miR-208b-3p通过抑制线粒体基因表达加重心力衰竭小鼠能量代谢障碍

目的探究miR-208b-3p对主动脉弓缩窄(transverse aortic constriction,TAC)诱导的心力衰竭小鼠能量代谢的作用及机制。方法将24只小鼠按照随机数字表法分为假手术组(Sham组,n=6)和手术组(n=18)。手术组采用TAC建立心力衰竭模型;假手术组采用TAC相同手术方式,但不结扎主动脉弓。于TAC术后第2周再随机分为Antagomir组(n=6)、Antagomir-NC组(n=6)及TAC组(n=6),Antagomir组、Antagomir-NC组尾静脉分别注射miR-208b-3p antagomir(800μg)及miR-208b-3p antagomir阴性对照(800μg)试剂,每周2次,连续4周。术后第6周行超声心动图评估各组小鼠心功能。HE染色及天狼星红染色观察小鼠心肌组织病理学形态。ATP检测试剂盒检测各组小鼠心肌组织ATP水平。RT-qPCR检测小鼠心肌组织miR-208b-3p、线粒体基因(ND1、ND2、ND3、ND4、ND4L、ND5、ND6、CO1、CO2、CO3、CYTB、ATP6、ATP8)及POLRMT、12SrRNA的表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-208b-3p与潜在靶基因POLRMT的相互结合作用。Western blot检测心肌组织POLRMT及ND1、CO2、CYTB、ATP8蛋白表达水平。结果与Sham组相比,TAC组小鼠心肌miR-208b-3p表达显著增加(P<0.05)。超声检测结果显示,Antagomir组小鼠心脏的射血分数、收缩与舒张功能较TAC组明显改善(P<0.05)。组织切片染色提示,Antagomir组小鼠的心肌细胞肥大、排列紊乱、心肌间质炎细胞浸润等有明显改善(P<0.05)。与TAC组相比,Antagomir组ATP水平明显升高(P<0.05);POLRMT及线粒体基因转录产物(12SrRNA和13个线粒体基因编码多肽)表达量均显著升高(P<0.05),但SDHA、SDHB无变化。双荧光素酶报告基因实验显示miR-208b-3p与POLRMT的CDS区有结合作用。Antagomir组小鼠心肌组织POLRMT、ND1、CO2、CYTB、ATP8蛋白水平表达较TAC组显著增加(P<0.05)。结论miR-208b-3p可通过靶向POLRMT抑制线粒体基因的表达,加剧线粒体能量代谢障碍,并加重心力衰竭小鼠心功能不全及心室重塑。

麝香保心丸联合瑞替普酶治疗急性心肌梗死的效果及对血清miR-208a、miR-208b表达的影响

目的探讨麝香保心丸联合瑞替普酶治疗急性心肌梗死(Acute myocardial infarction,AMI)的效果及对血清miR-208a、miR-208b表达的影响。方法采用前瞻性随机对照研究方法选择2019年8月—2021年5月医院AMI患者108例,以计算机生成的随机数字表将患者分为联合组(54例)、对照组(54例)。常规治疗基础上,对照组给予瑞替普酶,联合组给予麝香保心丸联合瑞替普酶,均治疗2周。对比两组疗效与治疗前、治疗2周后心功能[左室舒张末期容积(Left ventricular end-diastolic volume,LVEDV)、左室收缩末期容积(Left ventricular end-systolic volume,LVESV)、左室射血分数(Left ventricular ejection fraction,LVEF)]、血清氧化应激指标[超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(Malonaldehyde,MDA)]、miR-208a、miR-208b、血液流变学指标(血浆黏度、全血黏度低切、全血黏度高切)水平,统计两组治疗期间主要心血管不良事件(Majoradverse cardiac events,MACE)发生率。结果经治疗,联合组总有效率(92.59%,50/54)高于对照组(75.93%,41/54)(P<0.05);两组治疗2周后LVEDV、LVESV水平较治疗前降低,且联合组低于对照组,LVEF水平较治疗前升高,且联合组高于对照组(P<0.05);两组治疗2周后血清SOD较治疗前增高,且联合组高于对照组,血清MDA、miR-208a、miR-208b与血浆黏度、全血黏度低切、全血黏度高切水平较治疗前降低,且联合组低于对照组(P<0.05);治疗期间,联合组MACE发生率(5.56%,3/54)低于对照组(18.52%,10/54)(P<0.05)。结论应用麝香保心丸联合瑞替普酶治疗AMI可提升心功能,减轻氧化应激反应,改善血液流变学情况,降低miR-208a、miR-208b水平,减少治疗期间MACE发生,疗效显著。

