miR-152靶向Mirk/Dyrk1B调控人卵巢癌干细胞紫杉醇敏感性的研究

目的探讨miR-152对人卵巢癌干细胞球紫杉醇敏感性的影响及可能的机制。方法分离培养人卵巢癌干细胞球,构建miR-152的差异表达体系,用CCK-8法检测紫杉醇作用下卵巢癌干细胞存活率;用荧光素酶报告基因系统鉴定miR-152与Mirk/Dyrk1B的靶向调控关系;蛋白印迹检测改变miR-152表达水平对Mirk/Dyrk1B及耐药相关蛋白的影响。结果过表达miR-152或降低Mirk/Dyrk1B表达水平可增强人卵巢癌干细胞球对紫杉醇的敏感性。miR-152能够特异性结合Mirk/Dyrk1B 3’-UTR区域。miR-152与Mirk/Dyrk1B差异表达影响人卵巢癌干细胞球耐药相关蛋白的表达水平。结论 miR-152可能通过靶向调节Mirk/Dyrk1B影响人卵巢癌干细胞球对紫杉醇的敏感性。

Dyrk1B在上皮性卵巢癌组织和细胞中的表达及意义

目的:检测Dyrk1B在上皮性卵巢癌组织和细胞中的表达,探讨其在卵巢癌发生和发展中的作用及意义。方法:Western blot法检测卵巢癌细胞系(OVCAR8,OVCAR5,OVCAR4,OVCAR3,SKOV3,OV2008,C13,A2780S和A2780CP)中Dyrk1B蛋白表达,以及Dyrk1B抑制剂AZ191对卵巢癌细胞Dyrk1B蛋白表达的影响。MTT比色法和流式细胞术检测AZ191对卵巢癌细胞增殖能力和细胞凋亡的影响。选取我院近7年收治的上皮性卵巢癌患者119例,免疫组化SP法检测Dyrk1B蛋白在卵巢癌组织中的表达。结果:Dyrk1B蛋白在多种卵巢癌细胞系中普遍表达,AZ191可明显降低其在卵巢癌细胞中的表达;AZ191对各种卵巢癌细胞系的增殖能力均产生浓度依赖性的抑制作用(P<0.05),并可诱发细胞凋亡,其凋亡率均随抑制剂浓度的增加而增高;Dyrk1B在卵巢癌组织中亦呈高表达,表达率为90.8%。结论:Dyrk1B在上皮性卵巢癌组织和细胞中均有表达,Dyrk1B抑制剂AZ191下调卵巢癌细胞Dyrk1B蛋白表达的同时,明显抑制细胞的增殖和诱发细胞凋亡。提示Dyrk1B可能在卵巢癌的发生和发展中起关键作用,有望成为临床分子靶向治疗卵巢癌的新靶点。

Dyrk1B在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨Dyrk1B在宫颈癌组织中的表达及其临床意义。方法利用免疫组化检测Dyrk1B在60例宫颈癌组织、60例宫颈癌癌旁组织和60例正常宫颈组织中的表达，分析Dyrk1B在宫颈癌组织中的表达状况以及与宫颈癌临床参数的关系。结果Dyrk1B在宫颈癌组织中的表达（60／60，100％）明显高于癌旁组织（26／40，65％）和正常宫颈组织（16／40，40％），三组间比较差异有统计学意义（χ2=88．21，P〈0．01）。Dyrk1B的强阳性率与宫颈癌的组织学分化程度有明显相关性（P〈0．05），与宫颈癌患者的年龄、临床分期和有无淋巴转移等无明显相关性（P〉0．05）。结论Dyrk1B在宫颈癌中高表达，提示其可能参与了肿瘤的发生和发展，并有望成为宫颈癌早期诊断的标志物和治疗的靶基因。

结肠腺癌中Dyrk1B的表达及对临床预后判断的价值

目的 观察结肠腺癌术后组织中Dyrk1B蛋白和mRNA的表达并分析其临床意义,探讨其与预后的关系.方法 选择87例结肠腺癌患者作为观察对象,均留取肿瘤组织的新鲜组织和石蜡包埋组织作为观察组,留取距肿物边缘≥3cm的正常结肠黏膜的新鲜组织和石蜡包埋组织作为对照组,分别应用免疫组化和Western Blot方法检测两组中Dyrk1B蛋白的表达,应用荧光实时定量PCR法检测Dyrk1B和mRNA的表达,分析其在不同临床病理特征中的表达差别,分析Dyrk1B蛋白表达与生存时间的关系.结果 免疫组化结果显示观察组中Dyrk1B蛋白表达的阳性率明显高于对照组,观察组中Dyrk1B的表达与肿瘤最大径、淋巴结转移、增殖指数、脉管累犯、神经累犯和TNM分期密切相关,Dyrk1B的表达与性别、年龄、部位、分化程度和炎细胞浸润程度无明显相关性.Dyrk1B的表达与生存时间相关.Western Blot结果显示,观察组中Dyrk1B的表达明显高于对照组.荧光实时定量PCR结果显示Dyrk1B mRNA的表达明显高于对照组.结论 Dyrk1B蛋白和mRNA在结肠腺癌组织中表达升高,是肿瘤形成和进展中重要的促进因素,检测术后组织中Dyrk1B的表达对判断预后有一定价值.

