Mkate2转化过的大肠埃希氏菌制备的急性肾盂肾炎小鼠模型

目的在普通实验环境下通过向肾皮质内注射1×10~7cfu/m L的Mkate2转化非致病性大肠杆菌法,成功制备了急性肾盂肾炎小鼠模型。方法采用影像学方法对模型制作效果进行监测,提高了模型制作的成功率,减少了动物的使用数量。结果成功制备了小鼠肾盂肾炎模型,同时该细菌没有在肾脏中持续增殖,大大降低了模型制作的生物学风险。

一种新型荧光(mKate2)特异性标记中性粒细胞的转基因小鼠的构建及初步应用

目的构建在中性粒细胞中特异性表达mKate2红色荧光蛋白的转基因小鼠。方法本研究将人工合成的lysozyme M启动子及mKate2基因序列构建至pmini Tol2系统中,通过显微注射法把线性化的转基因载体注射到C57BL/6J小鼠的受精卵后并将其移植至假孕鼠体内,制备转基因小鼠。本研究使用PCR鉴定lyz-m Kate2转基因小鼠的成功构建和通过荧光显微镜和流式分析等方法鉴定该模型小鼠中荧光蛋白mKate2的表达及特异性。结果外源lyz-mKate2转基因盒在C57BL/6J小鼠体内成功表达。在外周血中检测到标记红色荧光信号的中性粒细胞,而且70%左右的mKate2阳性细胞是中性粒细胞。激光诱导血栓模型中血栓块可观察到mKate2阳性细胞。结论本研究成功构建了mKate2特异性标记中性粒细胞的新型转基因小鼠并验证了其在血栓模型中的应用价值。

伯氏疟原虫电穿孔转染方案的优化

目的通过在不同电转染方案下对电转染外源DNA到伯氏疟原虫效率进行对比,筛选优化出最佳的电转染方案。方法以mKate2为报告基因构建环状质粒p L0035-mKate2-3UTR,饲养昆明小鼠在体培养伯氏疟原虫(Plasmodium berghei),达到相应寄生率后体外同步化培养疟原虫,Nycodenz梯度离心纯化疟原虫成熟裂殖体,利用Lonza公司Nucleofector核转染系统对伯氏疟原虫进行电转染,采用流式细胞仪分析电转染效率,并提取昆明小鼠全血DNA作为模板进行PCR扩增,鉴定转染结果。结果经转染后流式细胞仪分析和血涂片吉姆萨染色镜下观察,Lonza Nucleofector 4D核转染系统电转染程序FI115与FP167均可使转染效率达到10^(-3),FP167下转染10μg环状质粒效率接近10^(-2)。在相同电转染条件下,外源DNA越多,转染效率越高。结论优化得到伯氏疟原虫电转染较好方案,为后续疟原虫药物、疫苗及生物学相关研究提供了可靠、高效的转染方案。