA TUSC7、miR-182和TBX5对SW480细胞活力、增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。双荧光素酶报告基因系统实验、RNA免疫沉淀实验、RNA pull-down实验和Western blot验证LncRNA TUSC7、miR-182和TBX5的相互关系。Kaplan-Meier法进行生存分析。将裸鼠随机分为4组(n=12):shTUSC7组、shNC组、oeTUSC7组和oeNC组。分别于右侧腋窝内皮下接种shTUSC7、shNC、oeTUSC7、oeNC转染的SW480细胞。用于在体评价LncRNA TUSC7对CRC肿瘤生长的影响及生存分析。结果:与癌旁正常组织相比,在CRC组织中,LncRNA TUSC7(1.53±0.84 vs 6.97±3.97)和TBX5(0.58±0.29 vs 3.25±1.51)低表达而miR-182(0.54±0.33 vs 0.09±0.06)高表达(P<0.05),且LncRNA TUSC7与miR-182表达负相关(R2=0.09077)而与TBX5的表达正相关(R2=0.08371),miR-182与TBX5的表达负相关(R2=0.06914;P<0.05)。与NCM460(1.00±0.05)细胞相比,LncRNA TUSC7在LoVo(0.51±0.08)、SW1116(0.41±0.10)、CaCO 2(0.42±0.11)、HCT-116(0.53±0.10)和SW480(0.35±0.07)细胞中均显著低表达(P<0.05),且在SW480细胞中表达最低。LncRNA TUSC7定位在在CRC细胞质中表达。与shNC/oeNC组相比,沉默/过表达LncRNA TUSC7促进/抑制CRC细胞增殖、迁移和侵袭,而减少/增加细胞凋亡(P<0.05)。LncRNA TUSC7可直接靶向miR-182,此外,TBX5是miR-182的一个直接的靶点。从机制上讲,LncRNA TUSC7通过靶向miR-182促进TBX5的表达进而抑制CRC细胞的增殖、迁移和侵袭并促进凋亡。与体外实验结果相一致,LncRNA TUSC7可在体抑制CRC肿瘤的生长。结论:LncRNA TUSC7在CRC组织和细胞中低表达,且LncRNA TUSC7通过调控miR-182/TBX5轴抑制CRC的增殖、迁移和侵袭。

血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平与急性脑梗死患者病情及预后的关系

目的 检测急性脑梗死患者的血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平,并探讨其与患者病情及预后的关系。方法 选取2020年3月至2022年10月安阳市人民医院神经内科收治的136例急性脑梗死患者纳入脑梗死组,另选取本院同期136例体检健康志愿者作为对照组。根据病情程度将脑梗死组患者分为轻度组(n=42)、中度组(n=59)和重度组(n=35)。根据患者90 d随访情况分为预后良好组103例和预后不良组33例。采用qRT-PCR法检测两组受检者的血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平,并比较各组受试者miR-182-5p、miR-372-3p表达水平和美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分。采用Spearman相关性分析急性脑梗死患者血清miR-182-5p、miR-372-3p与NIHSS评分的相关性;采用多因素Logistic回归分析急性脑梗死预后的影响因素;绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析miR-182-5p、miR-372-3p预测急性脑梗死患者预后的价值。结果 脑梗死组患者的血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平分别为0.56±0.16、0.39±0.11,明显低于对照组的0.99±0.23、1.00±0.24,差异均有统计学意义(P<0.05);随着脑梗死患者病情程度的加重,轻度组、中度组、重度组患者的血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平逐渐降低,而NIHSS评分逐渐增加,差异均有统计学意义(P<0.05);经Spearman相关性分析结果显示,急性脑梗死患者血清miR-182-5p、miR-372-3p水平与NIHSS评分均呈负相关(r=-0.483、-0.648,P<0.05);预后良好组患者的血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平分别为0.62±0.17、0.42±0.12,明显高于预后不良组的0.39±0.12、0.30±0.09,差异均有统计学意义(P<0.05);经多因素Logistic回归分析结果显示,miR-182-5p和miR-372-3p低表达以及重度梗死是急性脑梗死预后不良的影响因素(P<0.05);经ROC分析结果显示,血清miR-182-5p、miR-372-3p水平联合预测急性脑梗死预后不良的曲线下面积(AUC)明显大于miR-182-5p单独预测的AUC (Z=1.991,P=0.046)及miR-372-3p单独预测的AUC (Z=2.294,P=0.022)。结论 急性脑梗死患者血清miR-182-5p、miR-372-3p表达降低,两者是急性脑梗死患者不良预后的危险因素,且与病情程度密切相关,可作为急性脑梗死预后的生物标志物。

