葛根及其复方配伍对自身免疫性重症肌无力大鼠骨骼肌Mitofilin、OPA1蛋白表达的影响

目的探究葛根及其复方配伍对自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠骨骼肌Mitofilin、OPA1蛋白表达的影响。方法将80只大鼠按照随机数字表法分为空白组、模型组、葛根组、葛芪组、葛参组、葛妙组、葛根复方组、强的松组,每组10只,除空白组外,其余7组大鼠均皮下多点注射免疫乳剂(含鼠源性R97~R116肽段)复制EAMG模型,灌胃给药4周,检测给药前后大鼠腓肠肌肌电平均振幅和血清IFN-γ、IL-4水平。给药结束后观察大鼠进食量、饮水量、毛色以及体质量变化,透射电镜观察骨骼肌线粒体超微结构,ELISA法检测血清AchR-ab水平,Western blot法检测骨骼肌线粒体塑形蛋白Mitofilin、OPA1表达。结果与空白组比较,模型组大鼠体质量、腓肠肌肌电平均振幅降低(P<0.01),血清IFN-γ、IL-4和AchR-ab水平升高(P<0.01),骨骼肌Mitofilin、OPA1蛋白表达下调(P<0.01),线粒体肿胀明显,出现线粒体空泡变性,内嵴排列紊乱、断裂,部分可见内嵴溶解消失;与模型组比较,各给药大鼠体质量、腓肠肌肌电平均振幅升高(P<0.01),血清IFN-γ、IL-4和AchR-ab水平降低(P<0.01),骨骼肌Mitofilin、OPA1蛋白表达上调(P<0.01),线粒体肿胀程度减弱,线粒体数目增多,内嵴排列较为整齐,未见明显空泡化。结论葛根及其复方配伍治疗自身免疫性重症肌无力的机制可能是通过调节线粒体塑形蛋白,改善线粒体内嵴结构形态,恢复线粒体功能,达到降低AchR-ab水平和改善骨骼肌肌力的目的。

蓝莓促进人肝细胞mitofilin/Mic60表达抑制超氧化物生成减轻代谢功能障碍相关肝病的肝损伤

目的研究蓝莓调控代谢功能障碍相关肝病(MAFLD)体外模型中线粒体内膜蛋白mitofilin/Mic60的作用及其机制.方法游离脂肪酸(FFA)诱导L02人肝细胞建立MAFLD细胞模型,设立正常组、模型组、80μg/mL蓝莓原浆处理组、Mic60短发夹RNA(Mic60 shRNA)转染组、Mic60敲低联合80μg/mL蓝莓原浆处理组.油红O染色观察细胞内的脂质沉积情况;噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度蓝莓原浆对FFA处理的L02细胞存活率的影响;可见分光光度法检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和脂代谢指标甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量.荧光显微镜观察肝细胞内活性氧(ROS)的情况;采用实时定量PCR及Western blot法分别检测Mic60的mRNA及蛋白表达.结果FFA诱导刺激L02细胞24 h后,L02细胞胞质内有大量红色脂滴沉积;80μg/mL蓝莓原浆处理的细胞存活率较高;蓝莓原浆处理组的ALT、AST、TG、TC、MDA检测结果和ROS的荧光强度显示均低于模型组,而SOD、GSH水平及Mic60 mRNA和蛋白水平均高于模型组.结论蓝莓促进Mic60表达,增加肝细胞SOD及GSH水平,减少ROS的生成,进而减轻MAFLD肝细胞损伤,调节脂质代谢紊乱.