急性冠脉综合征患者血浆miR-208b和miR-145的表达水平及临床意义

miRNA是一类长度为18～25nt的小分子非编码单链RNA，广泛存在于真核细胞中，能通过降解靶mRNA或者抑制其翻译，调节细胞增殖、分化与凋亡，参与个体发育、机体代谢以及肿瘤发生、发展等过程^[1]。最新研究表明，

急性心肌梗死患者体内miR-208表达与心肌损伤、血小板活化的相关性分析

目的分析急性心肌梗死(AMI)患者血液miR-208表达变化与心肌损伤、血小板活化的相关性。方法选择2014年6月—2017年12月四川大学华西医院心脏大血管外科确诊为AMI的患者64例作为AMI组,另取同期进行健康体检的志愿者52例作为对照组。测定2组对象血浆miR-208a、miR-208b的表达量以及血清心肌损伤标志物、血小板活化指标的含量。结果与对照组比较,AMI组患者血浆miR-208a的表达量以及血清cTnI、CK-MB、MDA、ET-1、P-selectin、PAC-1、TXB2、PAF、Lp-PLA2的含量显著升高(t/P=31. 309/0. 000、50. 682/0. 000、40. 876/0. 000、36.484/0. 000、36. 342/0.000、33. 857/0. 000、22. 940/0. 000、20. 305/0. 000、23. 464/0. 000、11.698/0. 000),而血浆miR-208b的表达量无显著变化(t/P=1. 607/0.111);AMI组患者血浆miR-208a的表达量与cTnI、CK-MB、MDA、ET-1、P-selectin、PAC-1、TXB2、PAF、Lp-PLA2的含量呈正相关(r/P=0. 683/0. 004、0. 626/0. 007、0. 596/0. 016、0. 653/0. 005、0.585/0.018、0. 703/0.002.、0. 495/0.022、0. 531/0.019、0.628/0.009)。结论 AMI患者外周血中miR-208a表达增多,且与心肌损伤、血小板活化程度相关。

体外循环心脏手术患者围术期血清miR-208a表达变化

目的:探讨在体外循环下行心脏手术患者围术期血清中mi R-208a的变化。方法:采用实时荧光定量RT-PCR(RT-q PCR)检测20例在体外循环下行心脏瓣膜置换术患者围术期血清mi R-208a表达的变化,并与血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和心肌肌钙蛋白I(c Tn I)水平进行对比分析。结果:患者血清mi R-208a的表达水平在手术前很低,在主动脉阻断后开始升高(P<0.05),在主动脉开放后达到峰值(P<0.01),术后24 h下降,但仍较术前显著升高。皮尔森相关分析显示mi R-208a的表达与CK-MB和c Tn I变化呈正相关(P<0.05)。结论:血清mi R-208a可作为体外循环下心脏手术中心肌损伤的标志物。

