S420MLO材料的焊接工艺

为满足某大型海洋平台模块钢结构焊接的需要,采用SMAW和SAW焊接工艺对S420MLO材料进行焊接试验和力学性能试验。在试验过程中,通过裂纹尖端张开位移(Crack Tip Opening Displacement,CTOD)试验进行焊接工艺评定。试验结果表明,在焊材选用合理、焊接工艺得到严格控制的情况下,通过焊前预热和焊后消氢处理,能获得良好的焊接接头性能,满足相关标准及项目文件的要求,避免对大型钢结构进行焊后热处理。

中国南瓜MLO基因的鉴定与表达分析

MLO蛋白是植物特有的一类蛋白家族,其部分成员是植物感染白粉病的必要因子,其功能的缺失突变可诱导植物对白粉病病菌产生广谱且持久的抗性。为了揭示中国南瓜MLO基因的结构特点、系统发育关系及其功能特点,以已知的中国南瓜基因组信息为基础,采用生物信息学方法对中国南瓜的MLO基因进行鉴定分析。结果表明,中国南瓜基因组中含有20个MLO(CmoMLO)基因,分布在14条染色体上。中国南瓜CmoMLO基因大小从2 965 bp到9 967 bp不等,这些基因所编码的蛋白质氨基酸序列长度从324到1 264个不等。对应的等电点为6.26~9.63,分子权重为36 403.18~140 267.57 ku,外显子个数为6~22个。20个CmoMLO基因编码的蛋白质氨基酸序列含有2~8个不等的跨膜区。系统进化分析显示,20个中国南瓜CmoMLO蛋白被分为6个分枝,其中CmoMLO4、CmoMLO8、CmoMLO13、CmoMLO18、CmoMLO19这5个被划分到第Ⅴ分支。通过抗感材料接种后不同时期取样,分析位于第Ⅴ分枝的MLO基因的表达量差异,结果表明,CmoMLO4、CmoMLO13和CmoMLO19可能是参与白粉病病菌侵染中国南瓜的重要相关基因,且接种后24 h是MLO基因参与白粉病侵染的关键时期。本研究结果可为后期中国南瓜抗白粉病材料的创制与挖掘提供参考。

VIGS技术初步鉴定RgMLO6和RlMLO7基因对白粉病的负调控功能

为了探讨蔷薇科植物MLO基因在抗白粉病中的作用,研究应用病毒诱导的基因沉默技术(virus induced gene silencing,VIGS)抑制了大花香水月季RgMLO6基因和长尖叶蔷薇RlMLO7基因的表达,随后接种白粉菌对这2个基因进行抗性鉴定.研究发现在VIGS载体转化植株叶片20 d后,RgMLO6和RlMLO7基因的相对表达量显著下降了80%~90%,沉默效果明显.分别对2个基因沉默后的嫩叶进行白粉病抗性鉴定,大花香水月季和长尖叶蔷薇的抗性水平较对照组均提高.显微镜观察白粉菌接种2个基因沉默后植株叶片中菌丝体的生长情况,整体表现出沉默植株叶表皮细胞上的白粉菌生长较对照组生长缓慢.结果表明RgMLO6与RlMLO7基因对蔷薇科植物的白粉病有负向调控作用.

MLO-Y4来源外泌体对破骨细胞调控机制的研究

目的探讨骨细胞系MLO-Y4来源的外泌体对破骨细胞的调控机制。方法收集MLO-Y4细胞的培养基,通过超高速离心法获得MLO-Y4细胞外泌体(MLO-Y4-Exo),Western blot和透射电镜鉴定其特征;MLO-Y4-Exo与骨髓巨噬细胞共培养,TRAP染色检测其对破骨细胞分化的作用;小鼠顶骨皮下注射MLO-Y4-Exo检测其对体内破骨细胞分化的影响;通过小干扰RNA检测MLO-Y4-Exo对促破骨分化的机制。结果MLO-Y4外泌体大小形态满足外泌体特征,高表达CD63和Alix外泌体蛋白;MLO-Y4-Exo在体外和体内均促进破骨细胞分化(P<0.05);RANKL小干扰RNA实验证实MLO-Y4-Exo通过向破骨前体细胞传递RANKL蛋白促进破骨细胞分化(P<0.05)。结论骨细胞系MLO-Y4来源的外泌体通过向破骨前体细胞传递促破骨分化因子RANKL促进破骨细胞生成。

大麦抗白粉病基因Mlo的研究进展

野生型Mlo基因是大麦抗白粉病的负调控因子,该基因突变,赋予大麦对白粉菌的广谱抗性。综述了Mlo基因结构、功能及Mlo突变的等位基因(mlo)的抗性特点;讨论了mlo基因可能的抗病机制。为mlo抗性在麦类白粉病抗病育种中的应用提供了理论基础。

