Mito-TEMPO通过减轻线粒体损伤抑制铅诱导的BV2小胶质细胞活化

目的:研究线粒体氧化应激在铅暴露诱导的小胶质细胞活化中的作用,观察靶向线粒体的抗氧化剂Mito-TEMPO的保护作用。方法:培养小鼠小胶质细胞系(BV2),建立铅暴露模型。采用噻唑蓝(MTT)比色法测定铅暴露对细胞活力的影响,采用免疫荧光染色法检测M1型活化标志物CD86蛋白的表达;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的含量;采用线粒体超氧化物(MitoSOX)染色检测线粒体氧化应激水平;采用线粒体膜电位荧光探针(JC-1)染色检测线粒体膜电位;采用细胞能量代谢分析(O2k)检测线粒体呼吸能力。采用Mito-TEMPO抗氧化剂进行干预,研究Mito-TEMPO对BV2线粒体氧化应激、细胞活化的抑制作用。结果:与对照组相比,铅暴露组BV2细胞CD86蛋白表达水平显著升高,促炎因子IL-1β、TNF-α、IL-6水平显著升高,线粒体氧化应激水平显著升高,线粒体膜电位、呼吸能力显著降低。Mito-TEMPO处理显著减轻了BV2细胞线粒体氧化应激与功能损伤,并显著抑制了BV2细胞M1型活化水平。结论:Mito-TEMPO能够逆转铅暴露诱导的BV2细胞M1型活化,其机制可能与Mito-TEMPO减轻线粒体氧化应激与功能损伤有关。

Mito-TEMPO对猪精子冷冻保存效果的研究

【目的】筛选最佳的Mito-TEMPO浓度并探究其对猪精子冻后质量、抗氧化能力及线粒体功能的影响,为改善猪精子冷冻保存方法提供参考依据。【方法】在冷冻Ⅰ液中添加0.5、5.0、50.0和500.0μmol/L Mito-TEMPO,通过评估冷冻解冻后各组精子的动力学参数和活率,筛选出适用于猪精液冷冻保存的Mito-TEMPO浓度。检测冷冻解冻后猪精子的质膜完整率、顶体完整率、DNA碎片指数(DFI)、活性氧(ROS)水平、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)和总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性,以及ATP和线粒体呼吸链复合物Ⅰ~Ⅴ含量。【结果】与新鲜组(F组)相比,冷冻解冻后精子的动力学参数和活率显著降低(P<0.05,下同),而添加Mito-TEMPO对冻后精子动力学参数和活率均有不同程度的改善,以50.0μmol/L Mito-TEMPO最有效。与F组相比,冻后猪精子的质膜和顶体完整率、T-AOC及ATP和线粒体呼吸链复合物Ⅰ~Ⅴ含量显著降低,CAT和T-SOD活性也显著降低,DFI、ROS水平、MDA含量显著升高。与冷冻对照组(C组)相比,50.0μmol/L Mito-TEMPO组(M组)中精子的质膜完整率、顶体完整率、T-AOC及ATP和线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅴ含量显著升高,DFI、ROS水平、MDA含量显著降低,CAT和T-SOD活性显著提高。【结论】Mito-TEMPO对猪精子具有冷冻保护作用,且Mito-TEMPO的最佳浓度是50.0μmol/L,可通过提高冷冻解冻后猪精子的抗氧化能力和线粒体功能来改善精子质量。

Mito-tempo对绵羊精液低温保存效果的影响

实验旨在探究不同浓度的Mito-tempo对绵羊精液低温保存效果的影响。采集8只湖羊种公羊精液,分别用含0、15、30、45、60μmol/L Mito-tempo稀释液进行8倍稀释,5℃冷藏120 h。分别在24 h和120 h检测精液品质指标(活力、活率、平均路径速度、曲线运动速度、直线运动速度、质膜完整性、顶体完整性、DNA完整性和线粒体活性)及抗氧化指标(总抗氧化能力、超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量)。结果表明:在低温保存期间,30μmol/L Mito-tempo处理组精子活力、活率、平均路径速度、DNA完整性、顶体完整性、线粒体活性、超氧化物歧化酶含量和总抗氧化能力均高于对照组及60μmol/L Mito-tempo处理组(P<0.05);在低温保存过程中,30μmol/L Mito-tempo处理组丙二醛含量低于对照组和其余各试验组(P<0.05)。由此可见,在稀释液中添加30μmol/L Mito-tempo可有效提高低温保存后绵羊精液质量。