miR-182-5p促进心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的机制研究

目的:探究miR-182-5p对心肌细胞凋亡的影响,进而以更好的阐明miR-182-5p在心肌梗死中的作用和意义。方法:构建大鼠心肌梗死模型,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)法检测心肌凋亡、实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测miR-182-5p及凋亡相关分子的表达。使用miR-182-5p mimics及inhibitor转染大鼠心肌细胞H9c2,构建缺氧模型,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测心肌细胞活力,Western Blot法检测凋亡相关指标表达水平,半胱氨酰蛋白酶3/7(Caspase-3/7)活性检测试剂盒检测Caspase-3/7的活性。使用pAAV9-CMV腺相关病毒构建miR-182-5p的过表达病毒,通过尾静脉注射至心肌梗死模型小鼠体内,检测AAV9-miR-182-5p对心肌梗死诱导的心肌凋亡水平的影响。结果:大鼠心肌梗死模型中miR-182-5p表达水平减少,且细胞凋亡水平增加。在H9c2心肌缺氧模型中,miR-182-5p可以加重缺氧对心肌细胞活力的抑制,并减少抗凋亡分子B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、增加促凋亡分子Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达,同时对Caspase-3/7的活性有明显的促进作用。而AAV9-miR-182-5p的注射可以显著加重小鼠心肌梗死模型中心肌细胞的凋亡水平。结论:miR-182-5p可以加重心肌梗死下的心肌损伤,其途径是通过促进凋亡来实现的。

LncRNA GAS5通过miR-182-5p/FOXF2轴对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(LncRNA GAS5)调节微小RNA-182-5p(miR-182-5p)/叉头盒蛋白F2(FOXF2)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。方法收集45例确诊为OSCC的癌组织以及癌旁组织,体外培养人口腔上皮细胞系HOEC及人OSCC细胞系CAL-27、HSC-3、SCC-25,qRT-PCR检测组织、细胞中LncRNA GAS5、miR-182-5p、FOXF2的表达;择细胞株CAL-27分为ctrl组、pcDNA组、pcDNA-GAS5组、pcDNA-GAS5+miR-NC组及pcDNA-GAS5+miR-182-5p mimics组,采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western Blot检测癌细胞中FOXF2、bax、Bcl-2、cleaved caspase-3及E-cadherin蛋白表达,双萤光素酶报告实验验证miR-182-5p与LncRNA GAS5、FOXF2的关系。结果与癌旁组织相比,OSCC组织中LncRNA GAS5、FOXF2 mRNA表达降低,miR-182-5p表达升高(P<0.05);CAL-27、HSC-3、SCC-25细胞与HOEC相比,LncRNA GAS5、miR-182-5p、FOXF2表达趋势与OSCC组织内一致,且在CAL-27表达最明显,选择其作为后续实验的细胞株;与ctrl组、pcDNA组比较,pcDNA-GAS5组CAL-27细胞中GAS5、FOXF2 mRNA、细胞凋亡率及BAX、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05),miR-182-5p表达、细胞增殖、迁移和侵袭数及Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);上调miR-182-5p可减弱过表达LncRNA GAS5对CAL-27细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用,也可抑制癌细胞凋亡;LncRNA GAS5靶向负调控miR-182-5p表达,miR-182-5p靶向负调控FOXF2表达。结论上调GAS5可能通过抑制miR-182-5p来增加FOXF2表达,进而抑制CAL-27细胞增殖、迁移及侵袭,促进CAL-27细胞的凋亡。

miR-23a-3p与miR-182在结直肠癌患者外周血中的异常表达及其临床意义

目的探讨miR-23a-3p与miR-182在结直肠癌患者外周血中的异常表达及其临床意义。方法选取2021年6月至2022年6月我院收治的30例结直肠癌患者为观察A组,30例结直肠良性肿瘤患者为观察B组,同期30名健康体检者为对照组。采集观察A组、观察B组治疗前空腹静脉血以及对照组体检时空腹静脉血,使用实时荧光定量PCR仪测定miR-23a-3p、miR-182水平;比较miR-23a-3p、miR-182单独及联合检测对结直肠癌的诊断效能;分析结直肠癌临床因素与miR-23a-3p、miR-182的关系。结果观察A组、观察B组的miR-23a-3p、miR-182水平高于对照组(P<0.05);观察A组的miR-23a-3p、miR-182水平高于观察B组(P<0.05)。miR-23a-3p、miR-182联合检测诊断结直肠癌的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、曲线下面积(AUC)大于miR-23a-3p、miR-182单独检测。不同家族史、淋巴结转移、病灶大小、临床分期的结直肠癌患者miR-23a-3p、miR-182水平比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论家族史、淋巴结转移、病灶大小及临床分期与结直肠癌患者miR-23a-3p、miR-182水平有密切联系,且miR-23a-3p与miR-182检测在结直肠癌临床诊断中均具备一定价值,二者联合应用可提高结直肠癌早期诊断的准确性。

lncRNA SNHG16通过miR-182-5p/PPARG轴调控类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和侵袭