黄瓜、甜瓜和西瓜MLO基因家族的比较基因组学分析

MLO基因是植物特有的一类基因家族,在调控植物抵抗生物和非生物胁迫方面起着重要作用。为了揭示葫芦科作物MLO基因的遗传变异及系统发育关系,本文以黄瓜、甜瓜和西瓜基因组数据为基础,利用生物信息学方法对其MLO基因家族进行鉴定与分析。结果发现,黄瓜、甜瓜和西瓜基因组中共含有42个MLO基因家族成员,每一个物种均含有14个成员,且保守性强;系统发育关系揭示了这些成员在黄瓜、甜瓜和西瓜基因组中并不呈现一一对应关系,表明MLO型基因在这3种植物分化之后分别发生了扩展和丢失;进一步将其与模式植物拟南芥、番茄、豌豆MLO型白粉病基因进行聚类分析:一方面,借助于拟南芥MLO基因的分类标准,揭示了在黄瓜、甜瓜和西瓜基因组中也存在双子叶植物MLO型白粉病基因的特异区组,他们各自至少包含3个候选的白粉病基因,序列比对进一步发现这些基因均具有MLO型白粉病基因的典型结构特征,如7个跨膜结构域、钙调蛋白结合区以及两个缩氨酸区域(I和II);另一方面,大部分区组中包含的MLO基因均来源于拟南芥和黄瓜、甜瓜和西瓜MLO基因家族的成员,表明了MLO基因家族在拟南芥和葫芦科作物分化之前就已经存在。EST表达分析表明MLO基因广泛地参与到黄瓜、甜瓜和西瓜器官的营养生长和生殖生长。研究结果为揭示黄瓜、甜瓜和西瓜MLO基因的进化关系、功能及克隆表达分析奠定了基础。

间接免疫荧光显微术检测泡桐丛枝病原MLO的研究

以感染类菌原体ＭＬＯ的泡桐组培苗为病原繁殖材料，采用差速离心和Ｐｅｒｃｏｌｌ不连续密度梯度离心来提纯ＭＬＯ作为免疫抗原制备兔抗血清。抗血清经健康汁液吸收后，作为第一抗体，用异硫代氰酸荧光素ＦＩＦＣ标记的羊抗兔免疫球蛋白作为第二抗体，进行间接免疫荧光显微镜检查染病组织中的ＭＬＯ特异性荧光。经与ＤＡＰＩ染色技术比较，找出了适宜的徒手切片和减少非特异性反应的途径。此技术具有灵敏度高、特异性强和测定简便等特点。适用于ＭＬＯ组织定位、组培苗脱毒效果评估、病原株系鉴定和病害检疫等。

根癌农杆菌介导大麦Mlo反义基因转化小麦

应用含有大麦Mlo反义基因表达载体的根癌农杆菌菌株AglⅠ ,对 3种基因型小麦 (核生 3号、烟优 36 1、扬麦15 8)的愈伤组织进行了转化 .从其中 2种基因型获得 2 3株转基因植株 ,有 2株是白化苗 ,转化频率分别为 1.9%(核生 3号 )和 2 .8% (扬麦 15 8) .PCR及Southern分析表明 ,外源基因已整合进植物基因组 .实验结果表明 ,筛选压力的存在对转基因植株的获得至关重要 ,在无筛选压力下未获得转基因植株 .

小麦Mlo基因的克隆及白粉病菌诱导下的表达模式分析

为了研究Mlo基因在感、抗小麦品种中的表达情况,根据小麦基因芯片的Mlo探针序列,利用电子克隆与RT-PCR方法在感病小麦品种豫麦13和抗病品种红蚰麦中分别克隆到Mlo基因的同源序列。两条核苷酸序列全长均为1 605 bp,都含有一个完整的ORF(Open reading frame)。核苷酸序列分析显示二者的DNA序列只有一个核苷酸的差异,与大麦Mlo的相似性均为90%。编码的氨基酸序列包含有7个跨膜结构域,前18个氨基酸是信号肽序列,第414~435位是编码蛋白的活性中心,第451、459、462、475、483位点上有糖基化位点,细胞定位分析将其定位在膜上。从头建模分析构建的二者三维结构有明显差异。利用定量PCR对该基因在白粉菌诱导早期的表达模式进行分析,结果两基因的表达都受白粉菌的诱导,但在红蚰麦中的表达高峰出现在18 h,豫麦13中的表达高峰出现在72 h,表达时间的差异可能决定了两者对白粉菌的不同抗性反应。

