脑胶质瘤组织中ZnT1 mRNA、miR-542-3p表达水平与病理特征的关系及对术后复发的预测价值

目的探讨脑胶质瘤组织中锌转运体1(ZnT1)信使RNA(mRNA)、微小RNA(miRNA)miR-542-3p表达水平与肿瘤病理特征的关系及对脑胶质瘤患者术后复发的预测价值。方法将2018年6月至2021年1月于该院行手术治疗的92例脑胶质瘤患者纳入研究。比较患者胶质瘤组织及瘤旁组织ZnT1 mRNA、miR-542-3p的表达水平。比较不同病理特征的瘤组织ZnT1 mRNA、miR-542-3p的表达水平。分析患者术后复发的影响因素。评估ZnT1 mRNA、miR-542-3p表达水平用于预测术后复发的价值。结果胶质瘤组织ZnT1 mRNA表达水平高于瘤旁组织(P<0.05),miR-542-3p表达水平低于瘤旁组织(P<0.05)。胶质瘤组织ZnT1 mRNA、miR-542-3p表达水平与病理分级、组织学分化、肿瘤浸润有关(P<0.05)。胶质瘤组织中ZnT1 mRNA高表达及miR-542-3p低表达会增加脑胶质瘤患者术后复发风险(P<0.05)。构建ZnT1 mRNA、miR-542-3p联合检测用于术后复发预测的方程,绘制预测术后复发的受试者工作特征(ROC)曲线,结果显示,这两项指标联合预测的效能高于单一指标预测(P<0.05)。结论脑胶质瘤组织中ZnT1 mRNA、miR-542-3p表达水平与病理分级、组织学分化、肿瘤浸润等病理特征有关,二者联合检测可用于预测患者术后复发。

CircITGB6调节miR-542-3p/PCNA轴对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响及其机制

目的:探讨环状RNA(Circ)ITGB6调节微小RNA(miR)-542-3p/增殖细胞核抗原(PCNA)轴对卵巢癌(OC)细胞顺铂(DDP)耐药性的影响及其机制。方法:qRT-PCR检测OC组织及正常卵巢组织、SKOV3、SKOV3/DDP、正常卵巢上皮细胞系(IOSE-80)中CircITGB6、miR-542-3p、PCNA mRNA表达水平;SKOV3/DDP设置为对照组(不作处理)、干扰(si CircITGB6)组(转染si CircITGB6)、阴性对照(si NC)组(转染si NC)、si CircITGB6+抑制物阴性对照(inhibitor NC)组(共转染si CircITGB6、inhibitor NC)、si CircITGB6+miR-542-3p抑制物(miR-542-3p inhibitor)组(共转染si CircITGB6、miR-542-3p inhibitor)。流式细胞仪、CCK-8、qRT-PCR分别检测各组SKOV3/DDP细胞中凋亡、增殖、耐药性及CircITGB6、miR-542-3p、PCNA mRNA表达水平;双荧光素酶验证miR-542-3p与CircITGB6、PCNA的靶向关系;Western blot检测PCNA、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞增殖相关核抗原(Ki-67)。结果:OC组织中CircITGB6(1.66±0.17比0.95±0.10)、PCNA mRNA(1.59±0.16比0.98±0.10)表达高于正常卵巢组织,miR-542-3p表达(0.64±0.07比1.06±0.11)降低(均P<0.05);IOSE-80、SKOV3、SKOV3/DDP中CircITGB6、PCNA mRNA表达依次增加,miR-542-3p表达依次减少(P<0.05);与对照组、si NC组相比,si CircITGB6组细胞增殖率及IC50、CircITGB6(1.21±0.13比1.88±0.19、1.84±0.19)、Ki-67、PCNA显著降低,凋亡率及Bax、miR-542-3p表达(0.86±0.09比0.51±0.06、0.55±0.06)显著增加(均P<0.05);与si CircITGB6+inhibitor NC组相比,CircITGB6+miR-542-3p inhibitor组细胞增殖率及IC50、Ki-67、PCNA显著增加,凋亡率及Bax、miR-542-3p表达显著降低(均P<0.05)。结论:干扰CircITGB6表达可通过调节miR-542-3p/PCNA轴降低SKOV3对DDP的耐药性。