目的:确定小核仁RNA宿主基因16(SNHG16)在类风湿关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)中的表达及其在RA发展中的作用。方法:RT-qPCR用于测量SNHG16、miR-182-5p和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARG) mRNA表达;双荧光素酶实验用于检测SNHG16、miR-182-5p和PPARG mRNA的相互作用关系;EdU和Transwell用于检测细胞增殖、侵袭;Western blot用于检测PPARG蛋白水平。结果:RA滑膜组织和人RA-FLS系(HFLS-RA)中SNHG16和PPARG mRNA表达上调,miR-182-5p表达下调。SNHG16负靶向调节miR-182-5p表达,正调节PPARG(miR-182-5p靶标)表达。沉默SNHG16抑制HFLS-RA增殖、侵袭;下调miR-182-5p部分逆转SNHG16沉默对细胞增殖、侵袭的抑制作用;过表达PPARG部分逆转miR-182-5p上调对HFLS-RA增殖、侵袭的抑制作用。结论:沉默SNHG16靶向miR-182-5p/PPARG轴抑制HFLS-RA的增殖、侵袭。

宫颈癌患者血清miR-182和miR-21表达与人乳头瘤病毒感染的相关性

目的探究宫颈癌患者血清miR-182和miR-21表达与人乳头瘤病毒(HPV)感染的相关性。方法选择2020年4月至2023年4月行宫颈活检的120例患者为研究对象,将确诊宫颈癌患者作为宫颈癌组(n=49),确诊宫颈上皮内瘤变(CIN)患者作为CIN组(n=39),确诊宫颈炎患者作为宫颈炎组(n=32)。采用实时定量反转录聚合酶链反应检测血清miR-182、miR-21水平;采用聚合酶链反应扩增技术和第二代杂交捕获法检测HPV-DNA和HPV E6/E7 mRNA载量;采用多因素Logistic回归分析影响宫颈癌发生的因素;采用Spearman法分析宫颈癌患者血清miR-182和miR-21水平与HPV感染的相关性。结果宫颈癌组血清miR-182和miR-21水平均高于CIN组和宫颈炎组,CIN组血清miR-182和miR-21水平均高于宫颈炎组(P<0.05);宫颈癌组、CIN组和宫颈炎组HPV-DNA阳性表达率和HPV E6/E7 mRNA高载量率依次降低(P<0.05);宫颈癌患者血清miR-182和miR-21水平与HPV-DNA表达和HPV E6/E7 mRNA载量呈正相关(P<0.01);miR-182、miR-21、HPV-DNA表达、HPV E6/E7 mRNA载量均是宫颈癌发生的独立危险因素(P<0.01)。结论宫颈癌患者血清miR-182、miR-21水平升高,与宫颈HPV感染密切相关。

