miz1基因siRNA表达载体的构建及影响HeLa细胞对阿霉素的敏感性

目的:构建针对转录因子miz1基因的siRNA表达载体,观察其影响HeLa细胞对阿霉素的敏感性.方法:设计并合成针对miz1基因的siRNA寡核苷酸,克隆入siRNA表达载体,脂质体瞬时转染入HeLa细胞中,用RT-PCR检测miz1基因的mRNA表达水平,用Western Blot检测Miz1蛋白表达水平,用MTT法检测HeLa细胞活力.结果:DNA测序和酶切鉴定证明针对miz1基因的siRNA表达载体构建成功,RT-PCR和Western Blot表明其能降低miz1基因的mRNA表达和蛋白表达.与对照组相比,转染上述干扰载体后的HeLa细胞,在加入阿霉素12h后,细胞活力明显降低(P<0.05),并且干扰质粒与阿霉素存在交互作用(P<0.05),以加入阿霉素12h和24h后最明显.结论:针对miz1基因的siRNA能够抑制人宫颈癌细胞系HeLa中miz1基因的表达并能增强HeLa细胞对阿霉素的敏感性.

锌指蛋白Miz1磷酸化对其泛素化作用的影响研究

蛋白的磷酸化与其泛素化作用有着广泛而密切的联系。有研究报道,在DNA损伤的情况下,蛋白激酶Akt能磷酸化转录因子Miz1,参与细胞周期停滞的调节;同时,Miz1因子还可在TNFα诱导下被E3泛素连接酶Mule泛素化而降解,从而解除其对JNK信号通路的阻遏,致使JNK信号通路激活。对鼠源野生型Miz1因子(WT Miz1)的AKT磷酸化保守位点进行定点突变,得到磷酸化的突变因子S419AMiz1,并进行了免疫印记和细胞体内泛素化分析。结果显示:Miz1的磷酸化非但不是其泛素化所必需的因素,反而会对其泛素化起到一定的抑制作用。

海人藻酸致痫大鼠海马神经元凋亡中caspase-3作用的实验研究

目的阐明癫痫模型大鼠海马神经元凋亡中caspase-3的作用机制。方法以TUNEL法检测KA致痫大鼠海马神经元凋亡情况,以WesternBlot方法检测其海马神经元中eIF2α的表达变化。取模型鼠海马组织制备cDNA文库,以caspase-3的大小亚单位构建酵母三杂交诱饵载体,并进行酵母三杂交筛库实验。结果在癫痫发作后12h海马出现凋亡神经元,72h达高峰;发作后24h海马神经元出现eIF2α被caspase-3酶切的片段,逐渐增加至72h。成功制备癫痫模型大鼠海马组织cDNA文库,构建了caspase3酵母三杂交诱饵载体,验证了caspase3与eIF2α之间的相互作用,并经筛库获得caspase3的新底物PIAS1。结论在癫痫模型大鼠海马凋亡神经元中eIF2α被caspase3酶切。酵母三杂交技术可用于筛库寻找caspase3下游底物,从癫痫大鼠海马中获得caspase3的新底物PIAS1,为进一步研究在癫痫发作致神经元损伤中caspase3的作用建立了基础。

caspase-3在颞叶癫痫大鼠海马神经凋亡中作用的实验研究

目的构建癫痫模型大鼠海马凋亡神经元的cDNA文库,采用酵母三杂交技术从中寻找caspase-3潜在的酶切底物。方法制作海人藻酸大鼠癫痫模型,取其海马组织制作酵母三杂交cDNA文库,克隆获得caspase-3的P12、P17两亚基,然后分别定向插入同一pBridge质粒,构建caspase-3的酵母三杂交诱饵载体并进行验证,然后对所构建文库进行筛库。结果成功构建癫痫模型大鼠海马组织cDNA文库,构建了caspase-3酵母三杂交诱饵载体,并通过caspase-3与eIF2α之间的相互作用验证,经筛库获得caspase-3的底物MIZ1。结论酵母三杂交技术可用于寻找caspase-3下游底物,从癫痫模型大鼠海马的cDNA文库中筛库获得caspase-3的底物MIZ1,为进一步研究caspase-3在癫痫发作引起的海马神经元损伤中的作用奠定了基础。

