circFAT1调节miR-211-5p/CCND2轴对糖尿病心肌病大鼠心肌损伤的影响

目的探讨circFAT1对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌损伤的影响及对miR-211-5p/细胞周期蛋白D2(CCND2)轴的调节机制。方法利用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素建立DCM大鼠模型,并随机分为DCM组、circ-NC组、circFAT1组、circFAT1+激动剂-NC组和circFAT1+miR-211-5p激动剂组,以喂食普通饲料的大鼠作为对照组,每组20只。实时PCR检测心肌组织中circFAT1、miR-211-5p、CCND2水平;Western blotting检测心肌组织CCND2蛋白表达;生化分析仪检测大鼠空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平;心脏超声检测大鼠心功能;HE和Masson染色观察心肌组织病理形态;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡情况;ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;双荧光素酶报告基因实验验证circFAT1、miR-211-5p、CCND2之间的靶向关系。结果与对照组相比,DCM组circFAT1、CCND2 mRNA及蛋白表达,左心室射血分数(LVEF)、左心室缩短分数(LVFS)水平降低(P<0.05),FBG、TC、TG、左心室舒张末期直径(LVEDd)、左心室收缩末期直径(LVEDs)、胶原容积分数(CVF)、细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均升高(P<0.05);与DCM组相比,circFAT1组circFAT1、CCND2 mRNA及蛋白表达,LVEF、LVFS水平升高(P<0.05),FBG、TC、TG、LVEDd、LVEDs、CVF、细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05);miR-211-5p激动剂逆转了circFAT1对DCM心肌损伤的缓解作用,且CCND2 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05)。结论circFAT1通过调控miR-211-5p/CCND2轴减轻DCM大鼠心肌组织损伤。

miR-211-5p和miR-202-3p在抑郁症患者中的表达及其与患者病情程度和认知功能的关系

目的探究微小核糖核酸-211-5p(miR-211-5p)和微小核糖核酸-202-3p(miR-202-3p)在抑郁症患者中的表达及其与患者病情程度和认知功能的关系。方法选取2021年1月至2023年6月郑州大学第一附属医院精神科收治的92例确诊为抑郁症的患者为抑郁症组,同期选取本院体检健康(精神状态正常)的志愿者92例为对照组。根据抑郁自评量表(SDS)分为轻度抑郁组(SDS:53~62分)45例、中度抑郁组(SDS:63~72分)30例、重度抑郁组(SDS:73分及以上)17例。根据简易智力状态检查量表(MMSE)评分分为轻度认知功能障碍组(MMSE:21~26分)24例、中度认知功能障碍组(MMSE:10~20分)40例、重度认知功能障碍组(MMSE:1~9分)28例。实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-211-5p和miR-202-3p水平。血清miR-211-5p、miR-202-3p水平对抑郁症的诊断价值采用ROC曲线进行分析。血清miR-211-5p、miR-202-3p水平与病情程度及认知功能的关系采用Spearman相关性分析。结果抑郁症患者血清miR-211-5p水平低于对照组,miR-202-3p水平高于对照组(P<0.05)。miR-211-5p、miR-202-3p联合诊断抑郁症的AUC高于miR-211-5p(Z=4.701,P<0.001)、miR-202-3p(Z=2.275,P=0.023)单独诊断的AUC。与轻度抑郁组相比,中度抑郁组和重度抑郁组miR-211-5p水平依次降低,与轻度抑郁组相比,中度抑郁组和重度抑郁组miR-202-3p水平依次升高。不同认知功能抑郁症患者血清miR-211-5p水平比较:重度认知功能障碍组<中度认知功能障碍组<轻度认知功能障碍组;miR-202-3p水平比较:重度认知功能障碍组>中度认知功能障碍组>轻度认知功能障碍组(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,抑郁症患者血清miR-211-5p水平与病情程度及认知功能损害呈负相关,miR-202-3p水平与病情程度及认知功能损害呈正相关(P<0.05)。结论抑郁症患者血清miR-211-5p低表达,miR-202-3p高表达,二者与病情程度及认知功能有关,有成为抑郁症辅助诊断生物学指标的潜力。