基于SATB2/nox4信号通路探讨miR-182-5p对结肠癌细胞增殖和迁移的调控作用

目的 基于特定富含AT碱基DNA序列结合蛋白(SATB)2/还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(nox)4信号通路探讨miR-182-5p对结肠癌细胞增殖和迁移的调控作用。方法 收集经手术切除的结肠癌及癌旁组织各43例,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分析癌组织及癌旁组织中miR-182-5p与SATB2相对表达,分析miR-182-5p与SATB2在结肠癌中的相关性。SW480细胞分为对照组、NC-mimics组、miR-182-5p-mimics组、miR-182-5p-mimics+pcDNA-NC组、miR-182-5p-mimics+pcDNA-SATB2组、NC-inhibitor组、miR-182-5p-inhibitor组并进行相应转染。TargetScanHuman预测、双荧光素酶报告基因检测、染色质免疫共沉淀分析miR-182-5p与SATB2的靶向调节关系。噻唑蓝(MTT)法、划痕实验检测对照组、NC-mimics组、miR-182-5p-mimics组、NC-inhibitor组、miR-182-5p-inhibitor组细胞增殖、迁移能力;qRT-PCR、Western印迹法检测对照组、NC-mimics组、miR-182-5p-mimics组、NC-inhibitor组、miR-182-5p-inhibitor组细胞SATB2、nox4、E-钙黏蛋白(cadherin)、波形蛋白(Vimentin)mRNA与蛋白表达情况。体内异种移植实验检测对照组、NC-mimics组、miR-182-5p-mimics组、miR-182-5p-mimics+pcDNA-NC组、miR-182-5p-mimics+pcDNA-SATB2组肿瘤发展能力,免疫组化检测肿瘤SATB2、nox4表达情况。结果 与癌旁组织相比,结肠癌组织miR-182-5p表达量明显升高,SATB2表达量明显降低(P<0.05),miR-182-5p与SATB2水平呈负相关(P<0.001)。miR-182-5p与SATB2存在结合位点,过表达SATB2导致miR-182-5p与SATB2的结合能力明显下降。与对照组、NC-mimics组、NC-inhibitor组相比,miR-182-5p-mimics组细胞增殖能力明显加强,迁移率明显升高,SATB2、E-cadherin mRNA与蛋白表达量明显下降,nox4、Vimentin mRNA与蛋白表达量明显升高(P<0.05);miR-182-5p-inhibitor组细胞增殖能力明显降低,迁移率明显下降,SATB2、E-cadherin mRNA与蛋白表达量明显升高,nox4、Vimentin mRNA与蛋白表达量明显下降(P<0.05)。与对照组、NC-mimics组相比,miR-182-5p-mimics组、miR-182-5p-mimics+pcDNA-NC组肿瘤体积、质量明显更大,SATB2表达量明显降低,nox4表达量明显升高(P<0.05);miR-182-5p-mimics+pcDNA-SATB2组肿瘤体积、质量明显更小,SATB2表达量明显上升,nox4表达量明显下降(P<0.05)。结论 miR-182-5p对结肠癌细胞的增殖和迁移能力具有促进作用,能够降低SATB2表达并影响SATB2/nox4信号通路及其相关蛋白,SATB2能够反向调控miR-182-5p表达。

葛根芩连汤调节lncRNA-TUSC7/miR-182/TBX5信号轴对结直肠癌发生发展的作用机制研究

目的探究葛根芩连汤调节lncRNA-TUSC7/miR-182/TBX5信号轴对结直肠癌(CRC)发生发展的作用机制。方法1)体外实验:将培养好的HCT-116细胞分为对照组、oe-NC组、oe-TUSC7组、inhibitor-NC组、miR-182 inhibitor组、oe-TUSC7+miR-NC组、oe-TUSC7+miR-182 mimic组。RTqPCR检测lncRNA-TUSC7、miR-182、TBX5 mRNA的表达;CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting检测细胞TBX5、Ki67、Caspase-9蛋白表达水平;双萤光素酶报告基因实验检测miR-182与lncRNA-TUSC7和TBX5的靶向关系。2)体内实验:皮下注射DMH建立大鼠CRC模型,将大鼠分为模型组、葛根芩连汤组、葛根芩连汤+LV-NC组、葛根芩连汤+LV-shTUSC7组,另设对照组(无处理)。测量肿瘤数量、质量和体积;RT-PCR检测肿瘤组织TUSC7、miR-182、TBX5 mRNA的表达;Western blotting检测TBX5、Ki67、Caspase-9蛋白表达。结果1)体外实验:与对照组和oe-NC组相比,oe-TUSC7组细胞中TUSC7、TBX5 m RNA表达、凋亡率、TBX5、Caspase-9蛋白表达显著升高,miR-182表达、OD450值(24、48 h)、Ki67表达显著降低(P<0.05);与inhibitor-NC组相比,miR-182 inhibitor组细胞中TBX5 mRNA表达、凋亡率、TBX5、Caspase-9蛋白表达显著升高,miR-182表达、OD450值(24、48 h)、Ki67表达显著降低(P<0.05);与oe-TUSC7+miR-NC组相比,oe-TUSC7+miR-182 mimic组细胞中TBX5 m RNA表达、凋亡率、TBX5、Caspase-9蛋白表达显著降低,miR-182表达、OD450值(24、48h)、Ki67表达显著升高(P<0.05);双萤光素酶报告基因实验验证miR-182与TUSC7和TBX5存在靶向调控关系。2)体内实验:与对照组相比,模型组大鼠肿瘤数量、肿瘤质量和肿瘤体积、miR-182表达、Ki67蛋白表达显著升高,肿瘤组织中TUSC7和TBX5 m RNA表达、TBX5、Caspase-9蛋白表达显著降低(P<0.05);与模型组相比,葛根芩连汤组大鼠肿瘤数量、肿瘤质量和肿瘤体积、肿瘤组织miR-182表达、Ki67表达显著降低,肿瘤组织TUSC7和TBX5 mRNA表达、TBX5、Caspase-9蛋白表达显著升高(P<0.05);与葛根芩连汤组和葛根芩连汤+LV-NC组相比,葛根芩连汤+LV-shTUSC7组大鼠肿瘤数量、肿瘤质量和肿瘤体积、miR-182表达、Ki67表达显著升高,肿瘤组织中TUSC7和TBX5 m RNA表达、TBX5、Caspase-9蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论葛根芩连汤可能通过上调TUSC7,海绵化miR-182,从而促进TBX5表达,进而抑制CRC细胞的生长。