食道癌中miR-542-3p对Survivin基因的作用研究

目的研究食道癌中Survivin基因是否受某些miRNA的调控,探讨miR-542-3p的表达变化对Survivin基因的影响。方法细胞水平上通过转染miR-542-3p的模拟物,从而过表达miR-542-3p,通过荧光定量PCR检测Survivin基因的表达变化情况。结果 miR-542-3p过表达后,Survivin基因的表达水平显著降低。结论根据上述结果,笔者推测miR-542-3p对Survivin基因具有负调控作用,有利于改善食道癌的恶化,为食道癌的治疗提供一种潜在的手段。

miR-542-3p对脂多糖诱导的人支气管上皮细胞增殖和迁移的影响及机制研究

目的:探讨miR-542-3p在儿童呼吸哮喘中的作用及其可能机制。方法:用不同浓度的脂多糖(LPS)分别处理BEAS-2B细胞24 h构建哮喘细胞模型,采用脂质体法将miR-542-3p模拟物、抑制物及对照转染至BEAS-2B。RT-qPCR检测miR-542-3p的表达水平,CCK-8和划痕法检测细胞增殖和迁移能力。RT-qPCR和western blot法检测白细胞介素33(IL-33)和可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)的mRNA和蛋白表达水平的变化。通过在线网站microRNA.org预测分析miR-542-3p与IL-33的靶向关系,使用双萤光素酶报告基因实验进行验证,并对miR-542-3p与IL-33进行Spearman相关性分析。通过共转染miR-542-3p和pcDNA3.1-IL-33,检测IL-33对miR-542-3p功能的影响。结果:与未处理组(untreated)相比,miR-542-3p在LPS处理的BEAS-2B细胞中相对表达量显著下调(P<0.05),而IL-33和sST2的mRNA相对表达量均显著上调(均P<0.05)。miR-542-3p下调IL-33的表达(P<0.05),过表达IL-33抑制miR-542-3p对LPS诱导的BEAS-2B增殖和迁移的影响(均P<0.05)。结论:miR-542-3p可能通过抑制IL-33/sST2信号通路缓解儿童呼吸哮喘。

miR-542-3p在恶性肿瘤中的表达及其作用的研究进展

微小RNA(miRNA)是一类内源性非编码RNA,通过结合靶标信使RNA(mRNA),在转录后水平调控基因表达。miRNA参与多种生理和病理过程,在恶性肿瘤的发生发展中发挥促癌或抑癌基因功能。近期研究发现,miR-542-3p在肝癌、肺癌等多种癌肿中表达异常,并参与调控增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物学过程。

结直肠癌患者血清miR-542-3p和miR-203水平及临床意义

目的探讨结直肠癌患者血清miR-542-3p和miR-203水平检测及临床意义。方法选取2014年8月至2018年9月收治的结直肠癌患者134例为观察组,于根治性术前及术后3~4周采集全血;同期健康体检者118例为对照组,体检时采血;测定血清miR-542-3p、miR-203及血清癌胚抗原(CEA)表达水平。结果术前,观察组miR-542-3p、miR-203水平低于对照组,CEA水平高于对照组(P<0.05)。术后,观察组miR-542-3p、miR-203水平高于术前,CEA水平低于术前(P<0.05)。而病理学分级越高、TNM分期越高、有淋巴血管间隙浸、有淋巴结转移、有复发患者血清miR-542-3p、miR-203表达水平越低(P<0.05)。CEA与miR-542-3p、miR-203呈负相关(r=-0.569、-0.613,P<0.05)。CEA、miR-542-3p、miR-203ROC曲线下面积(AUC)分别为0.753(95%CI 0.602~0.798),0.680(95%CI 0.523~0.745),0.658(95%CI 0.569~0.779),miR-542-3p、miR-203的AUC相近,皆低于CEA,miR-542-3p、miR-203诊断结直肠癌的灵敏度、特异度差异无统计学意义(P>0.05),皆低于CEA(P<0.05)。结论miR-542-3p、miR-203在结直肠癌患者血清的表达量降低,miR-542-3p、miR-203在结直肠癌的发生发展过程中起抑制作用;miR-542-3p、miR-203具有较高的灵敏度、特异度,可作为诊断结直肠癌的生物学标志物。