苯并[a]芘恶性转化细胞THBEc1中miR-584-5p/miR-211-5p/叉头框蛋白A1轴参与IDH1和HSPB1转录调控

目的探索苯并[a]芘(BaP)恶性转化人支气管上皮细胞T-16HBE-C1(THBEc1)中微RNA(miRNA)调控叉头框蛋白A1(FOXA1)表达上调的机制,并筛选和验证FOXA1的潜在靶基因。方法利用TargetScan,ENCORI数据库和THBEc1细胞与非转化细胞16HBE间miRNA的二代测序(NGS)结果,综合预测靶向调控FOXA1的miRNA,并通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)进一步筛选预测的miRNA。采用miRNA模拟物(mimics)转染THBEc1细胞,Western印迹法测定FOXA1蛋白表达水平,对靶向调控FOXA1的miRNA进行鉴定。利用hTF,JASPAR和ENCODE数据库结合FOXA1敲除细胞THBEc1-ΔFOXA1-c34和对照细胞THBEc1-ctrl间mRNA的NGS结果,综合预测FOXA1的潜在靶基因。利用RT-qPCR进一步对预测的靶基因[跨膜蛋白98(TMEM98)、IKAROS家族锌指2(IKZF2)、异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)、肿瘤坏死因子受体相关因子5(TRAF5)、骨形态发生蛋白2型受体(BMPR2)、热休克蛋白B1(HSPB1)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、golgin A7家族成员B(GOLGA7B)和维甲酸相关孤核受体A(RORA)]进行筛选。通过转染过表达质粒构建稳定表达FOXA1的细胞模型THBEc1-ΔFOXA1-c34-oe,即FOXA1功能回补,并利用RT-qPCR和Western印迹法验证FOXA1的潜在靶基因。结果TargetScan和ENCORI数据库分别预测到213和145个可能靶向调控FOXA1的miRNA。NGS共发现351个miRNA在THBEc1细胞中表达下调(差异倍数<0.5,且错误发现率<0.05),其中hsa-miR-584-5p(miR-584-5p),hsa-miR-142-5p(miR-142-5p)和hsa-miR-211-5p(miR-211-5p)在上述2个数据库中均被预测可靶向调控FOXA1。RT-qPCR结果证实,THBEc1细胞中miR-584-5p,miR-142-5p和miR-211-5p表达水平显著低于16HBE细胞(P<0.01)。转染miR-584-5p模拟物或miR-211-5p模拟物均可显著下调THBEc1细胞FOXA1蛋白表达水平(P<0.01),而转染miR-142-5p模拟物对THBEc1细胞FOXA1蛋白表达水平无明显影响。THBEc1-ΔFOXA1-c34和THBEc1-ctrl细胞间的20个差异表达基因(差异倍数<0.5或>2,且错误发现率<0.05)被hTF,JASPAR和ENCODE数据库均预测为FOXA1的潜在靶基因。RT-qPCR结果显示,在THBEc1-ΔFOXA1-c34中,TMEM98,IKZF2,IDH1,TRAF5,BMPR2,HSPB1和RUNX2 mRNA表达水平显著下调(P<0.05,P<0.01),GOLGA7B和RORA mRNA表达水平显著上调(P<0.05,P<0.01);在THBEc1-ΔFOXA1-c34-oe中,IDH1和HSPB1的mRNA表达水平显著上调(P<0.01),余7个基因mRNA表达水平未见改变。Western印迹结果显示,THBEc1-ΔFOXA1-c34细胞中IDH1和HSPB1表达水平较THBEc1-ctrl均显著下调(P<0.01);而恢复FOXA1表达的THBEc1-ΔFOXA1-c34-oe细胞中IDH1和HSPB1表达水平较对照细胞THBEc1-ΔFOXA1-c34-ctrl均显著上调(P<0.01)。结论BaP恶性转化细胞THBEc1中miR-584-5p/miR-211-5p/FOXA1轴参与IDH1和HSPB1转录调控。

白癜风患者血清LncRNA MALAT1及miR-211-5p表达水平与临床特征的相关性分析

目的探讨长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录因子1(long non-coding RNA metastasis associated transcription factor 1 in lung adenocarcinoma,Lnc RNA MALAT1),微小核糖核酸(micro RNA,miR)-211-5p表达水平变化与临床特征的相关性。方法选取2022年1~6月河北省沧州中西医结合医院皮肤科收治的白癜风患者80例为研究对象(白癜风组),同期于该院进行体检的健康者80例为对照组。采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)法检测受试者血清中Lnc RNA MALAT1,mi R-211-5p表达水平;两组间比较采用独立样本t检验;多组间(不同临床分期、临床分型、皮损面积及病程)比较进行单因素方差分析,组间多重比较采用SNK-q检验;白癜风患者皮损面积及病程与血清中Lnc RNA MALAT1和mi R-211-5p表达水平的相关性采用Pearson法分析。结果白癜风组患者血清Lnc RNA MALAT1(1.90±0.25)表达水平高于对照组(1.02±0.13),血清mi R-211-5p(0.53±0.07)表达水平低于对照组(1.05±0.10),差异均有统计学意义(t=27.933,38.103,均P=0.000)。进展期及快速进展期血清Lnc RNA MALAT1水平均高于稳定期(2.29±0.42,2.47±0.31 vs 1.54±0.12),差异有统计学意义(t=15.000,16.766,均P<0.001)。血清mi R-211-5p水平均低于稳定期(0.28±0.09,0.22±0.06 vs 0.74±0.11),差异有统计学意义(t=24.748,25.217,均P<0.001)。寻常型血清Lnc RNA MALAT1(2.06±0.26)表达水平高于节段型(1.50±0.16),寻常型血清mi R-211-5p(0.39±0.11)表达水平低于节段型(0.86±0.21),差异有统计学意义(t=9.768,13.127,均P<0.001)。泛发型血清Lnc RNA MALAT1相对表达水平高于肢端型、局限型及散发型(2.59±0.38 vs 2.02±0.19,1.98±0.44,1.89±0.30),差异有统计学意义(t=5.559,6.038,7.375,均P<0.001)。血清mi R-211-5p水平低于肢端型、局限型及散发型(0.17±0.04 vs 0.39±0.09,0.43±0.11,0.45±0.10),差异有统计学意义(t=7.651,9.177,10.520,均P<0.001)。皮损面积<1%,1%~50%和>50%的白癜风患者血清Lnc RNA MALAT1表达水平依次升高(1.69±0.19,1.92±0.21,2.56±0.26),差异有统计学意义(t=6.424,17.408,12.312,均P<0.001);皮损面积<1%,1%~50%和>50%的白癜风患者血清mi R-211-5p表达水平依次升高(0.70±0.09,0.41±0.10,0.21±0.03),差异有统计学意义(t=18.972,22.964,9.012,均P<0.001)。Pearson相关性分析显示,白癜风患者血清Lnc RNA MALAT1与皮损面积呈正相关(r=0.576,P<0.001),血清mi R-211-5p与皮损面积呈负相关(r=-0.475,P<0.001)。病程<1年、1~3年和>3年的白癜风患者血清Lnc RNA MALAT1表达水平依次降低(1.65±0.18,1.88±0.22,2.48±0.23),差异有统计学意义(t=5.984,20.581,13.291,均P<0.001);病程<1年、1~3年、>3年的白癜风患者血清mi R-211-5p表达水平依次降低(0.68±0.11,0.53±0.10,0.21±0.04),差异有统计学意义(t=8.352,24.942,15.170,均P<0.001)。Pearson相关性分析表明,血清Lnc RNA MALAT1与病程呈正相关(r=0.344,P<0.001),血清mi R-211-5p与病程呈负相关(r=-0.433,P<0.001)。结论白癜风患者血清中Lnc RNA MALAT1表达上调,mi R-211-5p表达下调,且与皮损面积及病程等临床特征显著相关。