miR-182、β2-MG、TGF-β1、CTGF对老年慢性肾衰竭病情发展的预测价值

目的:探讨结缔组织生长因子(CTGF)、β2-微量球蛋白(β2-MG)、miR-182、血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、对老年慢性肾衰竭(CRF)病情发展的预测价值。方法:回顾性分析2021年1月~2022年1月贵阳市第二人民医院300例老年CRF患者临床资料并设置为CRF组,另选取同期300例健康体检者临床资料设置为对照组。比较CRF组与对照组入选者的血清miR-182、β2-MG、TGF-β1、CTGF表达水平;比较不同临床特征的CRF患者血清miR-182、β2-MG、TGF-β1、CTGF表达差异。结果:CRF组的血清miR-182、β2-MG、TGF-β1、CTGF水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同性别CRF患者的血清miR-182、β2-MG、TGF-β1、CTGF水平差异无统计学意义(P>0.05)。年龄>70岁、有水肿情况、UAER>100μg/min、尿毒症期、合并血管钙化、合并继发性甲状旁腺亢进CRF患者的血清miR-182、β2-MG、TGF-β1、CTGF水平高于其他CRF患者,差异有统计学意义(P<0.05)。CRF患者的血清miR-182、β2-MG、TGF-β1、CTGF水平与Scr、UAER呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:血清miR-182、β2-MG、TGF-β1、CTGF指标在老年CRF病情发展中的预测价值较高,能够为CRF的诊断、治疗、病情评估提供科学参考依据。

丙泊酚通过miR-182-5p介导HIF-1α通路对缺氧诱导胎盘滋养细胞生物学活性的影响

目的 探讨丙泊酚通过miR-182-5p介导HIF-1α通路对缺氧诱导胎盘滋养细胞生物学活性的影响。方法 采用缺氧诱导体外培养的HTR-8/SVneo细胞,丙泊酚干预,采用CCK-8检测细胞的活力、Transwell测定细胞迁移和侵袭,TUNEL检测细胞凋亡。通过qRT-PCR测量miR-182-5p和HIF-1α相对mRNA表达水平。Western blot检测相关通路蛋白表达水平。结果 与对照组比较,缺氧组细胞迁移和侵袭能力降低,细胞凋亡率升高(P <0.05),miR-182-5p、MMP-9表达水平降低,HIF-1α、VEGF表达水平升高(P <0.05)。与缺氧组比较,丙泊酚干预后,细胞迁移、侵袭能力恢复,细胞凋亡率降低(P <0.05),miR-182-5p、MMP-9表达水平升高,HIF-1α、VEGF表达水平降低(P <0.05)。转染抑制剂后则逆转了丙泊酚的治疗作用。结论 丙泊酚通过调节miR-182-5p/HIF-1α轴改善缺氧诱导的HTR-8/SVneo细胞毒性。

大黄附子汤加减方对慢性肾衰竭患者血清miR-30a、miR-182表达水平的影响

目的:观察大黄附子汤加减方对慢性肾衰竭(CRF)患者血清微小RNA-30a(miR-30a)、微小RNA-182(miR-182)表达水平的影响。方法:选取109例CRF患者,按随机数字表法分为对照组55例及观察组54例,观察组脱落2例,纳入52例,对照组脱落3例,纳入52例。对照组采取常规治疗,观察组在对照组基础上应用大黄附子汤加减方治疗。2组均治疗12周。比较2组临床疗效及不良反应发生情况,比较2组治疗前后肾功能指标值[血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、肾小球滤过率(eGFR)]、肾纤维化指标值[Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)、层黏蛋白(LN)]、血清miR-30a、miR-182表达水平的变化,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析miR-30a、miR-182表达水平对治疗效果的预测价值,采用Pearson检验分析miR-30a、miR-182表达水平与eGFR的相关性。结果:观察组临床疗效总有效率为86.54%,对照组临床疗效总有效率为67.31%,2组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,2组血清BUN、SCr水平均较治疗前下降(P<0.05),eGFR水平较治疗前升高(P<0.05);观察组血清BUN、SCr均低于对照组(P<0.05),eGFR水平高于对照组(P<0.05)。治疗后,2组血清PC-Ⅲ、LN水平均较治疗前下降(P<0.05),观察组血清PC-Ⅲ、LN水平均低于对照组(P<0.05)。治疗后,2组miR-30a、miR-182表达水平均较治疗前降低(P<0.05),观察组miR-30a、miR-182表达水平均低于对照组(P<0.05)。观察组治疗总有效45例、无效7例。与有效者比较,无效者入院时血清miR-30a、miR-182表达水平均升高(P<0.05)。ROC曲线显示,血清miR-30a、miR-182联合预测治疗效果的AUC、灵敏度、特异度依次为0.808、85.71%、75.60%。Pearson检验显示,观察组miR-30a、miR-182表达水平与eGFR呈负相关(P<0.05)。用药过程中,2组未见严重不良反应。结论:大黄附子汤加减方治疗CRF的临床疗效较好,有助于促进肾功能恢复,延缓肾纤维化进展,下调血清miR-30a、miR-182表达水平,且miR-30a联合miR-182检测对于治疗效果有较高的预测价值。

