mir204对复发性卵巢癌患者耐药的影响及群体治疗策略探索

目的探究mir204对复发性卵巢癌患者的治疗效果。方法选取医疗机构的240例复发性卵巢癌患者为研究对象,以卵巢癌复发并耐药的患者为耐药组,以复发非耐药、未患癌的患者为非耐药组,各120例。采用病例对照研究方法,收集首次复发入院卵巢癌患者的基线信息,并分析两组患者的基因表达差异、治疗方案和治疗效果。结果两组职业、吸烟、饮酒、是否绝闭经、使用激素替代治疗与是否一级亲属患癌等方面比较,差异有统计学意义(P<0.05)。耐药组有102例mir 204表达升高,非耐药组有7例mir204表达升高,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。通过聚类分析和RT-PCR发现mir204和PIK3CA、PIK3R1、PTEN、AKT的表达有关联。非耐药组治疗效果优于耐药组,mir204的表达高低进行分组分析,发现mir204高表达的治疗效果相较mir204低表达更差(P<0.05)。结论mir204在复发性卵巢癌患者的治疗方案和治疗效果上有差异,可能与mir204通过PI3K-AKT信号通路的调控作用有关。

MiR-204对角膜上皮细胞增生的抑制作用

背景作为人角膜上皮组织的主要细胞成分，角膜上皮细胞通过迁移、增生以及分化等生物学行为在角膜上皮组织的损伤修复中发挥重要作用。微小RNA（miRNA）是内源性表达的单链非编码RNA，参与多种生物活动的调控过程，研究报道miR-204在正常角膜上皮组织内呈高表达，但其生物学功能仍不清楚。目的研究miR-204对角膜上皮细胞增生的调控及其分子机制。方法收集角膜屈光手术过程中患者脱落的角膜上皮组织，同时体外培养人角膜上皮细胞株（HCECs）。采用实时荧光定量PCR技术分别检测角膜上皮组织和HCECs中miR-204的表达情况。将培养的HCECs分为3个组，分别用含miR-204mimic的脂质体或空脂质体转染到HCECs内作为miR-204mimic转染组和阳性对照组，正常培养的细胞作为正常对照组。用平板克隆形成试验检测各组培养细胞的克隆数以评价细胞的增生能力；采用流式细胞仪检测不同细胞周期的细胞百分比；采用Westernblot技术检测各组细胞中磷酸化细胞内细胞周期相关蛋白p-RB、转录因子E2F1、p27、细胞周期蛋白CyclinA、细胞周期蛋白依赖性激酶CDC2、磷酸化CDC2（p-CDC2）、细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK2）的表达情况。结果miR-204mRNA在正常人角膜上皮组织中的相对表达量为1．077±0．268，明显高于HCECs中的0．041±0．018，差异有统计学意义（t=7．700，P〈0．001）。平板克隆形成试验显示miR-204mimic转染组细胞克隆数明显少于阳性对照组和空白对照组。流式细胞仪检测结果显示，miR-204mimic转染组G1期细胞百分比为47．75％，明显高于阳性对照组的37．23％和空白对照组的40．72％。Westernblot检测表明，miR-204mimic转染组细胞中CDK2和p-CDC2蛋白的相对表达量明显低于阳性对照组，E2F1和P27蛋白的相对表达量明显高于阳性对照组，差异均有统计学意义（t=5．39、10．65、14．87、25．11，均P〈0．01）。结论正常的角膜上皮组织中miR-204的高表达可能参与角膜上皮细胞的非增生状态的维持。miR-204可上调E2F1和p27蛋白在HCECs中的表达，抑制复合物CDK2／Cyclin A和P-CDC2／CyelinA的形成，使角膜上皮细胞停滞在G1期，从而抑制角膜上皮细胞的增生。

miR⁃204通过调控ZEB1抑制胃癌血管生成的机制研究

目的探讨miR⁃204通过调控E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)抑制胃癌血管生成的机制,为胃癌的治疗提供参考依据。方法采用TCGA数据库和免疫组化染色分析临床胃癌患者癌组织和癌旁组织样本中miR⁃204和ZEB1的表达水平;UALCAN数据库分析不同临床病理分期和淋巴转移胃癌患者中miR⁃204和ZEB1的表达水平,以及二者与患者总生存期(OS)的相关性。血管生成实验检测人脐静脉内皮细胞(HUVEC)经miR⁃204过表达和敲减HGC⁃27细胞的条件培养基培养后血管生成能力的变化;Western blot检测miR⁃204对HGC⁃27细胞中ZEB1、VEGFR1和VEGFR2蛋白表达的影响。结果TCGA数据库和免疫组化染色结果显示,与癌旁组织相比,胃癌组织中miR⁃204表达明显降低,而ZEB1表达明显上调,差异均有统计学意义(t=16.398、14.284,P均<0.001);经Pearson相关性分析结果显示,二者表达成负相关(r=-0.827,P<0.001)。UALCAN数据库分析结果显示,miR⁃204在不同临床病理分期和淋巴转移胃癌患者中的表达较正常组织均显著降低(F=17.184、18.633,P均<0.001),且与胃癌患者的OS成正相关(r=0.547,P<0.05);而ZEB1在不同临床病理分期和淋巴转移胃癌患者中的表达较正常组织均明显升高(F=17.817、18.538,P均<0.001),且与胃癌患者的OS成负相关(r=-0.728,P<0.001)。此外,qRT⁃PCR和体外共培养实验结果显示,HUVEC细胞采用miR⁃204过表达条件培养基培养后的血管生成能力明显降低(P<0.001),而采用miR⁃204敲减条件培养基培养后的血管生成能力显著上调(P<0.01)。Western blot检测结果显示,miR⁃204高表达可显著抑制HGC⁃27细胞中ZEB1的表达,并诱导VEGF/VEGFR信号通路失活(P<0.01)。结论miR⁃204表达上调可通过诱导ZEB1/VEGF/VEGFR信号通路失活抑制胃癌血管生成。

微小RNA-204对前列腺癌细胞株CL1的生长调节及其机理研究

目的:探讨微小RNA(mi R)-204对前列腺癌细胞株CL1的生长调节及其机理。方法:获得mi R-204高表达的CL1稳转细胞株(CL1-mi R-204)及其阴性对照的CL1稳转细胞株(CL1-对照)后,观察其细胞生长速度,检测丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)磷酸化水平及AKT总蛋白和p27蛋白的表达,并检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)通道抑制剂LY294002对2种细胞生长的影响。结果:mi R-204能促进CL1的生长;升高AKT在苏氨酸(T308)和丝氨酸(S473)2个位点的磷酸化水平;抑制AKT下游的靶基因p27蛋白表达水平。加入LY294002后,CL1-对照和CL1-mi R-204的生长速度都降低。但CL1-mi R-204的生长速度下降得更明显。结论:mi R-204可能是通过AKT信号通路来促进CL1的生长。