急性脑梗死患者血清CCR5和miR-211-5p表达水平及其临床意义

目的探究急性脑梗死(acute cerebral infarction)患者血清CC趋化因子细胞受体5(chemokine C-C motif receptor type 5,CCR5)和微小核糖核酸(microRNA,miR)-211-5p表达水平及其临床意义。方法选取2019年2月~2021年2月石家庄平安医院收治的130例急性脑梗死患者(观察组),另选同期130例健康体检者作为对照(对照组)。实时荧光定量PCR检测血清中CCR5信使RNA(messengerRNA,mRNA)和miR-211-5p相对表达水平;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清中CCR5水平;Pearson法分析CCR5 mRNA和miR-211-5p表达水平与美国国立卫生研究院卒中量表(the National Institutes of Health Stroke Scale,NIHSS)评分相关性;分析CCR5 mRNA和miR-211-5p表达水平与急性脑梗死患者临床病理特征关系;受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析CCR5 mRNA和miR-211-5p表达水平对急性脑梗死的诊断价值;Kaplan-Meier生存曲线分析CCR5 mRNA和miR-211-5p表达水平与急性脑梗死预后生存的关系。结果与对照组相比,观察组患者血清中CCR5 mRNA表达(1.49±0.29 vs 1.03±0.24)和蛋白含量水平(290.96±10.35ng/ml vs 152.37±8.97ng/ml)显著增高,mi R-211-5p相对表达水平(0.59±0.18 vs 0.96±0.22)显著降低,差异均有统计学意义(t=13.933,115.374,14.841,均P<0.001);轻度组、中度组、重度组CCR5 mRNA(1.26±0.21,1.58±0.22,1.77±0.24)和蛋白含量水平(257.34±7.26ng/ml,289.31±9.36ng/ml,357.31±8.12ng/ml)依次增加,miR-211-5p相对表达水平(0.74±0.17,0.61±0.1,0.28±0.18)依次降低,差异均有统计学意义(F=57.145,1396.953,73.759,均P<0.001)。急性脑梗死患者CCR5 mRNA表达水平与miR-211-5p表达水平呈负相关性(r=-0.341,P<0.001),与NIHSS评分呈正相关性(r=0.315,P<0.001);miR-211-5p表达水平与NIHSS评分具有显著的负相关性(r=-0.475,P<0.001)。CCR5 mRNA和miR-211-5p表达水平与急性脑梗死患者脑梗死体积、OCSP分型及血脂异常有关(P<0.05),与性别、梗死部位无关(P>0.05)。CCR5 mRNA和miR-211-5p诊断急性脑梗死的曲线下面积为0.834,0.868,二者联合诊断的曲线下面积为0.921。CCR5 mRNA高表达患者的90天生存率显著低于低表达患者(61.97%vs 81.36%),miR-211-5p高表达患者的90天生存率显著高于低表达患者(80.65%vs 61.76%),差异均有统计学意义(χ^(2)=5.853,5.589,均P<0.05)。结论急性脑梗死患者血清CCR5 mRNA和蛋白表达水平增高,miR-211-5p表达水平降低,均与患者的病情程度有关,对急性脑梗死有一定诊断价值。