miR-133a和miR-208a对急性冠脉综合征患者PCI术后心肌损伤的诊断价值

目的:分析miR-133a和miR-208a对急性冠脉综合征(ACS)患者经皮冠状动脉介入(PCI)术后心肌损伤的诊断价值。方法:将2017年6月至2019年1月在邯郸市第一医院行PCI术治疗的83例ACS患者,并根据PCI术后心肌损伤情况分为心肌损伤组41例和非心肌损伤组42例。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测患者血清miR-133a和miR-208a表达水平,采用化学发光免疫分析法检测血清肌钙蛋白I(cTnI)水平,Pearson相关法分析患者血清miR-133a和miR-208a表达水平与cTnI水平的相关性,采用受试者工作特征曲线(ROC)评估miR-133a和miR-208a对患者PCI术后心肌损伤的诊断价值。结果:心肌损伤组血清中cTnI水平和miR-133a、miR-208a相对表达量均明显高于非心肌损伤组(P<0.05);患者血清中miR-133a、miR-208a相对表达量分别与cTnI水平呈正相关关系(r=0.741、0.770,P<0.001);miR-133a、miR-208a诊断ACS患者PCI术后心肌损伤的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.809(95%CI0.825~0.961)、0.853(95%CI0.890~0.990),其诊断临界值分别为0.95、0.31,敏感性分别为93.60%、95.12%,特异性分别为73.80%、83.33%。结论:miR-133a、miR-208a对ACS患者PCI术后心肌损伤具有较好的诊断敏感性和特异性,是ACS患者PCI术后心肌损伤的有效生物标志物。

miR-208a和miR-21与慢性心力衰竭中医证型的相关性研究

目的比较miR-208a和miR-21在慢性心力衰竭不同中医证型中的表达,以探讨其与慢性心衰不同中医证型的相关性。方法慢性心力衰竭患者100例,分为气阴虚和气阳虚两大证型,正常对照组30例,正常对照组为基准,比较不同中医证型患者血浆中miR-208a和miR-21表达量差异。结果在正常对照组和不同证型分组患者中不能稳定地检测到miR-208a,而气阴虚和气阳虚组miR-21的相对表达量分别为对照组的3.65和4.08倍,且两组之间的表达量有统计学差异。结论 miR-208a不能作为慢性心力衰竭中医证型的分型依据,miR-21可以作为慢性心力衰竭中医证型的分型依据。

急性心肌梗死患者外周血miR-208 sST2 CLU与左室重构的相关性

目的:分析急性心肌梗死(AMI)患者外周血微小核糖核酸-208(miR-208)、可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)、簇集蛋白(CLU)与左室重构(LVR)的相关性。方法:选取2019年1月至2020年2月到本院就诊并首次确诊为AMI的患者62例为AMI组,根据LVR标准将AMI组分为左室重构组(LVR组)与左室非重构组(No-LVR组),同时期到本院就诊并经冠状动脉造影检查病变为阴性(狭窄程度<50%)且无任何心脏基础疾病的患者35例,作为对照组。测定各组患者高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、sST2、CLU、miR-208、空腹血糖(FPG)、白细胞(WBC)、血小板(PLT)水平,并进行超声心动检查。分析观察IMA患者外周血miR-208、sST2、CLU的水平与超声心动图检测指标的相关性。结果:与对照组对比,No-LVR组与LVR组LDL-C、miR-208、sST2、CLU、LVESD、LVEF水平均明显升高,且LVR组明显高于No-LVR组(P<0.05);No-LVR组与LVR组患者的LVEDD、LVESV、LVEDV及LVMI水平明显降低,且LVR组明显低于No-LVR组(P<0.05)。经Pearson相关性分析,LVESD、LVEF与外周血miR-208、sST2、CLU呈显著正相关(P<0.05),LVESV、LVEDD、LVEDV、LVMI与外周血miR-208、sST2、CLU呈显著负相关(P<0.05)。结论:IMA患者外周血sST2、CLU与LVR关系密切,及时检测这两种因子的水平有助于抑制AMI后LVR情况的发生及发展。

急性心肌梗死患者血清miR-208对血小板功能、炎症反应及心肌损伤程度的影响

目的:研究急性心肌梗死患者血清miR-208对血小板功能、炎症反应及心肌损伤程度的影响。方法:选择本院收治的急性心肌梗死患者及不稳定型心绞痛患者,分别作为研究的AMI组和UAP组;另取同期在安康市中心医院体检的健康志愿者作为对照组。测定miR-208的表达量、血小板参数、炎症反应细胞因子、心肌损伤标志分子。结果:AMI组和UAP组患者血清中miR-208的表达量以及PAF、TGF-β1、IL-10、TNF-α、sICAM1、sVCAM1、Myo、CK-MB、LDH、H-FABP的含量以及血小板表面C3aR、C5aR、GPⅡb/ⅡIa的表达强度均显著高于对照组且AMI组患者血清中miR-208的表达量以及PAF、TGF-β1、IL-10、TNF-α、sICAM1、sVCAM1、Myo、CK-MB、LDH、H-FABP的含量以及血小板表面C3aR、C5aR、GPⅡb/ⅡIa的表达强度均显著高于UAP组。结论:急性心肌梗死患者血清中miR-208的高表达能够加剧血小板激活、炎症反应活化、心肌损伤的程度。