LncRNA SLC16A1-AS1靶向调控miR-182对乳腺癌BT549细胞增殖能力的影响

目的探讨LncRNA SLC16A1-AS1对miR-182的靶向调控作用及对乳腺癌BT549细胞增殖能力的影响。方法使用GEPIA2工具分析TCGA数据库中LncRNA SLC16A1-AS1在三阴型乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)中的差异性表达,应用Kaplan-MeieRPlotter数据库进行生存分析。利用RegRNA2和miRanda数据库预测LncRNA SLC16A1-AS1的潜在靶标miRNAs。用qRT-PCR检测LncRNA SLC16A1-AS1在TNBC组织及细胞系(BT549、BT20、MDA-MB-231及MDA-MB-468)中的表达。利用双荧光素酶活性测定及RNA免疫沉淀实验验证LncRNA SLC16A1-AS1与miR-182的结合力。用CCK-8及集落形成实验检测不同处理组BT549细胞增殖能力的变化。结果生物信息学分析结果显示,TNBC组织中LncRNA SLC16A1-AS1的表达水平显著低于正常组织(P<0.001),与预后良好相关(P<0.001),LncRNA SLC16A1-AS1与miR-182之间存在结合位点。LncRNA SLC16A1-AS1在63例TNBC组织中的表达水平显著低于瘤旁组织(7.94%vs 63.49%,P<0.001),在TNBC细胞系中的表达水平亦显著低于正常乳腺上皮细胞系(P<0.01)。在BT549细胞中过表达miR-182可显著降低LncRNA SLC16A1-AS1-WT载体的荧光酶素活性,RNA免疫沉淀实验显示,AGO2同时富集LncRNA SLC16A1-AS1及miR-182(P<0.01)。与对照组相比,过表达LncRNA SLC16A1-AS1显著降低BT549细胞的增殖活性并减少集落形成数量,共表达LncRNA SLC16A1-AS1与miR-182可恢复BT549细胞的增殖能力(P<0.01)。结论LncRNA SLC16A1-AS1在TNBC中低表达,且通过靶向调控miR-182在体外抑制TNBC细胞的增殖能力,LncRNA SLC16A1-AS1/miR-182轴有望成为TNBC治疗的潜在靶点。

芒柄花黄素调控miR-182/FOXO3轴对子宫内膜癌细胞迁移及侵袭的影响

目的探讨芒柄花黄素(FM)对子宫内膜癌细胞迁移及侵袭的影响,以及其作用机制。方法用0、12.5、25.0、50.0、100、200μmol/L FM处理人子宫内膜癌细胞株Ishikawa细胞48 h,流式细胞术检测细胞凋亡率;取生长状态良好的Ishikawa细胞,分别用25.0、50.0、100μmol/L FM处理,并命名为FM-L组、FM-M组、FM-H组,另取未处理的Ishikawa细胞作为对照组;利用细胞转染技术对处于对数生长期的Ishikawa细胞进行转染,分为miR-182 mimics组、miR-NC组、miR-182 inhibitor组、miR-NC inhibitor组、pcDNA-FOXO3组、pcDNA组,将miR-NC、miR-182 mimics转染Ishikawa细胞后再用100μmol/L FM处理,记为FM+miR-NC组、FM+miR-182 mimics组;Transwell测定细胞迁移及侵袭;Western Blot检测细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、叉头转录因子O亚型3(FOXO3)蛋白表达;RT-PCR检测细胞中miR-182表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-182与FOXO3的靶向关系。结果与0μmol/L FM相比,12.5μmol/L、25.0μmol/L、50.0μmol/L、100μmol/L、200μmol/L FM均可促进Ishikawa细胞凋亡,且25.0μmol/L、50.0μmol/L、100μmol/L FM对Ishikawa细胞凋亡的促进作用最显著;与对照组比较,FM-L组、FM-M组和FM-H组的Ishikawa细胞迁移及侵袭数目、MMP-2及MMP-9蛋白和miR-182表达水平显著降低,FOXO3蛋白表达水平显著升高(P<0.05),且FM浓度越高,对应的变化趋势越明显;miR-182可靶向负调控FOXO3的表达;抑制miR-182表达或上调FOXO3表达均可抑制Ishikawa细胞迁移及侵袭数目和MMP-2、MMP-9蛋白表达(P<0.05);miR-182过表达逆转了FM(100μmol/L)对Ishikawa细胞迁移及侵袭的作用。结论FM可通过抑制miR-182并上调FOXO3的表达来抑制Ishikawa细胞的迁移和侵袭。