小续命汤对急性脑缺血再灌注线粒体相关蛋白Hsp60、Mitofilin表达的影响

目的:观察小续命汤对大鼠急性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及对线粒体相关蛋白表达的影响。方法:60只雄性SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、小续命汤组、环孢素A组、溶媒组5组,每组12只。采用大脑中动脉线栓法建立脑缺血再灌注损伤模型,观察各组大鼠的一般情况、神经功能缺损,采用Nissl染色观察神经细胞损伤,Western blot和免疫组织化学法检测脑缺血再灌注后缺血半暗带皮层线粒体热休克蛋白60 (Heat shock protein 60,Hsp60)和mitofilin蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组出现明显神经功能缺损,细胞发生缺血再灌注损伤,缺血半暗带皮层Hsp60、mitofilin蛋白的表达上调(P <0.05)。与模型组比较,小续命汤组、环孢素A组可显著改善大鼠神经功能缺损评分,减轻神经细胞的缺血再灌注损伤,并显著上调脑缺血半暗带皮层Hsp60、mitofilin蛋白的表达,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论:小续命汤可改善大鼠神经功能缺损评分,减轻神经细胞的缺血再灌注损伤,上调脑缺血半暗带皮层Hsp60、Mitofilin蛋白的表达,从而发挥脑保护的作用。

线粒体嵴重塑蛋白Mic60/Mitofilin在程序性坏死相关缺血再灌注损伤中的潜在作用

缺血再灌注损伤(IRI)是临床治疗缺血性疾病亟须攻克的难题。近年来,程序性坏死被认为是IRI导致细胞死亡的重要形式,其通过膜受体和细胞内信号转导分子的调控在IRI中发挥重要作用。而线粒体嵴重塑与IRI联系密切,其调控与线粒体融合分裂、氧化应激等有关。Mic60/Mitofilin作为一种线粒体内膜蛋白,可通过嵴重塑调控线粒体结构和功能,进而影响细胞命运转归,其可能通过影响细胞死亡在程序性坏死相关IRI中发挥作用。未来,阐明程序性坏死相关IRI中维持线粒体蛋白稳态的作用及机制可为缺血性疾病的治疗提供新思路。

Mitofilin对线粒体功能和疾病发生的影响

Mitofi lin是一种线粒体内膜蛋白,与多种线粒体蛋白相互作用,共同参与线粒体内膜嵴形态的维持、线粒体内蛋白质的转运过程等。干扰mitofi lin的表达不仅引起线粒体结构的异常,而且明显抑制了线粒体功能的正常发挥。最近的研究表明,在多种疾病中mitofi lin都异常表达,从而导致线粒体结构的完整性和功能的障碍,促进了疾病的发生发展。

线粒体内膜蛋白质mitofilin干涉慢病毒的构建及应用

目的构建线粒体内膜蛋白质mitofilin的慢病毒干涉载体,初步研究mitofilin在体内体外的生物学功能。方法将靶向人mitofilin基因的短发夹RNA(shRNA)序列克隆到慢病毒核心质粒pSicoR中,瞬时转染HEK293T细胞筛选出有效的干涉片段,并进行慢病毒的包装。病毒感染人宫颈癌细胞系HeLa细胞,Western印迹检测mitofilin蛋白的干涉效果。15 Gyγ射线照射刺激病毒感染的HeLa细胞,流式细胞术检测细胞凋亡。利用尾静脉大容量快速注射法将慢病毒注射入C57BL/6J小鼠体内,6.5 Gyγ射线照射刺激,蓝色温和电泳联合胶内酶活性染色分析,检测呼吸链复合体Ⅴ活性变化。结果与结论成功构建具有mitofilin干涉效果的慢病毒干涉载体并获得了稳定干涉mitofilin的HeLa细胞株。构建的慢病毒能有效下调HeLa细胞和小鼠肝脏细胞mitofilin蛋白的表达。干涉mitofilin表达可增加γ射线诱导的细胞凋亡,降低γ射线刺激下小鼠肝细胞线粒体呼吸链复合体Ⅴ的活性。所构建的干涉慢病毒能够广泛应用于mitofilin在体内和体外的功能研究。

The cellular interactome for glycoprotein 5 of the Chinese highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus

supported by the Earmarked Fund for Modern Agro-industry Technology Research System of China （CARS-36） from the Ministry of Agriculture of China;the National Natural Science Foundation of China （31572549）;the National Key Technology R＆D Program of China （2015BAD12B01-2） from the Ministry of Science and Technology of China