Mirk/Dyrk1b在上皮性卵巢癌组织中的表达及意义

目的:探讨Mirk/Dryk1b(Minibrain-related kinase/Dual specificity tyrosine-phosphorylation-regulated kinase1B)在卵巢组织中的表达及其临床意义。方法:利用免疫组化检测Mirk/Dyrk1b在30例上皮性卵巢癌、20例上皮性卵巢囊腺瘤、10例正常卵巢组织中的表达。结果:Dyrk1b在上皮性卵巢癌中的表达明显高于上皮性卵巢囊腺瘤及正常卵巢组织(P<0.05),而其在正常的卵巢组织中几乎不表达;Dyrk1b的阳性率与卵巢癌的组织学分化程度有明显的相关性(P<0.01),与卵巢癌的临床分期、有无淋巴转移等无明显相关性(P>0.05)。结论:Dyrk1b在上皮性卵巢癌中高表达,提示其可能参与了肿瘤的发生和发展,并有望成为临床早期诊断的肿瘤标志物和新的卵巢癌治疗的靶基因。

沉默Dyrk1B基因对宫颈癌细胞生物学功能的影响

目的通过沉默在宫颈癌C4-1和Hela细胞Dyrk1B基因,观察Dyrk1B基因对宫颈癌细胞生物学功能的影响。方法应用慢病毒转染宫颈癌C4-1和Hela细胞沉默Dyrk1B基因作为沉默组,同时以空载病毒转染组为对照组。通过荧光显微镜观察2组转染效率,采用RT-PCR法检测Dyrk1B mRNA表达水平,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖能力以及对DDP的敏感性。结果慢病毒转染宫颈癌C4-1和Hela细胞转染效率无差异,沉默组Dyrk1B mRNA表达均低于空载对照组,宫颈癌C4-1和Hela细胞沉默组细胞的凋亡率较空载对照组增加,而宫颈癌C4-1细胞沉默组增殖较空载对照组降低,宫颈癌C4-1和Hela细胞沉默组较空载对照组比较IC50值均降低。结论慢病毒转染宫颈癌C4-1和Hela细胞沉默Dyrk1B基因表达可增加凋亡率,而细胞增殖能力下降,并且提高宫颈癌C4-1和Hela细胞对顺铂的敏感性。

DYRK1B基因对食管鳞癌细胞放射敏感性影响的研究

[目的]探讨DYRK1B对食管鳞癌放射敏感性的影响及潜在机制,为提高食管鳞癌患者放射敏感性提供理论依据。[方法]用脂质体Lipofectamine 3000分别包裹siNC、siDYRK1B转染食管鳞癌细胞ECA109,48小时后收集细胞RT-PCR和蛋白印迹实验检测ECA109细胞中DYRK1B表达水平。同时取转染siNC、siDYRK1B的ECA109细胞给予放射处理,用克隆形成实验检测经不同剂量放射处理后的细胞存活情况并计算放射增敏比;用流式细胞术检测4Gy照射后细胞凋亡率;用蛋白印迹实验检测凋亡相关蛋白cleaved PARP-1、cleaved caspase-3及DNA损伤相关蛋白γ-H2AX表达水平。[结果]转染siDYRK1B的ECA109细胞中DYRK1B mRNA和蛋白水平明显下降(P<0.05)。与对照组相比,转染siDYRK1B的ECA109细胞放射处理后细胞存活减少,细胞凋亡率增加(P<0.05),细胞中cleaved PARP-1、cleaved caspase-3、γ-H2AX蛋白表达水平升高(P<0.05)。siDYRK1B转染的ECA109细胞放射增敏比为1.711。[结论]下调DYRK1B明显增强食管鳞癌细胞的放射敏感性,其机制可能与促进细胞凋亡、抑制DNA损伤修复有关。

双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶在宫颈病变组织和癌细胞中的表达

目的探讨双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶1b(DYRK1b)在宫颈病变组织和癌细胞中的表达情况及其作用.方法选取宫颈癌患者127例为研究组,同期确诊为慢性宫颈炎患者32例为对照组,收集上述患者石蜡组织标本,免疫组化SP法检测DYRK1b蛋白表达情况.依据宫颈癌细胞系He La 229和Si Ha细胞将标本分为实验组(加DYRK1b抑制剂Az191)、对照组(不加Az191),Western blod法检测细胞中DYRK1蛋白表达情况,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果子宫颈鳞癌阳性表达率明显高于慢性宫颈炎、低级别鳞状上皮内病变、高级别鳞状上皮内病变,差异均具有统计学意义(P<0.01);高级别鳞状上皮内病变明显高于慢性宫颈炎、低级别鳞状上皮内病变,差异具有统计学意义(P<0.05).在He La 229和Si Ha细胞中,DYRK1b蛋白表达量随Az191剂量增加而减少,且均明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01).研究组He La 229和Si Ha细胞抑制率随Az191浓度增加而提升,均明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).10μmol/L的Az191作用后,研究组He La 229和Si Ha细胞凋亡率明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论宫颈病变过程中DYRK1b蛋白表达水平逐渐提升,宫颈癌组织和细胞中均呈高表达;下调DYRK1b蛋白表达后可抑制宫颈癌细胞增殖,促进凋亡.