miR-542-3p在老年鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤进展中的作用及其临床意义

目的 探究微小RNA-542-3p (miR-542-3p)在鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤中的表达和临床意义及对鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤细胞的增殖、侵袭和凋亡的影响。方法 收集56例鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤患者和40例同时期慢性鼻腔炎患者,取病理制作并石蜡标本。应用qRT-PCR法检测两组患者病理石蜡标本中miR-542-3p的表达,分析鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤标本中miR-542-3p相对表达量与临床病理特征的关系。取SNK-6细胞培养,将细胞分为miR-542-3p组(转染miR-542-3p模拟物)、miR-NC组(转染miR-542-3p模拟物阴性对照)、anti-miR-542-3p组(转染miR-542-3p抑制剂)和anti-miR-NC组(转染miR-542-3p抑制剂阴性对照);MTT法测定各组细胞增殖能力,Transwell法测定各组细胞侵袭能力,TUNEL法观察各组细胞凋亡情况,Western印迹实验检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3的表达。结果 鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤患者中miR-542-3p相对表达量显著低于同时期慢性鼻腔炎患者(P<0.05),鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤患者miR-542-3p低表达与患者临床分期较晚有关。过表达miR-542-3p能抑制细胞增殖、侵袭,促进细胞凋亡;敲低miR-542-3p能促进细胞增殖、侵袭,并抑制凋亡。结论 miR-542-3p在鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤中显著下调,且与患者临床分期有关。miR-542-3p可显著抑制鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤的进展。

miR-542-3P对肝细胞癌诊断和预后判断的临床价值研究

目的探讨miR-542-3P对肝细胞癌诊断和预后判断的临床价值,为临床治疗提供理论依据。方法选取2019年1月至2019年7月在该院接受治疗的60例肝癌患者为作为观察组,均经病理学检查确诊,在该院进行体检的60例健康体检者作为对照组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法对两组患者血清中miR-542-3P水平、血清癌胚抗原(CEA)进行测定,分析miR-542-3P水平与临床病理特征之间的关系,采用ROC曲线分析miR-542-3P在肝癌诊断中的诊断价值。结果与对照组相比,观察组中血清中miR-542-3p水平明显偏低,且差异具有统计学意义(P<0.05)。与治疗前相比,观察组血清中miR-542-3p水平明显升高,且差异具有统计学意义(P<0.05);不同年龄、肿瘤大小组血清组中miR-542-3p水平无明显差异(P>0.05),分化程度越高、TNM分期越高、存在淋巴结转移血清中的miR-542-3p的水平越低,且差异存在统计学意义(P<0.05);ROC曲线分析显示miR-542-3p区分肝癌患者与正常人曲线下面积为0.8245(95%CI:0.7483~0.9008),差异有统计学意义(P值为0.0283),敏感度与特异度分别为79.2%与75.6%。结论miR-542-3P对肝癌的发生及发展具有一定的抑制作用,在患者血清中表达水平较低,具有一定的灵敏度、特异度、对肝癌的诊断及预后具有一定价值。

miR-542-3p过表达对葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎大鼠的作用及机制初探

目的探究miR-542-3p过表达对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)大鼠的作用及机制。方法采用DSS溶液饲养构建UC大鼠模型,将实验大鼠随机分为正常组、模型组、空载体组和过表达组,每组各10只。其中空载体组尾静脉注射含空载质粒的慢病毒,过表达组尾静脉注射含过表达miR-542-3p质粒的慢病毒。采用苏木精-伊红(HE)染色法观察各组结肠组织的病理学变化;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清白细胞介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time qPCR)法检测结肠组织中miR-542-3p的相对表达量;采用蛋白质免疫印迹法检测结肠组织中Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)的表达水平。结果与正常组比较,模型组疾病活动指数(DAI)评分、IL-4、TNF-α、TLR4和NF-κB表达水平均升高,miR-542-3p相对表达量降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。与模型组和空载体组比较,过表达组DAI评分、IL-4、TNF-α、TLR4和NF-κB表达水平均降低,miR-542-3p相对表达量升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论miR-542-3p过表达对UC大鼠有一定保护作用,可减轻结肠组织炎性反应程度,其机制可能与调控TLR4/NF-κB信号通路有关。