AMI患者血浆miR-221-3p、miR-208b-3p表达水平与心肌损伤标志物及左心功能的关系

目的研究急性心肌梗死(AMI)患者血浆微小MicroRNA(miR)-221-3p、miR-208b-3p表达与心肌损伤标志物及左心功能的关系。方法132例AMI患者为AMI组,另选取48例健康查体人群作为对照组。采用全球急性冠状动脉事件注册(GRACE)评分对AMI患者进行危险分层,采用实时荧光定量PCR法检测各组血浆miR-221-3p、miR-208b-3p表达水平,比较不同危险分层的AMI患者血浆miR-221-3p、miR-208b-3p表达水平,分析二者与心肌损伤标志物肌钙蛋白I(cTnI)、磷酸激酶同工酶(CK-MB)、内皮素1(ET-1)及左心功能参数左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期容积(LVEDV)及左心室收缩末期容积(LVESV)的关系。结果与对照组比较,AMI组患者的血浆miR-208b-3p、miR-221-3p表达明显较高(P<0.05)。不同GRACE危险分层的AMI患者血浆miR-221-3p、miR-208b-3p表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。高危组患者血浆miR-208b-3p、miR-221-3p明显高于中危及低危组(P<0.05)。AMI组患者血浆miR-221-3p、miR-208b-3p与cTnI呈正相关(r值分别为0.480、0.518,P<0.05),与LVEF呈负相关(r值分别为-0.535、-0.503,P<0.05),而与CK-MB、ET-1、LVEDV、LVESV无相关性(P>0.05)。结论AMI患者血浆miR-221-3p、miR-208b-3p表达水平升高,并且与心肌损伤严重程度及左心功能的有关,有可能成为新的AMI标志物。

肌球蛋白重链7基因来源的miR-208b-3p促进心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达

【目的】探究肌球蛋白重链7基因来源的微小RNA-208b-3p(miR-208b-3p)对心肌成纤维细胞纤维化表型的调控作用。【方法】通过miRNA表达谱芯片分析18周龄的糖尿病db/db小鼠和db/m对照小鼠心肌中差异的miRNAs。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-208b-3p在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和高糖/葡萄糖氧化酶(G/Go)处理的C57BL/6乳小鼠心肌细胞(NMVCs)和心肌成纤维细胞(mCFs)中的表达;利用CCK8细胞增殖实验、流式细胞术和纤维化相关蛋白(包括COL1A1、COL3A1和α-SMA)表达检测来了解miR-208b-3p对mCFs纤维化表型的影响;双萤光素酶报告基因实验检测miR-208b-3p与潜在靶基因Mtf2和Pgrmc1 3′端非翻译区(3′-UTR)的结合作用;利用RT-qPCR和Western blot法分别检测miR-208b-3p转染的mCFs中Mtf2和Pgrmc1表达;通过小干扰RNA(siRNA)抑制Mtf2和Pgrmc1表达,并检测对mCFs中纤维化相关蛋白表达的作用。【结果】miRNA表达谱和RTqPCR结果证实miR-208b-3p在糖尿病db/db小鼠心肌中表达显著升高。miR-208b-3p前体与宿主基因Myh7在db/db小鼠心肌中表达显著升高,miR-208b-3p与Myh7 mRNA在乳小鼠来源的mCFs和NMVCs中均有表达,但在NMVCs中水平更高。miR-208b-3p在AngⅡ和G/Go处理后的mCFs和NMVCs中表达均明显升高。miR-208b-3p可显著增加mCFs中纤维化相关蛋白COL1A1、COL3A1和α-SMA表达,但不影响mCFs的增殖能力和细胞周期分布特征。双萤光素酶报告基因实验显示miR-208b-3p与Mtf2和Pgrmc1 3′-UTR有结合作用。miR-208b-3p可在转录后水平抑制mCFs中Mtf2和Pgrmc1表达。miR-208b-3p、Mtf2 siRNA和Pgrmc1 siRNA均能一致性地促进mCFs中纤维化相关蛋白表达。【结论】miR-208b-3p通过靶向Mtf2和Pgrmc1基因发挥促进mCFs中纤维化相关基因表达的作用。