癫癎模型大鼠海马神经元凋亡细胞中caspase3新底物的寻找

目的:在癫癎模型大鼠海马神经元凋亡细胞中寻找caspase 3新底物。方法:建立癫癎模型大鼠海马组织cDNA文库,构建含caspase 3的P12和P17两亚基的三杂交诱饵载体,检测其效果,并进行酵母三杂交筛库。结果:成功建立了癫癎模型大鼠海马组织cDNA文库,构建了大鼠caspase 3基因的酵母三杂交诱饵载体,并通过caspase 3与eIF2α之间的相互作用验证;以此三杂交诱饵载体筛库获得caspase 3的新底物PIAS1及MIZ1。结论:从癫癎模型大鼠海马的cDNA文库中筛库获得caspase 3的新底物,为进一步研究caspase 3在癫癎发作引起海马神经损伤中的作用创造了条件。

Myc结合的锌指蛋白1评估实验性急性胰腺炎疾病严重程度的价值

目的检测急性坏死性胰腺炎（ANP）大鼠血清及胰腺组织Myc结合的锌指蛋白1（MIZ1）表达，探讨其评估急性胰腺炎（AP）病情严重程度的价值。方法采用胰管逆行注射牛磺胆酸钠方法制备ANP模型。以注射生理盐水作为对照组。术后6、24、48h处死大鼠，取血及胰腺组织。采用ELISA法检测血清淀粉酶活性及C反应蛋白（CRP）、TNF-α、IL-6、MIZ1水平。常规行胰腺组织病理学检查，并采用免疫组化及蛋白质印迹法检测胰腺组织MIZ1蛋白表达。结果对照组及ANP6、24、48h组大鼠血清淀粉酶活性分别为（449±40）、（578±25）、（1021±205）、（971±143）U／L；CRP水平为（123±23）、（169±25）、（226±34）、（229±24）mg／L；IL-6为（20．16±4．11）、（38．60±12．05）、（52．33±6．77）、（44．83±4．30）ng／L；TNF-α为（55．334-3．32）、（82．8±5．26）、（120．66±16．00）、（108．33±12．17）ng／L；MIZ1为（5．51士0．34）、（3．44±0．56）、（2．11±0．11）、（2．41±0．43）ng／L；胰腺病理评分为（1．83±0．75）、（6．00±1．67）、（8．16±2．70）、（9．33±1．50）分；胰腺组织MIZ1表达量为0．81±0．05、0．53±0．07、0．31±0．06、0．21±0．08。除ANP6h组的血淀粉酶活性外，其他所有指标ANP各组与对照组差异均有统计学意义（P值均〈0．01），ANP24、48h组又与6h组差异有统计学意义（P值均〈0．01），而ANP24h组与48h组间的差异均无统计学意义。血清MIZl水平与血清淀粉酶、CRP、TNF-α、IL-6水平及胰腺组织病理学评分均呈负相关，差异均有统计学意义（P值均〈0．01）。结论MIZl在AP病程中低表达，并与病情严重程度密切相关，可作为评估AP预后的指标之一。

植物根向水性反应研究进展

根的向水性生长是指植物通过根尖感知土壤中的水分梯度,向着水势较高区域生长的一种生物学特性,这一特性对植物从土壤中有效获取水分极为重要。植物向水性研究已成为当前植物学研究的热点领域,但对于调控这一生理反应的分子机制仍知之甚少。目前的研究表明,MIZ1和GNOM作为植物向水性反应的重要调节因子,正向调控植物根的向水性生长。此外,植物激素、光、ROS及钙离子也参与调节植物的向水性反应。该文将从向水性的研究历史、调控基因以及内外因素等方面进行阐述,便于读者全面了解植物向水性研究进展,以期为向水性研究提供新思路。