人OC细胞系细胞miR-211-5p表达、转染miR-211-5p模拟物后的增殖及迁移侵袭和EMT观察

目的观察人卵巢癌(OC)细胞系细胞微小RNA-211-5p(miR-211-5p)表达、转染miR-211-5p模拟物(miR-211-5p mimics)后的增殖及迁移侵袭和上皮间质转化(EMT)。方法体外培养人OC细胞系(SKOV3、A2780、HO8910细胞)及人正常卵巢上皮IOSE80细胞,采用qRT-PCR法检测上述细胞miR-211-5p。取对数生长期的SKOV3细胞,并随机分为两组,高表达组转染miR-211-5p mimics,对照组转染miR-NC,采用CCK-8实验、细胞划痕实验、Transwell实验、Western blotting法分别测算两组细胞OD值、划痕移动距离百分比、侵入细胞数、EMT相关蛋白及壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)蛋白灰度值比值。将miR-211-5p mimics或miR-NC与CHI3L1野生型双荧光素酶报告载体CHI3L1-wt或CHI3L1突变型双荧光素酶报告载体CHI3L1-mut共转染入SKOV3细胞中,分为记为miR-211-5p mimics+CHI3L1-wt组、miR-NC+CHI3L1-wt组、miR-211-5p mimics+CHI3L1-mut组、miR-NC+CHI3L1-mut组,转染24 h后收集并裂解细胞,应用荧光素酶试剂盒检测各组细胞的荧光素酶活性。结果与IOSE80细胞比较,SKOV3、A2780、HO8910细胞miR-211-5p相对表达量降低(P均<0.05)。与对照组比较,高表达组OD值、划痕移动距离百分比、侵入细胞数、N-Cadherin和Fibronectin蛋白灰度值比值降低,E-Cadherin蛋白灰度值比值升高(P均<0.05)。与对照组比较,高表达组CHI3L1蛋白灰度值比值降低(P<0.05)。与miR-NC+CHI3L1-wt组比较,miR-211-5p mimics+CHI3L1-wt组细胞相对荧光素酶活性降低(P<0.05)。结论miR-211-5p在OC各细胞系中表达降低;转染miR-211-5p mimics可抑制SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT,机制是通过负向调控CHI3L1表达实现的。

ZNF521促进结肠癌的进展且受miR-211-5p靶向调控

目的:探索锌指蛋白521(ZNF521)在结肠癌中的表达、功能和临床意义,并研究其机制。方法:采用免疫组织化学、蛋白质印迹法和q RT-PCR检测结肠癌组织或细胞系中ZNF521或mi R-211-5p的表达;采用小干扰RNA(small interfering,si RNA)和mi RNA模拟物分别构建ZNF521低表达和mi R-211-5p高表达细胞模型;采用CCK-8实验和Transwell实验分别检测细胞的增殖、迁移和侵袭;采用蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达;通过Circ Interactome生物信息学网站预测、双荧光素报告基因实验验证mi R-211-5p与ZNF521的靶向关系。结果:与正常结肠组织相比,结肠癌患者标本中ZNF521表达显著增加,其高表达与患者TNM分期增加、分化程度低及局部淋巴结转移显著相关;体外实验证实,敲低ZNF521或过表达mi R-211-5p抑制了结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭,并促进了结肠癌细胞凋亡;相关的机制研究证实,mi R-211-5p可以靶向ZNF521并负调节后者的表达。结论:ZNF521可作为致癌基因调节结肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡并受到mi R-211-5p的靶向调控。

miR-211-5p和p27^Kip1在原发性胃癌组织中的表达水平与临床病理学特征的相关性研究

目的探究miR-211-5p和p27^Kip1在胃癌组织中的表达水平,以及其与患者临床病理学特征和预后的关系。方法收集2015年8月至2016年8月在开滦总医院林西医院接受手术治疗的60例胃癌患者的临床资料,采用实时定量聚合酶链反应和免疫组织化学法检测胃癌组织、癌旁组织(距离肿瘤边缘>2 cm)中miR-211-5p和p27^Kip1的表达水平。探讨miR-211-5p和p27^Kip1阳性率与患者的临床病理学特征和预后的相关性。采用Kendall′s tau-b等级相关系数分析miR-211-5p与p27^Kip1表达的相关性。结果与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-211-5p的阳性率显著升高,而p27^Kip1的阳性率则显著降低。miR-211-5p和p27^Kip1的阳性率与患者的TNM分期、淋巴结转移和浸润深度有关(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤位置和大小不相关(P>0.05)。miR-211-5p与p27^Kip1在胃癌组织中的表达水平呈负相关(r=-0.455,P<0.031),miR-211-5p阳性表达者的3年生存率显著低于阴性表达者(log-rankχ^2=19.85,P<0.0001);而p27^Kip1阳性表达者的3年生存率则高于阴性表达者(log-rankχ^2=17.53,P<0.0001)。结论在胃癌组织中miR-211-5p呈高表达,p27^Kip1呈低表达,两者呈负相关,且其表达水平的异常提示胃癌患者的预后不良。

乳腺浸润性小叶癌组织中miR-211-5p、SETBP1的表达及其意义

目的检测乳腺浸润性小叶癌(ILC)组织中与miR-211-5p,SET结合蛋白1(SETBP1)的表达情况,并探讨两者在ILC中表达的临床意义。方法收集2019年1月至2020年9月海南医学院第一附属医院诊治的82例女性ILC患者的临床病理资料。应用荧光定量PCR检测癌组织和癌旁组织中miR-211-5p、SETBP1的表达水平;分析miR-211-5p、SETBP1的表达与ILC患者临床病理特征的关系;采用Pearson线性相关分析miR-211-5p与SETBP1在ILC中表达的相关性。采用生物信息学软件预测miR-211-5p与SETBP1的结合位点。结果ILC中miR-211-5p的表达低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。ILC中SETBP1的表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。与肿瘤TNM分期Ⅰ~Ⅱ期ILC癌组织比较,肿瘤分期Ⅲ~Ⅳ期的ILC癌组织中miR-211-5p表达显著较低,而SETBP1的表达显著较高(P<0.05)。与无腋淋巴转移ILC癌组织比较,伴腋淋巴转移的ILC癌组织中miR-211-5p表达显著较低,而SETBP1的表达显著较高(P<0.05)。ILC癌组织中miR-211-5p与SETBP1的表达呈负相关(r=-0.573,P<0.05)。生物信息学软件预测SETBP1的3’UTR区第374至381个碱基处存在与miR-211-5p潜在的互补结合位点。结论miR-211-5p在ILC癌组织中表达降低,SETBP1在ILC癌组织中表达升高,miR-211-5p、SETBP1的表达均与乳腺癌患者的肿瘤分期及腋淋巴结转移相关,共同参与ILC的进展,可能是ILC的诊断治疗靶点。