miR-182对牛乳腺上皮细胞中乳糖合成的影响

micro RNAs(miRNAs)是一类在生物基因组中存在的经典的非编码蛋白的内源性RNA基因(non-coding RNAs,nc RNA),本实验将以健康的处于泌乳期的中国荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞(Dairy cow mammary epithelial cells,DCMECs)为细胞模型,探究bta-miR-182对DCMECs中乳糖合成的调节作用。首先通过在线生物学信息网站预测miR-182与编码细胞上葡萄糖转运关键蛋白GLUT1的基因SLC2A1可能存在靶向结合关系,并通过双荧光素酶实验进行验证。其次采用脂质体转染技术体外瞬时转染miR-182 mimics进入DCMECs中,通过实时荧光定量PCR及western blotting技术,检测SLC2A1基因表达及GLUT1蛋白表达水平的变化。再收集细胞培养上清液,通过牛乳糖酶联检测试剂盒检测奶牛乳腺上皮细胞中乳糖含量水平的变化。实验结果显示mi R-182对奶牛乳腺上皮细胞中的乳糖的合成有明显影响作用,即miR-182对SLC2A1的表达具有明显的靶向负调控作用,且对DCMECs中乳糖的合成具有显著抑制作用,说明miR-182通过靶向调节SLC2A1的表达对奶牛乳腺上皮细胞中乳糖的合成进行负调控。

社区获得性肺炎患者淋巴细胞减少与血清中miR-182、miR-126水平变化的相关性研究

目的探讨社区获得性肺炎患者淋巴细胞减少与血清中miR-182、miR-126水平变化的相关性研究。方法选取2019年10月至2020年10月在本院呼吸内科住院的社区获得性肺炎患者153例为研究对象,根据患者入院当日血培养外周血淋巴细胞计数将患者分为非淋巴细胞减少组(淋巴细胞计数≥1.0×10^(9),n=104)和淋巴细胞减少组(淋巴细胞计数<1.0×10^(9),n=42)。收集患者的一般资料、炎症指标,RTPCR检测miR-182、miR-126的水平,采用Spearman相关分析分析miR-182、miR-126与其他炎症相关指标的相关性。结果淋巴细胞减少组患者急性生理功能和慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)、肺炎严重度评分(PSI)、中症、重症患者比率和死亡患者均明显高于非淋巴细胞减少组,差异有显著性(P<0.05);淋巴细胞减少组患者降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、白细胞、中粒细胞百分比、中粒细胞绝对值均明显高于非淋巴细胞减少组,差异有显著性(P<0.05);淋巴细胞减少组患者的血清中miR-182的相对表达明显高于非淋巴细胞减少组(P<0.05);淋巴细胞减少组患者的miR-126的相对表达显著低于非淋巴细胞减少组(P<0.05);与轻症患者相比,中症和重症患者血清中miR-182水平明显升高(P<0.05),其中重症患者血清中miR-182水平最高(P<0.05);中症和重症患者血清中miR-126水平显著降低(P<0.05),其中重症患者血清中miR-126水平最低(P<0.05);miR-182与APACHEⅡ评分、PSI评分、PCT、CRP、白细胞、中粒细胞百分比、中粒细胞绝对值呈正相关,miR-126与APACHEⅡ评分、PSI评分、PCT、CRP、白细胞、中粒细胞百分比、中粒细胞绝对值呈负相关(P<0.05);重症、PCT、CRP、中粒细胞百分比、中粒细胞绝对值、miR-182和miR-126是社区获得性肺炎患者淋巴细胞减少的影响因素(P<0.05)。结论社区获得性肺炎患者中淋巴细胞减少者,miR-182的表达升高,miR-126的表达降低,且与疾病炎症程度和炎症指标存在一定的相关性,可作为评估患者病情严重程度的标志物。