血清miR-208a在急性心肌梗死早期及急诊PCI前后表达的研究

目的探讨血清微小核糖核酸mi R-208a在急性心肌梗死(AMI)早期及急诊经皮冠状动脉介入(PCI)治疗前后表达的变化。方法选择急性心肌梗死患者30例作为AMI组,选择同期健康体检者20例(均无心脏疾病)作为对照组。AMI患者分别在入院即刻和入院后12 h(PCI术后6 h内)采集血液,健康对照组于清晨空腹采血,观察AMI患者发病早期血清mi R-208a的表达水平,将mi R-208a与肌钙蛋白I、肌酸激酶同工酶表达水平进行相关性分析,并比较AMI患者冠脉介入治疗前后血清mi R-208a的表达变化。结果 AMI患者血清mi R-208a水平显著高于对照组(P<0.05),急性心梗患者血清mi R-208a水平与肌钙蛋白I、肌酸激酶同工酶含量呈正相关(r1=0.356,P=0.045;r2=0.456,P=0.011),AMI患者冠脉介入治疗后血清mi R-208a水平较入院即刻显著降低(P<0.05)。结论血清mi R-208a在AMI患者早期表达显著升高,PCI后mi R-208a表达显著降低。

心房颤动患者血清FGF-23、miR-208b的表达水平及临床意义

目的探讨血清成纤维细胞生长因子23(FGF23)、miR-208b在心房颤动患者中的表达水平及临床意义。方法选取2018年5月至2019年10月在西安市第三医院治疗的心房颤动患者240例(观察组),其中阵发性房颤患者134例,持续性房颤患者106例;同时选取同期窦性心律健康体检者150例作为对照组。检测并比较两组受检者以及阵发性房颤患者和持续性房颤患者的血清FGF-23、miR-208b水平;采用超声心动图检查观察组患者的心脏参数,分析FGF-23、miR-208b与LAD的相关性。结果观察组患者的血清FGF-23、miR-208b相对表达量分别为(210.20±89.60)ng/mL和5.30±1.22,明显高于对照组的(110.04±32.29)ng/mL和2.90±0.88,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组中的持续性房颤患者的血清FGF-23、miR-208b相对表达量分别为(234.22±70.05)ng/mL和5.83±1.00,明显高于阵发性房颤患者的(191.20±65.59)ng/mL和4.88±1.02,差异均有统计学意义(P<0.05);持续性房颤患者的左房直径(LAD)为(38.81±5.11)mm,明显长于阵发性房颤患者的(34.03±4.02)mm,差异有统计学意义(P<0.05);血清FGF-23、miR-208b相对表达量与LAD呈正相关(r=0.411,0.382,P<0.05);观察组患者中主要心血管事件(MACE)患者的血清FGF-23和miR-208b分别为(243.30±72.29)ng/mL和6.12±1.12,明显高于非MACE患者的(199.65±71.43)ng/mL和5.04±1.07,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论心房颤动患者血清FGF-23,miR-208b明显升高,且与疾病类型、心脏参数及预后有一定相关性。