复发性脑胶质瘤组织TM4SF1 mRNA、ZnT1 mRNA、miR-542-3p表达与细胞增殖侵袭恶性行为的关系及预测预后的效能

目的探讨复发性脑胶质瘤组织四跨膜超家族成员1蛋白(TM4SF1)mRNA、锌转运体1(ZnT1)mRNA、miR-542-3p表达与细胞增殖侵袭恶性行为的关系及预测预后的效能。方法选取2016年3月至2020年3月我院收治的169例复发性脑胶质瘤患者,根据6个月预后情况分为死亡组、生存组。比较2组基线资料、组织TM4SF1 mRNA、ZnT1 mRNA、miR-542-3p表达,并比较不同TM4SF1 mRNA、ZnT1 mRNA、miR-542-3p表达者脑胶质瘤WHO分级,采用Cox比例风险回归模型分析预后相关因素,受试者工作特征曲线(ROC)及ROC下面积(AUC)分析各指标预测预后的效能,卡普兰-迈耶(Kaplan-Meier,KM)生存曲线分析不同TM4SF1 mRNA、ZnT1 mRNA、miR-542-3p表达水平者生存率。结果死亡组距离首次手术时间、脑胶质瘤WHO分级、肿瘤切除程度、TM4SF1 mRNA、ZnT1 mRNA、miR-542-3p表达与生存组比较,差异有统计学意义(P<0.05);以2组TM4SF1 mRNA、ZnT1 mRNA、miR-542-3p表达均值为分界进行分层,TM4SF1 mRNA、ZnT1 mRNA、miR-542-3p高表达与低表达患者脑胶质瘤WHO分级比较,差异有统计学意义(P<0.05);Cox比例风险回归模型将距离首次手术时间、脑胶质瘤WHO分级、肿瘤切除程度控制后,TM4SF1 mRNA、ZnT1 mRNA、miR-542-3p仍与患者预后相关(P<0.05);TM4SF1 mRNA+ZnT1 mRNA+miR-542-3p预测预后的AUC为0.938,大于单一指标预测(P<0.05);TM4SF1 mRNA、ZnT1 mRNA、miR-542-3p高危患者患者生存率低于低危达者(P<0.05)。结论脑胶质瘤组织TM4SF1 mRNA、ZnT1 mRNA、miR-542-3p表达与细胞增殖侵袭恶性行为关系密切,是预后的主要影响因素,三者联合可为临床预测预后提供参考依据。

癫痫患者血浆miR-542-3p TLR4水平及临床意义

目的探讨癫痫患者血浆miR-542-3p、Toll样受体4水平及其对癫痫发作类型的预测价值。方法对134例原发性癫痫患者(观察组)和140名健康志愿者(对照组)应用实时荧光定量聚合酶链式反应测定血浆miR-542-3p水平,应用酶联免疫吸附实验测定血浆Toll样受体4水平。应用受试者工作特征曲线分析癫痫患者血浆miR-542-3p、Toll样受体4对癫痫不同发作类型的预测价值,应用Pearson相关分析探讨miR-542-3p与Toll样受体4的相关性。结果观察组血浆miR-542-3p水平显著低于对照组(P<0.01),Toll样受体4水平显著高于对照组(P<0.01)。全面性发作患者血浆miR-542-3p水平显著低于部分性发作患者(P<0.01),Toll样受体4水平显著高于部分性发作患者(P<0.01)。受试者工作特征曲线显示,血浆miR-542-3p预测癫痫不同发作类型的曲线下面积为0.886,截断值为0.838,敏感度为87.3%,特异度为76.2%;Toll样受体4预测癫痫不同发作类型的曲线下面积为0.803,截断值为2.285 ng·ml^(-1),敏感度为83.1%,特异度为71.4%;两者联合检测预测癫痫不同发作类型的曲线下面积为0.926,敏感度为93.0%,特异度为85.7%。癫痫患者血浆miR-542-3p与Toll样受体4呈显著负相关(r=-0.610,P<0.05)。结论癫痫患者血浆miR-542-3p水平下降,Toll样受体4水平升高,两者呈显著负相关,对癫痫发作类型有一定的预测价值,未来或可作为预测癫痫发作类型的有效指标。