Mito-Tempo在LPS诱导的肺动脉内皮细胞损伤中的作用

目的:探讨Mito-Tempo在脂多糖(LPS)诱导肺动脉内皮细胞(PAECs)炎性损伤过程中的作用。方法:体外分离和培养牛PAECs,采用MTT和caspase-3活性检测实验测定不同浓度LPS诱导PAECs损伤情况。细胞经Tempol和Mito-Tempo处理后,分别采用Mito-roGFP、四甲基罗丹明甲酯(TMRM)和MitoSox检测细胞线粒体氧化应激、线粒体膜电位及活性氧簇(ROS)水平;使用细胞免疫荧光和Western blot方法测定发动蛋白相关蛋白1(Drp1)及磷酸化Drp1的水平;运用划痕、Transwell及小管形成实验考察细胞迁移和小管形成能力。结果:LPS刺激PAECs导致细胞凋亡及功能损伤,线粒体形态及功能失衡;Mito-Tempo显著抑制了LPS诱导的细胞线粒体氧化应激、线粒体去极化和ROS产量,降低了Drp1磷酸化水平,恢复了细胞迁移和小管形成能力。结论:Mito-Tempo能够逆转LPS造成的PAECs损伤,其具体机制可能与Mito-Tempo减轻线粒体形态及功能异常、减少Drp1磷酸化及抑制细胞氧化应激有关。

Mito-Tempo修复过氧化氢诱导的猪卵母细胞线粒体损伤机制研究

本研究探讨线粒体靶向抗氧化剂Mito-Tempo对过氧化氢诱导猪卵母细胞线粒体损伤修复的影响。在猪卵母细胞体外成熟过程中添加10 mmol·L^(-1)过氧化氢或过氧化氢+0.1μmol·L^(-1)Mito-Tempo,检测卵丘细胞扩散、卵母细胞成熟及线粒体功能相关因子,观察孤雌胚胎发育情况。结果表明,与过氧化氢组相比,添加Mito-Tempo可显著提高卵丘细胞扩散指数,显著降低Mito SOX水平,提高膜电位及线粒体功能基因表达水平,显著改善猪卵母细胞体外成熟率及孤雌胚胎发育能力(P<0.05)。证明Mito-Tempo对过氧化氢诱导的猪卵母细胞线粒体损伤具有修复功能。

线粒体靶向抗氧化剂Mito-TEMPO对氮芥诱导BEAS-2B细胞损伤的影响

目的:探讨线粒体靶向抗氧化剂Mito-TEMPO对氮芥(HN2)诱导人支气管上皮细胞系BEAS-2B的影响。方法:BEAS-2B细胞分为正常对照组、Mito-TEMPO对照组、HN2染毒组和Mito-TEMPO干预组,其中正常对照组和Mito-TEMPO对照组分别给予含DMSO(体积分数为0.1%)和Mito-TEMPO(100μmol/L)的无血清培养基处理26 h,HN2染毒组给予含DMSO的无血清培养基预处理2 h,然后给予HN2(8μmol/L)染毒24 h,Mito-TEMPO干预组给予Mito-TEMPO(100μmol/L)预处理2 h,然后HN2(8μmol/L)和Mito-TEMPO(100μmol/L)共处理24 h。分别采用CCK-8法检测细胞活性,速率法检测细胞培养基上清乳酸脱氢酶(LDH)活性,倒置显微镜观察细胞形态,Annexin V/PI探针法流式细胞术检测细胞凋亡,JC-1探针法检测线粒体膜电位,紫外分光光度法检测细胞匀浆ATP含量,MitoSOX、DCFH-DA、DHE探针法分别检测细胞内线粒体ROS、H2O2及总ROS水平,实时荧光定量PCR检测炎症因子TNF-α、IL-6的mRNA表达水平。结果:与HN2染毒组相比,Mito-TEMPO干预组细胞活性降低了约42.6%(P<0.05),细胞上清LDH水平显著增加(P<0.05),同时伴有异常形态细胞增多,Mito-TEMPO干预组细胞线粒体ROS水平降低了53.6%(P<0.05),细胞内H2O2水平及总ROS水平分别升高了171%和43.4%(均为P<0.05)。Mito-TEMPO干预对HN2染毒导致的细胞凋亡比例、线粒体膜电位、ATP含量、TNF-α、IL-6的mRNA表达水平等指标改变均无显著影响(P>0.05)。结论:100μmol/L的Mito-TEMPO干预在HN2染毒BEAS-2B细胞模型中促进了细胞损伤,其机制可能与提高细胞内H2O2水平及总ROS水平有关。