血清miR-208a水平与急性心肌梗死后左室重构的相关性研究

目的研究急性心肌梗死(AMI)患者血清miR-208a水平与AMI左室重构(LVR)的相关性。方法选择AMI患者60例。采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)法检测AMI患者发病后24 h内血清miR-208a水平;采用超声心动图检测AMI患者入院时及发病后6个月心功能指标,计算左室质量指数(LVMI)。并根据发病后6个月LVMI将患者分为左室重构组(n=34)和非左室重构组(n=26)。采用Pearson相关系数对AMI患者血清miR-208a与左室重构的关系进行分析,线性回归分析血清miR-208a水平对左室重构的预测价值,ROC曲线分析血清miR-208a水平对左室重构的诊断效能。结果 AMI患者血清miR-208a表达水平明显高于健康对照组(P<0.05)。AMI发病后6个月时,左室重构组患者血清miR-208a表达水平明显高于非左室重构组(P<0.05)。Pearson相关分析显示血清miR-208a水平与LVMI呈正相关(P<0.05)。回归分析结果显示血清miR-208a水平与左室重构具有相关性(OR=0.930,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,miR-208a曲线下面积(AUC)为0.69;取相对表达值1.704为截断点,血清miR-208a预测AMI患者发生左室重构的灵敏度为82.64%,特异度为57.42%。结论 AMI患者血清miR-208a表达水平显著升高,其水平与左室重构程度有明显相关性;高表达的血清miR-208a是AMI患者发生左室重构的独立预测因子,具有一定的诊断价值。

外周血miR-208b与cTnT早期诊断急性心肌梗死的比较分析

目的:对比研究外周血miR-208b与心肌肌钙蛋白T(cTnT)在早期诊断急性心肌梗死(AMI)中的价值。方法:采集67名AMI患者和32名非AMI对照者的外周血浆,通过定量逆转录聚合酶链反应(qRTPCR)测定miR-208b的浓度,通过电化学发光法检测cTnT的相应波动。结果:AMI患者外周血miR-208b的浓度较非AMI对照者明显升高(P<0.01),AMI患者痊愈出院时miR-208b的血浆浓度已回落至基线,miR-208b浓度的变化与研究病例的自身特征无明显相关性(P>0.05)。另外,受试者工作特征曲线(ROC)显示,miR-208b在早期诊断AMI方面具有高度的心肌特异性和敏感性,但并不优于cTnT。结论:外周血miR-208b可作为AMI早期诊断的标志物,但在诊断价值上不优于cInT。

急性心肌梗死病人血清miR-208a、miR-208b、miR-1水平变化及其临床意义

目的探讨急性心肌梗死(AMI)病人外周血血清miR-208a、miR-208b及miR-1的水平变化,并分析其对病人早期诊断临床意义。方法选取宜城市中医医院诊治的103例AMI病人(AMI组)和80名健康查体者(对照组)的临床资料。采取AMI组病人胸痛后1 h、3 h、6 h、12 h、24 h和7 d时的血液标本,采用实时定量PCR法(qT-PCR)检测各组血清中miR-208a、miR-208b及miR-1水平,应用酶联免疫吸附测定血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)表达。结果 AMI组与对照组在年龄、性别、血糖、收缩压、舒张压、饮酒史及吸烟史方面比较差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,AMI组病人血清miR-208a、miR-208b及miR-1明显升高(P<0.05);血清miR-1及miR-208b在胸痛发作1 h明显升高,12 h达到峰值;miR-208a在胸痛发作1 h明显升高,3 h达到峰值;血清miR-208a、miR-1及miR-208b与cTnⅠ、CK-MB呈正相关(P<0.05)。结论血清miR-208a、miR-208b及miR-1可作为新的AMI生物标志物,对AMI早期诊断具有重要临床意义。

miR-208a、H-FABP和IMA在急性心肌梗死中的表达及意义

目的探讨微小核糖核酸RNA-208a(miR-208a)、心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)和缺血修饰白蛋白(IMA)在急性心肌梗死(AMI)中的表达及意义。方法选取AMI患者85例为AMI组,选择同期体检健康者40例为对照组,检测其外周血中的miR-208a、H-FABP和IMA,比较AMI组与对照组上述指标的差异,并比较AMI患者PCI前后上述指标的变化情况。结果入院时miR-208a、H-FABP和IMA表达水平AMI组显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);经PCI治疗后AMI患者miR-208a、H-FABP和IMA表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论AMI早期miR-208a、H-FABP和IMA显著升高,有助于早期诊断。