有氧运动对肥胖大鼠海马中miR-211-5p的表达及其调控因子的影响

目的:构建肥胖大鼠的模型,探讨有氧运动对肥胖大鼠血清及海马中微小RNA-221-5p(miR-211-5p)的影响,并关注有氧运动对下游因子ATP结合盒转运子A1(ABCA1)、S-100B蛋白(S-100B)和脑源性神经营养因子(BDNF)的影响。方法:使用5周龄清洁雄性大鼠36只,随机分为3组,正常对照组(C组)、高脂膳食组(HF组)和高脂膳食+有氧运动组(HE组),每组12只。C组应用普通饲料喂养,HF和HE组均应用高脂饲料喂养,均喂养10周。HE组进行10周60min/d的无负重有氧运动,每周6d。实验结束后应用实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组血清和海马组织中miR-211-5p的含量,应用Western Blot检测各组海马中ABCA1和S100B的表达,应用免疫组化方法检测各组海马组织中BDNF的表达。结果:三组血清和海马组织中miR-211-5p的表达差别均有统计学意义(P<0.05),血清和海马组织中miR-211-5p的表达具有正相关性(P<0.05)。HF组中ABCA1和BDNF的表达明显均明显低于C组,S-100B的表达明显高于C组;HE组中ABCA1和BDNF的表达均明显高于HF组,S-100B的表达明显低于HF组(P<0.05)。结论:10周的高脂膳食能成功诱导出肥胖大鼠模型,血清及海马组织中miR-211-5p的表达均明显升高。有氧运动对肥胖大鼠血清和海马组织中miR-211-5p及下游因子ABCA1、S-100B和BDNF均有调节作用。有氧运动可能通过降低miR-211-5p的表达减少神经细胞损伤因子的生成,增加神经营养因子的分泌,发挥对神经细胞的保护作用。

下调lncRNA SPINT1-AS1通过靶向miR-211-5p对卵巢癌细胞生长和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)SPINT1-AS1对卵巢癌细胞生长和侵袭的影响及分子机制。方法GEPIA数据库分析卵巢癌组织和正常组织中lncRNA SPINT1-AS1的表达。荧光实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)方法测定卵巢癌细胞系SKOV-3、A2780、OC3、HO-8910和永生化卵巢上皮细胞系IOSE80中lncRNA SPINT1-AS1的表达。将SKOV-3细胞分为si-SPINT1-AS1组(转染lncRNA SPINT1-AS1 siRNA)和si-NC组(转染siRNA control)。MTT法和Transwell小室实验测定下调lncRNA SPINT1-AS1对SKOV-3细胞增殖活性和侵袭的影响。Western blot检测增殖表型蛋白(PCNA、CyclinD1)和转移表型蛋白(MMP2、MMP9)的表达。采用双荧光素酶报告系统鉴定lncRNA SPINT1-AS1和miR-211-5p的靶向关系。qRT-PCR检测下调lncRNA SPINT1-AS1对miR-211-5p表达的影响。结果与正常组织比较,卵巢癌组织中lncRNA SPINT1-AS1表达水平升高(P<0.01)。与IOSE80细胞比较,卵巢癌细胞系SKOV-3、A2780、OC3、HO-8910中lncRNA SPINT1-AS1表达水平升高(P<0.05),SKOV-3细胞中lncRNA SPINT1-AS1表达水平最高(P<0.01)。与si-NC组比较,si-SPINT1-AS1组SKOV-3细胞吸光度降低(P<0.05),侵袭细胞数降低(P<0.05),增殖表型蛋白PCNA、CyclinD1表达降低(P<0.01),转移表型蛋白MMP2、MMP9表达降低(P<0.01)。lncRNA SPINT1-AS1能够与miR-211-5p直接结合(P<0.01)。与si-NC组比较,si-SPINT1-AS1组SKOV-3细胞中miR-211-5p表达水平升高(P<0.01)。结论卵巢癌组织和细胞系中lncRNA SPINT1-AS1表达升高,下调lncRNA SPINT1-AS1通过靶向上调miR-211-5p能够抑制卵巢癌SKOV-3细胞的增殖和侵袭。