血清lncRNA TUG1和miR-542-3p表达与急性脑梗死患者病情和预后的关系

目的分析长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)、miR-542-3p与急性脑梗死(ACI)患者疾病严重程度和预后的关系。方法选取2020-01—2021-12在临汾市人民医院就诊并确诊为ACI患者174例,采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分评估疾病的严重程度,分为轻度组70例,中度组55例,重度组49例;根据90 d内患者改良Rankin量表(mRS)评分分为预后不良组70例,预后良好组104例。选取150例健康体检者为对照组。收集研究对象一般资料,采用实时荧光定量PCR法对血清lncRNA TUG1、miR-542-3p相对表达量进行检测,Pearson法分析lncRNA TUG1、miR-542-3p表达的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清lncRNA TUG1、miR-542-3p对ACI患者预后不良的预测价值,Logistic回归分析影响ACI患者预后不良的因素。结果ACI患者血清lncRNA TUG1相对表达量高于对照组,且随着疾病严重程度增加而升高(P<0.05);miR-542-3p相对表达量低于对照组,且随着疾病严重程度增加而降低(P<0.05)。Pearson法分析显示ACI患者血清miR-542-3p与lncRNA TUG1表达呈显著负相关(r=-0.492,P<0.05)。预后不良组患者的lncRNA TUG1相对表达量明显高于预后良好组患者,miR-542-3p相对表达量明显低于预后良好组患者(P<0.05)。ROC曲线显示,血清lncRNA TUG1、miR-542-3p水平预测ACI患者预后不良的AUC分别为0.857、0.911,对应的敏感度分别为85.71%、81.43%,特异度分别为75.00%、87.50%,二者联合预测的AUC为0.954,敏感度为82.86%,特异度为96.15%。Logistic回归分析显示lncRNA TUG1、miR-542-3p、NIHSS评分均是ACI患者预后的影响因素(P<0.05)。结论ACI患者血清lncRNA TUG1表达升高,miR-542-3p表达降低,二者与患者疾病严重程度和预后密切相关,可能作为预测ACI患者预后的血清学指标。

长链非编码 RNA FGD5-AS1通过miR-542-3p/GTPBP4对肝癌细胞放射敏感性的影响

目的:探讨长链非编码RNA FGD5-AS1(lncRNA FGD5-AS1)对肝癌细胞放射敏感性的影响及其分子机制.方法:运用qRT-PCR检测FGD5-AS1、miR-542-3p和GTPBP4在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达情况;采用克隆形成实验和流式细胞仪分析FGD5-AS1和GTPBP4表达变化对肝癌细胞系放射敏感性的影响.利用基因沉默、qRT-PCR和Western blot检测FGD5-AS1对miR-542-3p及其靶基因GTPBP4表达的影响,并运用荧光素酶报告实验分析lncRNA FGD5-AS1对miR-542-3p/GTPBP4表达的调控作用.结果:FGD5-AS1和GTPBP4在肝癌组织和肝癌细胞系中表达上调,miR-542-3p在肝癌组织和肝癌细胞系中表达下调.沉默FGD5-AS1可增强肝癌细胞Huh7和PLC5的放射敏感性.沉默GTPBP4可以抑制Huh7和PLC5细胞的克隆形成,促进Huh7和PLC5细胞的凋亡,增强Huh7和PLC5细胞的放射敏感性.GTPBP4是miR-542-3p的下游靶基因,miR-542-3p可以负向调控GTPBP4的表达水平;而FGD5-AS1可负向调控miR-542-3p的表达,并正向调控GTPBP4的表达水平;FGD5-AS1对HCC细胞放射敏感性的影响又依赖于miR-542-3p.结论:FGD5-AS1作为miR-542-3p的“分子海绵”竞争性上调GTPBP4的表达进而影响肝癌细胞的放射敏感性.