miR-208b对小鼠HL-1房颤细胞钙超载的影响及其机制分析

目的探讨miR-208b对小鼠HL-1房颤细胞钙超载的影响,并分析其作用机制。方法将小鼠HL-1心房肌细胞随机分为3组:对照组、起搏组和miR-208b组。后两组建立快速起搏HL-1房颤细胞模型,然后将miR-208b模拟物转染至miR-208b组细胞,将模拟物阴性对照转染至起搏组细胞,对照组不处理。全细胞膜片钳技术检测动作电位时程(APD)及L型钙电流(I Ca,L)的电流密度,实时荧光定量PCR及Western Blot检测钙通道蛋白mRNA及蛋白的表达。结果与对照组相比,起搏组和miR-208b组细胞中miR-208b表达显著增加(P<0.05),且miR-208b组高于起搏组(P<0.05)。与对照组相比,起搏组和miR-208b组APD50、APD90、I Ca,L的电流密度、CACNA1C mRNA、CACNB2 mRNA、CaV1.2蛋白、SERCA2 mRNA及SERCA2蛋白的表达均显著降低(P<0.05),且miR-208b组低于起搏组(P<0.05)。结论miR-208b在小鼠HL-1房颤细胞中高表达,其可通过抑制L型钙通道蛋白的表达和功能以及抑制肌浆网Ca 2+摄入,导致胞内Ca 2+超载,诱发AF。

miR-208a促进非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的功能和机制研究

目的探讨miR-208a对非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法(1)分别用miR-208a mimic、NC mimic、miR-208a inhibitor和NC inhibitor转染A549细胞。采用荧光定量PCR(qPCR)检测A549细胞中miR-208a过表达和干扰效率;采用CCK-8实验、Transwell实验和划痕实验检测miR-208a对A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响。利用生物信息学网站PicTar、miRanda、Targetscan和miRDB预测与miR-208a结合的下游靶基因;构建蛋白酪氨酸磷酸酶受体G(PTPRG)的3′UTR野生型和突变型双荧光素报告酶基因载体,和miR-208a共转染到HEK-293T细胞后观察荧光素酶活性变化。(2)取对数生长期的A549细胞,设置阴性对照组(si-NC组)、PTPRG敲低组(si-PTPRG组)和PTPRG敲低组+miR-208a干扰组(si-PTPRG+miR-208a inhibitor组),采用CCK-8、Transwell实验和划痕实验检测PTPRG对A549增殖、侵袭和迁移的影响,qPCR和Western blot检测3组细胞PTPRG的mRNA和蛋白表达变化。结果(1)miR-208a mimic组miR-208a基因表达水平、细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移率均高于NC mimic组(P<0.05);miR-208a inhibitor组的miR-208a基因表达水平、细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移率均低于NC inhibitor组(P<0.05)。生物信息学分析显示PTPRG是miR-208a的靶基因,双荧光素报告酶实验结果显示miR-208a过表达能够降低PTPRG 3′UTR野生型的荧光素酶活性,而敲低miR-208a能够增加PTPRG 3′UTR野生型的荧光素酶活性,miR-208a能够与PTPRG的3′UTR序列结合。(2)与si-NC组相比,si-PTPRG组细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移能力明显增高,PTPRG基因和蛋白表达水平下降(P<0.05);而与si-PTPRG组相比,si-PTPRG+miR-208a inhibitor组细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移能力下降,PTPRG基因和蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论miR-208a可能通过靶向调控PTPRG来促进A549细胞的增殖、侵袭和迁移。

miR-208和miR-499与心血管病研究进展

microRNA(miRNA)是一类由20~25个核苷酸组成的在进化上高度保守的内源性小分子单链非编码RNA。主要通过与靶mRNA的3’-非编码区(3’-UTR)的特异性序列碱基互补配对结合,产生转录后抑制,从而调控基因的表达〔1〕。miRNA在高等生物生命活动中扮演重要角色,参与生物细胞增殖、分化、免疫、应激、凋亡、癌变等多种生命过程,并在肿瘤发生及心血管病等各种疾病中起到至关重要的作用。