血清miR-204、miR-182对子痫前期患者的预测价值

目的探讨与分析血清miR-204、miR-182对子痫前期(PE)患者的预测价值。方法选取在本院建档分娩的子痫前期孕妇110例作为子痫前期组,同期选择在本院建档分娩的正常孕妇110例作为对照组。对所有孕妇进行血清miR-204、miR-182相对表达水平检测,调查新生儿预后并进行预测分析。结果子痫前期组的血清miR-204、miR-182相对表达水平明显高于对照组(P<0.05)。所有孕妇都顺利分娩并存活,子痫前期组的新生儿1 min Apgar评分与5 min Apgar评分都显著低于对照组(P<0.05)。在子痫前期中,Pearson相关分析显示血清miR-204、miR-182相对表达水平与新生儿1 min Apgar评分、5 min Apgar评分都存在相关性(P<0.05)。logistic回归分析显示,血清miR-204、miR-182相对表达水平为导致子痫前期发生的重要因素(P<0.05)。结论子痫前期孕妇多存在血清miR-204、miR-182的高表达,也多伴随有新生儿Apgar评分降低,血清miR-204、miR-182相对表达水平为导致子痫前期发生的重要因素,与新生儿Apgar评分也存在相关性。

miR-182-5p靶向TRIM52逆转卵巢癌SKOV3细胞对顺铂耐药的机制

目的研究miR-182-5p靶向三结构域蛋白52(TRIM52)对卵巢癌SKOV3细胞顺铂(CDDP)耐药的影响。方法采用qRT-PCR法测定卵巢癌SKOV3细胞中miR-182-5p水平。以卵巢癌SKOV3细胞作为研究对象,在细胞中转染miR-182-5p mimics,给予CDDP处理(记为SKOV3/CDDP细胞),采用MTT、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡,Transwell小室测定细胞迁移和侵袭,Western blot测定基质金属蛋白酶9(MMP-9)、C-Caspase-3蛋白表达。在线靶基因预测软件预测miR-182-5p和TRIM523’UTR端互补结合,使用荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。将TRIM52过表达载体和miR-182-5p mimics共转染到卵巢癌SKOV3/CDDP细胞中,检测细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移情况。结果卵巢癌SKOV3/CDDP细胞中miR-182-5p水平低于卵巢癌SKOV3细胞(P<0.001)。miR-182-5p mimics、CDDP和二者联合处理后的卵巢癌SKOV3/CDDP细胞增殖、迁移和侵袭能力均下降,细胞凋亡增多(P<0.001),细胞中MMP-9蛋白表达减少,C-Caspase-3蛋白表达增多(P<0.001)。miR-182-5p靶向抑制TRIM52表达,TRIM52过表达载体可以逆转miR-182-5p mimics联合CDDP对卵巢癌SKOV3/CDDP细胞增殖、迁移、侵袭抑制作用和凋亡促进作用。结论miR-182-5p靶向TRIM52抑制卵巢癌SKOV3/CDDP细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,提高细胞CDDP敏感性。

MiR-182模拟物提高1型糖尿病小鼠的心脏功能

目的探讨miR-182模拟物对1型糖尿病小鼠心脏功能的影响及可能作用机制。方法 40只8周龄雄性C57小鼠随机分为正常对照组(n=5),miR-182模拟物对照组(n=5),1型糖尿病组(n=15),1型糖尿病+miR-182模拟物治疗组(n=15)。腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立1型糖尿病动物模型。实验于8周末结束,采用小动物用高分辨超声仪测量小鼠心脏功能;运用透射电镜观察心肌组织超微结构改变;利用real-time PCR技术检测心肌组织β-肌球蛋白重链(β-MHC),α-肌球蛋白重链(α-MHC),心房钠尿肽(ANP),I型(Col I)和III型胶原(Col III)mRNA及miR-182 mRNA的表达含量。结果 1miR-182模拟物可改善1型糖尿病小鼠的心脏功能,增加心脏射血分数及左室短轴缩短率(P<0.01);2miR-182模拟物可降低糖尿病小鼠心肌组织ANP、Col I、Col III的表达及β/a-MHC比值(P<0.01);3miR182模拟物可改善1型糖尿病小鼠心肌超微结构变化,减轻自噬。结论MiR-182模拟物能改善1型糖尿病小鼠的心脏功能,其机制可能与减轻心肌肥大和心肌纤维化,减轻线粒体结构损伤及减轻自噬有关。