miR-542-3p对肝癌细胞恶性生物学行为的影响及机制探讨

目的探讨microRNA-542-3p(miR-542-3p)在人肝癌细胞系及组织中的表达水平及其对肝癌细胞增殖、侵袭转移能力的影响。方法采用RT-PCR检测miR-542-3p在肝癌细胞系(HCCLM3、Hep3B、Huh7、SMMC-7721、MHCC-97H、MHCC-97L)以及人正常肝细胞LO2中的表达;同时采用RT-PCR检测肝癌及对应癌旁组织中miR-542-3p的表达。分别以转染miR-542-3p mimics的MHCC-97H和HCCLM3细胞作为过表达组,以转染空载体的MHCC-97H和HCCLM3细胞作为阴性对照组;采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力,采用Transwell法检测各组细胞体外侵袭能力,Western blotting检测各组细胞上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关蛋白的表达,免疫荧光法检测miR-542-3p对肝癌细胞EMT的影响。结果miR-542-3p在肝癌细胞系HCCLM3(0.221±0.034)、Hep3B(0.764±0.059)、Huh7(0.561±0.029)、SMMC-7721(0.688±0.049)、MHCC-97H(0.162±0.031)、MHCC-97L(0.473±0.041)中的表达均低于在人正常肝细胞LO2(1.0)的表达水平(P<0.05);在肝癌组织表达低于癌旁组织[(0.208±0.064)vs(0.746±0.093),P<0.05]。MHCC-97H和HCCLM3过表达组细胞增殖、侵袭转移能力显著低于阴性对照组,EMT相关蛋白荧光明显低于阴性对照组(P<0.05)。结论miR-542-3p在肝癌组织及肝癌细胞中低表达,miR-542-3p的过表达可有效抑制肝癌细胞恶性生物学行为,该过程可能与EMT相关通路有关。miR-542-3p有望成为肝癌生物治疗的潜在靶点。

miR-542-3p调控Rho基因对脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨microRNA-542-3p (miR-542-3p)靶向调控Rho基因对小鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)的保护作用。方法将小鼠随机分为正常组、假手术组和模型组,构建CIRI模型(MCAO)。用TUNEL染色检测3组小鼠海马组织中海马神经元的凋亡情况,用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)分别检测各组小鼠海马组织的miR-542-3p和Rho的mRNA和蛋白表达水平;分离提取3组小鼠海马神经元体外传代培养,选择第三代细胞分为:正常组、空白组、阴性对照组、miR-542-3p mimic组、miR-542-3p inhibitor组、siRNA-Rho组和miR-542-3p inhibitor+siRNA-Rho组,双荧光素酶报告基因实验验证miR-542-3p和Rho的靶向关系,用qRT-PCR和Western Blot法分别检测各组细胞中miR-542-3p、Rho的mRNA和蛋白表达水平,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测各组细胞转染后的增殖能力变化情况,流式细胞术检测各组细胞转染后的凋亡情况。结果与正常组相比,模型组小鼠海马组织中神经元凋亡情况明显增多,miR-542-3p mRNA表达明显降低,Rho mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。生物信息学网站和双荧光素酶报告基因证实,miR-542-3p能够靶向调控Rho基因。与空白组相比,miR-542-3p mimic组中miR-542-3p表达明显上升,miR-542-3p mimic组和siRNA-Rho组中Rho基因表达明显下调,增殖能力上升,凋亡率下降(P<0.05);miR-542-3p inhibitor组中miR-542-3p表达明显降低,Rho基因表达明显上升,增殖能力下降,凋亡率上升(P<0.05)。结论 miR-542-3p可抑制Rho基因表达从而对CIRI的发病有保护作用。