MiR-211-5p在原发性高血压患者血清中的表达及对血管内皮细胞凋亡和炎性反应的影响

目的 探究miR-211-5p在原发性高血压患者血清中的表达及对血管内皮细胞凋亡和炎性反应的影响。方法 采用qRT-PCR检测原发性高血压患者血清中miR-211-5p表达水平。用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞,将细胞分为Control组、AngⅡ组、AngⅡ+miR-NC组、AngⅡ+miR-211-5p组、AngⅡ+miR-211-5p+pcDNA组、AngⅡ+miR-211-5p+EGR1组。qRT-PCR检测miR-211-5p、EGR1 mRNA表达水平;CCK8法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测Cleaved cas-3、Bax、Bcl-2、EGR1蛋白表达;ELISA法检测TNF-α、IL-1β表达;双荧光素酶实验检测miR-211-5p、EGR1靶向关系。结果 原发性高血压患者血清内miR-211-5p表达水平高于健康对照。与Control组相比,AngⅡ组miR-211-5p表达水平、细胞活性、Bcl-2蛋白表达明显降低,凋亡率、Cleaved cas-3蛋白、Bax蛋白、TNF-α、IL-1β表达、EGR1 mRNA和蛋白表达明显升高。与AngⅡ+miR-NC组相比,AngⅡ+miR-211-5p组miR-211-5p表达水平、细胞活性、Bcl-2蛋白表达明显升高,凋亡率、Cleaved cas-3蛋白、Bax蛋白、TNF-α、IL-1β表达、EGR1 mRNA和蛋白表达明显降低。MiR-211-5p靶向负调控EGR1表达,上调EGR1可逆转过表达miR-211-5p对AngⅡ诱导HUVECs凋亡和炎性反应的影响。结论 原发性高血压患者的miR-211-5p低表达和miR-211-5p靶向负调控EGR1表达可减轻的AngⅡ诱导血管内皮细胞凋亡和炎性反应。

miR-211-5p靶向TLR4通路减轻自身免疫性肝炎小鼠肝损害

目的 探讨微小核糖核酸-211-5p(miR-211-5p)靶向Toll样受体4(TLR4)通路对自身免疫性肝炎小鼠肝损害的影响。方法 将通过尾静脉注射刀豆蛋白A(Con A)建立的自身免疫性肝炎小鼠随机分为模型组、对照组、沉默组、过表达组,分别经尾静脉注射生理盐水、miR-NC、miR-211-5p antagomir、miR-211-5p agomir。检测各组小鼠肝功能及炎症因子水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理改变;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测脾脏组织TLR4、肝组织miR-211-5p、TLR4、核因子-κB(NF-κB p65)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信使核糖核酸(mRNA)表达;Western blot法检测肝组织TLR4、NF-κB p65、NLRP3蛋白表达及磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)水平;荧光素酶活性实验验证miR-211-5p是否可靶向调控TLR4。结果 与模型组和对照组比,沉默组ALT、AST、TNF-α和IL-1β水平升高、IL-10水平降低(P<0.05),肝组织有严重炎症细胞浸润,过表达组ALT、AST、TNF-α和IL-1β水平降低、IL-10水平升高(P<0.05),肝组织有轻度炎性细胞浸润。与模型组和对照组比,沉默组脾脏组织TLR4 mRNA表达、肝组织TLR4、NF-κB p65、NLRP3 mRNA及蛋白表达及p-NF-κB p65水平升高,miR-211-5p表达降低(P<0.05),过表达组脾脏组织TLR4 mRNA表达、肝组织TLR4、NF-κB p65、NLRP3 mRNA及蛋白表达及p-NF-κB p65水平降低,miR-211-5p表达升高(P<0.05);TLR4是miR-211-5p的靶基因。结论 miR-211-5p可通过靶向抑制TLR4通路减轻自身免疫性肝炎小鼠肝损害。

CCRL2、miR-211-5p在食管鳞癌组织中表达及临床意义

目的探讨趋化因子诱饵受体2(CCRL2)和微小RNA-211-5p(miR-211-5p)在食管鳞癌组织中的表达情况及其临床意义。方法选择2015年6月至2017年10月于本院行手术治疗的食管鳞癌患者83例,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测食管鳞癌组织与癌旁组织中CCRL2 mRNA、miR-211-5p的表达水平,免疫组织化学染色检测CCRL2蛋白的表达水平,Pearson法分析CCRL2 mRNA与miR-211-5p的相关性,并分析其与食管鳞癌患者临床病理参数及预后的关系。结果与癌旁组织比较,食管鳞癌组织CCRL2 mRNA(1.05±0.21 vs 2.68±0.52,P<0.001)的表达水平及蛋白质阳性率(24.10%vs 62.65%,P<0.001)均显著升高,而miR-211-5p的表达水平(1.01±0.18 vs 0.61±0.15,P<0.001)显著降低(P<0.05);食管鳞癌组织中CCRL2和miR-211-5p呈负相关(r=-0.713,P<0.001);CCRL2和miR-211-5p的表达水平与肿瘤分化程度、TNM分期和淋巴转移有关(P<0.05);食管鳞癌患者CCRL2阳性表达组的3年累积生存率显著低于CCRL2阴性表达组(30.84%vs 54.98%,P=0.011),而miR-211-5p高表达组的3年累积生存率显著高于miR-211-5p低表达组(58.72%vs 24.31%,P<0.001)。结论食管鳞癌组织中CCRL2呈高表达、miR-211-5p呈低表达,且均与患者预后有关,可作为食管鳞癌患者潜在的预后标志物。

miR-211-5p在局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠模型中表达分析

目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注(MCAO/R)损伤模型大鼠脑组织miR-211-5p表达情况。方法取SPF级成年大鼠40只,分为假手术组(Sham组)、MCAO/R+溶剂组(Vehicle组)、MCAO/R+miR-211-5p组(Mimic组)、MCAO/R+anti-miR-211-5p组(Antagomir组),每组10只。评价各组大鼠神经功能缺损评分,检测各组大鼠脑梗死体积及miR-211-5p、脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达水平。结果Vehicle组存活率低于Sham组,Longa评分升高,miR-211-5p处理后存活率升高,Longa评分降低(P<0.05)。Mimic组脑梗死体积百分比较Vehicle组降低,Antagomir组脑梗死体积百分比高于Mimic组(P<0.05)。与Sham组和Vehicle组比较,Mimic组miR-211-5p表达量升高,Antagomir组表达量降低,Antagomir组miR-211-5p表达量低于Mimic组(P<0.05)。Mimic组BDNF表达量显著高于其他3组,Antagomir组BDNF表达量最低(P<0.05)。结论miR-211-5p表达与大鼠MCAO/R损伤相关。

七氟烷诱导的miR-211-5p对新生小鼠发育期神经毒性的影响及可能机制

目的 探究七氟烷诱导的miR-211-5p对新生小鼠发育期神经毒性的影响及可能机制。方法 将出生后第6天的新生小鼠随机分为对照组、七氟烷组、七氟烷+antagomiR-NC组和七氟烷+antagomiR-211-5p组,每组6只。RT-qPCR检测新生小鼠海马组织miR-211-5p表达水平;HE染色检测新生小鼠海马组织病理损伤;TUNEL实验检测新生小鼠海马组织神经细胞凋亡;RT-qPCR检测新生小鼠海马组织IL-6和TNF-α mRNA表达;生物信息学预测miR-211-5p与NQO1 mRNA的潜在结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证;Western blot检测新生小鼠海马组织NQO1和PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达。结果 七氟烷上调新生小鼠海马组织miR-211-5p表达,促进海马组织病理损伤、神经细胞凋亡和炎症因子表达水平;antagomiR-211-5p降低七氟烷诱导的新生小鼠海马组织miR-211-5p表达,抑制海马组织病理损伤、神经细胞凋亡和炎症因子表达水平。miR-211-5p与NQO1 mRNA靶向结合。七氟烷降低新生小鼠海马组织NQO1蛋白表达,抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路激活;antagomiR-211-5p增加七氟烷处理的新生小鼠海马组织NQO1蛋白表达,激活PI3K/AKT/mTOR信号通路。结论 七氟烷通过诱导miR-211-5p下调NQO1抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路导致发育期神经毒性。

新风胶囊抑制软骨细胞炎症和细胞外基质降解:基于调控miR-502-5p/TRAF2/NF-κB轴

目的探讨新风胶囊(XFC)对白介素(IL)-1β诱导的软骨细胞功能的影响及作用机制。方法构建IL-1β诱导的软骨细胞炎症模型;SD大鼠灌胃制备XFC含药血清。细胞增殖实验(CCK-8)和流式细胞术筛选最佳XFC含药血清浓度;双荧光素酶报告分析miR-502-5p和TRAF2的靶向关系。构建miR-502-5p抑制表达质粒(inhibitor)及阴性对照组,转染至软骨细胞中。分为对照组(NC),IL-1β组,XFC组,IL-1β+NC-inhibitor,IL-1β+miR-502-5pinhibitor,IL-1β+miR-502-5pinhibitor+XFC最佳含药血清组,酶联免疫吸附试验(ELASA)检测IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-4、IL-10的水平。逆转录PCR(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹实验(WB)、免疫荧光法检测Ⅱ型胶原α1(COL2A1)、基质金属蛋白酶13(MMP13)、软骨蛋白聚糖抗体(ADAMTS5)和miR-502-5p/TRAF2/NF-κB基因的表达。结果与NC组相比,IL-1β组中软骨细胞活力下降,细胞凋亡率升高,且miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达下降,IL-1β、TNF-α和ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达升高(P<0.05)。筛选得出20%XFC为最佳含药血清浓度。与IL-1β组相比,XFC含药血清干预后,软骨细胞活力升高,细胞凋亡率下降,IL-1β、TNF-α、ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κBp65表达下降,miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达升高(P<0.05)。与NC-inhibitor相比,转染miR-502-5p inhibitor后,IL-1β、TNF-α、ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达升高,miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达下降;与miR-502-5pinhibitor相比,将miR-502-5pinhibitor转染的软骨细胞和最佳XFC含药血清共培养后,XFC含药血清能逆转miR-502-5p抑制状态对软骨细胞炎症和ECM的影响。结论XFC抑制软骨细胞炎症、细胞外基质降解,减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤,其机制可能是通过调节miR-502-5p/TRAF2/NF-κB轴。