miR-542-3p生物信息学分析及对未成熟猪睾丸支持细胞的影响

为了探讨miR-542-3p的生物信息学信息及其对未成熟猪睾丸支持细胞的影响,试验通过AliBaba 2.1和AnimalTFDB 3.0软件预测miR-542-3p转录因子结合位点(TFBS);并分析miR-542-3p在不同物种间的保守性;采用CCK-8试剂、ATP试剂盒、流式周期检测试剂盒和实时荧光定量PCR方法探究过表达miR-542-3p对未成熟猪睾丸支持细胞的影响;利用TargetScan、miRDB和miWalk 3种在线软件预测miR-542-3p靶基因后取交集,并对猪源靶基因进行GO功能注释和KEGG信号通路富集分析;最后利用Cytoscape 3.2.0软件构建TF-miR-542-3p-靶基因相互作用网络。结果表明:经预测miR-542-3p受GATA1、TBP、Sp1、Ap1、SRF等多个转录因子调控,且在多物种间具有高度的保守性;miR-542-3p可显著或极显著抑制未成熟猪睾丸支持细胞增殖活性(P<0.05或P<0.01),极显著降低细胞内ATP含量(P<0.01),显著或极显著抑制细胞增殖基因和周期基因的相对表达量(P<0.05或P<0.01),进而抑制细胞周期和细胞增殖;转染miR-542-3p mimic后G1期猪睾丸支持细胞比例显著升高(P<0.05),S期细胞比例极显著降低(P<0.01);共发现7个猪源miR-542-3p潜在靶基因,miR-542-3p调控的UBE2E1基因相对表达量极显著下降(P<0.01),KCMF1、ILK基因相对表达量显著下降(P<0.05),HIPK3基因相对表达量极显著升高(P<0.01),AP3D1、PLEKHM3基因相对表达量显著升高(P<0.05),各靶基因主要在激酶活性和结合上发挥作用;miR-542-3p靶基因主要参与MAPK、cAMP、TGF-β和cGMP-PKG等信号通路;构建的TF-miR-542-3p-靶基因相互作用网络包含5个转录因子和50个mRNA。说明miR-542-3p受多种转录因子调控,在多物种间高度保守,能够抑制未成熟猪睾丸支持细胞增殖,并通过调控下游靶基因的表达参与MAPK、cAMP和TGF-β等信号通路,从而调控未成熟猪睾丸支持细胞生长。

miR-141-3p对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的抑制和改善作用

背景:研究表明,胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子有抑制纤维环细胞凋亡的作用。miR-141-3p微小RNA在骨髓基质细胞中随着年龄的增加而增加,且与炎症信号通路的活化存在一定关系,提示其可能成为腰椎间盘突出症的治疗靶点。目的:探究miR-141-3p通过调控胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的影响。方法:选取50只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组、miR-141-3p mimics组,每组10只。除正常组外,其余大鼠采用自体髓核移植法进行腰椎间盘突出症建模。建模成功后,对miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组和miR-141-3p mimics组大鼠鞘内分别注射10μL 20μmol/L miR-NC,miR-141-3p inhibitor,miR-141-3p mimics,均每天注射1次,连续注射28 d;正常组、模型组同期同位置注射同体积生理盐水。采用热缩足潜伏期阈值评价大鼠下肢疼痛,实时荧光定量PCR检测背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达,ELISA法检测背根神经节组织炎症因子,免疫印迹法检测背根神经节组织胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子蛋白表达,并分析miR-141-3p与胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子的相关性。结果与结论:miR-NC组各项指标与模型组比较,差异均无显著性意义。①大鼠热缩足潜伏期阈值:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。②背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。③背根神经节组织肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素1含量:模型组明显高于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显高于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显低于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。④背根神经节组织胰岛素样生长因子1、血小板源性生长因子蛋白表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。⑤胰岛素样生长因子1与miR-141-3p呈正相关(r=0.904,P<0.001),血小板源性生长因子与miR-141-3p呈正相关(r=0.879,P<0.001)。⑥结论:miR-141-3p可显著改善腰椎间盘突出症大鼠下肢疼痛,抑制背根神经节炎症,其机制可能与促进胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子表达有关。

miR-132-3p/CAMTA1对I-125粒子处理的面神经损伤大鼠施万细胞的调控作用

目的探讨miR-132-3p通过钙调素结合转录因子1(CAMTA1)对I-125粒子处理的面神经损伤大鼠(FNI)中施万细胞的调控作用。方法用I-125粒子辐射大鼠施万细胞,并在细胞中转染miR-132-3p mimic、miR-132-3p inhibitor以及sh-CAMTA1。免疫荧光检测S100B和β-TubulinⅢ荧光强度。RT-qPCR检测miR-132-3p的表达,Western blot检测CAMTA1蛋白表达。EdU染色评估细胞增殖,Transwell检测细胞迁移。同时,构建FNI大鼠模型并在大鼠面部植入I-125粒子,HE、LFB染色以及IF染色评估大鼠面神经组织的病理损伤。StarBase v2.0数据库和双荧光素酶报告实验验证miR-132-3p和CAMTA1的靶向关系。结果S100B和β-TubulinⅢ在大鼠施万细胞中显著表达。I-125粒子辐射组中miR-132-3p表达降低(P<0.001),抑制细胞的增殖(P<0.001)和迁移(P<0.001)。过表达miR-132-3p或敲降CAMTA1显著促进施万细胞的增殖(P<0.001)和迁移(P<0.05),敲降miR-132-3p则具有相反的作用。机制研究显示,miR-132-3p靶向负调控CAMTA1。体内实验结果显示,过表达miR-132-3p通过抑制CAMTA1的蛋白表达,减弱I-125粒子对FNI大鼠面神经损伤的促进作用。结论过表达miR-132-3p抑制CAMTA1的表达,促进施万细胞的增殖和迁移,抑制I-125对FNI大鼠面神经损伤的促进作用。