miR-214-5p通过DNMT1介导的AXIN2基因DNA甲基化修饰在皮肤基底细胞癌中的作用机制

目的探讨皮肤基底细胞癌中轴抑制蛋白2(Axis inhibition protein 2,AXIN2)基因启动子甲基化对基因转录的影响及miR-214-5p通过靶向DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT1)对AXIN2甲基化率的调控机制。方法收集2022年1月-2023年6月在广州市皮肤病防治所就诊治疗的102例皮肤基底细胞癌(Cutaneous basal cell carcinoma,BCC)患者作为研究对象,提取癌组织和癌旁正常组织标本及基线资料。焦磷酸测序法检测AXIN2基因启动子区甲基化率。实时荧光定量PCR检测AXIN2、DNMT1基因mRNA和miR-214-5p的表达水平。将miR-214-5p模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)及其阴性对照(mimic NC和inhibitor NC)分别对基底细胞癌A431细胞进行转染,48 h后检测DNMT1基因mRNA表达水平和AXIN2基因甲基化率。结果BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率显著高于癌旁正常组织(t=5.128,P<0.001),AXIN2基因mRNA相对表达水平显著低于癌旁正常组织(t=7.826,P<0.001),DNMT1基因mRNA表达水平显著高于癌旁正常组织(t=4.838,P<0.001),miR-214-5p表达水平显著低于癌旁正常组织(t=5.426,P<0.001)。BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率与其mRNA表达水平呈负相关(r=-0.793,P<0.001),DNMT1基因mRNA水平与AXIN2基因甲基化率呈正相关(r=0.814,P<0.001),miR-214-5p表达水平与DNMT1基因mRNA水平呈负相关(r=-0.747,P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,DNMT1是miR-214-5p的靶基因。细胞转染后,与mimic NC、inhibitor和inhibitor NC比较,mimic的DNMT1基因mRNA水平、AXIN2基因甲基化率显著降低(P<0.001);而inhibitor的DNMT1基因mRNA水平和AXIN2基因甲基化率相较于其他三组明显上升(P<0.001)。结论miR-214-5p可通过调控下游靶蛋白DNMT1表达,影响AXIN2基因的DNA甲基化率,调控AXIN2基因的表达水平,参与皮肤基底细胞癌的发生机制。

circ0000799经miR-1287-5p/GPX4轴调控铁死亡促进三阴乳腺癌脑转移

目的探索circ0000799经miR-1287-5p/GPX4轴对铁死亡促进三阴乳腺癌脑转移的影响机制。方法检测circ0000799在乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中的表达。沉默亲代三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231和子代脑转移细胞MDA-MB-231-BM中circ0000799的表达。比较各组细胞生长、侵袭能力、脑转移结节数目。使用双荧光素酶报告基因实验验证circ0000799、miR-1287-5p、GPX4调控关系。检测circ0000799对铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)表达和总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比的影响。结果与人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)或癌旁组织比较,circ0000799在三阴乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中上调,且在子代三阴乳腺癌细胞系及脑转移灶中上调最为显著(P<0.05)。与sh-circCTR组比较,sh-circ0000799组细胞生长、侵袭能力降低(P<0.05)。sh-circCTR组、sh-circ0000799组、sh-circ0000799+RSL3组脑转移结节数量依次降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,circ0000799可与miR-1287-5p相互作用,miR-1287-5p可与GPX4相互作用。与sh-circCTR组比较,sh-circ0000799组miR-1287-5表达增加,总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比和GPX4表达降低(P<0.05)。与miR-CTR组比较,miR-1287-5p组GPX4 mRNA表达降低(P<0.05)。结论circ0000799在三阴乳腺癌中高表达且可能通过miR-1287-5p/GPX4轴促进三阴乳腺癌脑转移。

hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡在胃癌5-氟尿嘧啶化疗耐药性中的作用研究

目的探究hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡对胃癌的5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗耐药性的影响。方法通过5-Fu处理AGS细胞构建5-Fu耐药细胞模型(AGS/5-Fu),采用CCK8法检测5-Fu对AGS和AGS/5-Fu细胞活性的影响,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中hsa-circ-002179和miR-143-3p的表达;通过流式细胞术和Western blot分别检测细胞凋亡水平与自噬相关蛋白LC3、Beclin-1和p62的表达。同时,通过软件预测hsa-circ-002179与miR-143-3p的结合位点,并采用RIP和双荧光素酶实验验证其结合作用。结果与对照组比较,耐药组的细胞活性[(172.33±9.53)%比(106.00±6.16)%,P<0.01]和自噬水平升高、凋亡率(20.5%比43.8%,P<0.01)降低,hsa-circ-002179表达升高[(4.46±0.34)比(1.05±0.66),P<0.01];转染si-002179后,耐药细胞活性降低[(80.00±2.45)%比(102.67±7.13)%,P<0.05],而凋亡水平升高(31.3%比21.8%,P<0.05)。RIP和双荧光素酶报告实验证实hsa-circ-002179与miR-143-3p直接结合,且与对照组比较,耐药细胞中miR-143-3p的表达降低[(0.38±0.05)比(1.04±0.07),P<0.01]。并且,hsa-circ-002179能够调控miR-143-3p的水平。同时,miR-143-3p抑制剂处理能够升高转染si-002179后的耐药细胞自噬水平。自噬抑制剂处理降低了耐药细胞的自噬水平和细胞活性,升高凋亡水平;在此基础上转染OE-002179则升高自噬水平和细胞活性,降低凋亡水平,进一步转染miR-143-3p模拟物可以逆转以上变化。结论hsa-circ-002179靶向miR-143-3p可能可以调控自噬-凋亡平衡,进而影响胃癌细胞的5-Fu化疗耐药性。