水飞蓟素通过调控miR-124-3p/WEE1轴影响胶质瘤细胞恶性生长的机制研究

目的探讨水飞蓟素(SM)对胶质瘤细胞恶性生长的影响以及对miR-124-3p/WEE1轴的调控机制。方法将胶质瘤U87细胞分为对照组,SM低、中、高浓度组,SM高浓度+miR-124-3p抑制剂组(SM高+miR-124-3p inhibitor组)。采用CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blotting检测细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及凋亡相关蛋白的表达,实时定量PCR检测细胞中miR-124-3p和WEE1 mRNA水平,荧光素酶活性实验验证miR-124-3p和WEE1之间的靶向关系,建立NOD/SCID小鼠颅内移植瘤模型并进行给药和分析。结果与对照组比较,不同浓度SM处理组的细胞增殖活性、迁移和侵袭细胞数、cyclin D1蛋白表达、WEE1 mRNA表达水平降低,G0/G1周期细胞数、cleaved caspase-8、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及miR-124-3p表达升高(P<0.05);进一步转染miR-124-3p inhibitor后发现,SM对胶质瘤细胞恶性行为的抑制作用被逆转。小鼠体内实验显示,SM处理组肿瘤的质量和体积均低于模型组(P<0.05),且小鼠体质量无显著变化(P>0.05)。结论SM可通过上调miR-124-3p靶向下调WEE1抑制胶质瘤细胞的恶性生长。

冠心病患者血清miR-3129-5p和miR-6870-3p表达与疾病严重程度的关系研究

目的探究冠心病(CHD)患者血清miR-3129-5p和miR-6870-3p表达与疾病严重程度的关系。方法以2021年3月至2023年7月在青岛大学附属心血管病医院进行治疗的80例CHD患者为研究对象(CHD组),根据Gensini评分将CHD患者分为轻度组(n=27)、中度组(n=33)和重度组(n=20),另选取同期在本院进行体检的健康者80例为对照组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定血清miR-3129-5p、miR-6870-3p水平;血清miR-3129-5p、miR-6870-3p水平与Gensini评分之间的关系采用Spearman相关性分析;发生CHD的影响因素采用Logistic多因素模型分析;血清miR-3129-5p、miR-6870-3p水平对CHD的诊断价值采用受试者工作特征(ROC)曲线分析。结果CHD组患者血清miR-3129-5p、miR-6870-3p水平均高于对照组(P<0.05),且随着病情程度的增加,CHD患者血清miR-3129-5p、miR-6870-3p水平逐渐升高(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,血清miR-3129-5p、miR-6870-3p水平与Gensini评分均呈正相关(r_(1)=0.411,r_(2)=0.431,P<0.001)。Logistic回归分析结果显示,总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、甘油三酯(TG)、miR-3129-5p、miR-6870-3p升高均为发生CHD的危险因素(P<0.05),高密度脂蛋白(HDL-C)升高为发生CHD的保护因素(P<0.05)。ROC曲线结果显示,血清miR-3129-5p、miR-6870-3p诊断CHD的曲线下面积(AUC)分别为0.855、0.852,敏感度分别为78.8%、83.8%,特异度分别为65.1%、56.3%,二者联合预测CHD的AUC为0.927,敏感度为77.5%、特异度为73.8%。结论CHD患者血清miR-3129-5p、miR-6870-3p水平均升高,且血清miR-3129-5p、miR-6870-3p与CHD患者疾病严重程度密切相关。miR-3129-5p、miR-6870-3p联合检测可作为诊断CHD的重要辅助参考指标。