小麦Mlo反义基因的转化及转基因植株的白粉病抗性分析

采用基因枪法将小麦反义Mlo基因导入扬麦158和济麦20的幼胚愈伤组织中,在含除草剂的分化培养基上经两轮筛选,获得抗性再生植株。PCR检测、PCR-Southern杂交、基因组DNA斑点杂交和除草剂BASTA抗性分析结果证实已获得转基因扬麦158和济麦20阳性植株,荧光定量表达分析亦证明Mlo基因发生沉默。对T0和T1代转基因植株的白粉病抗性鉴定表明,有6个转基因株系高抗白粉病。对T1代转基因小麦接种白粉菌后孢子发育的显微观察结果显示,Mlo反义基因的导入明显加快了乳突的形成和维持时间,有效抑制了吸器的发育,因而使转Mlo反义基因材料表现抗病性。

不同物种Mlo基因生物信息学分析

应用比较基因组学和生物信息学方法,比较了从藻类到高等植物Mlo基因的CDS序列,并对该基因的遗传多样性、氨基酸功能结构及分子系统发育进行分析。结果表明,85条基因序列共检测到57个多态位点,生成70个单倍型。物种间及物种内Mlo基因存在丰富的遗传多态性;氨基酸结构域分析发现,20个物种含有一段特定的Mlo结构域,其中低等植物的跨膜螺旋区域(1～5)明显比高等植物的跨膜螺旋区域(6～8)少;分子系统进化树结果显示,不同物种的聚类情况与植物学分类系统基本一致。本研究为进一步探索Mlo基因的生物学功能和确定该基因作为分子标记提供了基础依据。

谷子MLO家族的全基因组鉴定和表达谱分析

MLO是高等植物特有的一类抗病家族,在响应非生物胁迫中发挥重要作用。为全面解析MLO基因在谷子基因组中的特征,本研究利用生物信息学的方法,从谷子基因组中共鉴定出12个MLO基因,并对其编码蛋白的结构特征、亚细胞定位、系统进化关系、保守氨基酸残基位点进行预测,分析MLO基因在不同组织中的表达特征。结果表明,谷子MLO基因编码的蛋白质均包含有一个MLO结构域和多个跨膜区,且大多定位于细胞膜上,并存在一些保守的氨基酸残基位点和基序;与其他物种MLO成员的聚类结果表明,谷子MLO可分为7个类群(Ⅰ~Ⅶ),其中第Ⅶ类全部由禾本科作物的MLO成员组成,这些可能是禾本科作物单独进化出的一类特有的MLO成员;Si MLO10与单子叶植物中已知的抗白粉病MLO基因聚在第Ⅳ类,是谷子中一个候选的抗白粉病基因,而单子叶和双子叶植物中已知功能的MLO成员分别聚在第Ⅳ、第Ⅴ类群,表明MLO功能的形成可能发生在单、双子叶植物分化之后。大多数MLO基因在谷子的根、茎、叶、穗中均有表达,且不同的基因表达量存在较大差异,说明谷子MLO家族成员可能具有不同的生物学功能。本研究结果为揭示谷子MLO基因的功能及其在谷子抗白粉病育种中的应用奠定了一定的理论基础。

烟草Mlo基因的克隆及其序列特性分析

Mlo基因家族是一类植物抗病的负调控因子,该基因的突变能产生广谱的抗病性。以GenBank公布的水稻Mlo基因序列(登录号:AK099399.1)为信息探针对烟草的EST数据库进行同源搜索,并将获得的同源性高的EST序列进行拼接,最后得到了烟草Mlo基因的cDNA序列。采用RT-PCR方法成功克隆了与预期大小一致的Mlo基因cDNA片段951 bp,该基因可编码304个氨基酸。采用生物信息学方法预测分析了该基因编码蛋白的一、二级结构,并对其功能进行了预测。结果表明,该烟草Mlo基因编码蛋白包含有一个保守的Tmemb_40结构域,可能是一种类似于植物G蛋白偶联受体的膜结合转运蛋白。

枣树离体培养和脱除枣疯病原MLO技术研究进展

综述了枣树离体培养快速繁殖现状及脱除枣疯病原MLO的研究进展 ,并根据国内外最新研究成果 ,对已取得的经验和影响枣树离体培养的因素作了总结 ,指出了当前工作中存在的主要问题。

小麦Mlo及NBS-LRR类抗病基因同源序列的分离与鉴定(英文)

根据GenBank中公布的大麦白粉病抗性控制基因MlocDNA序列及一个来源于栽培一粒小麦 (TriticummonococcumL .)的假定抗病基因序列分别设计引物 ,以携带小麦抗白粉病基因的近等基因系为材料进行RT_PCR筛选。结果获得两个表达基因的cDNA克隆。其中一个与大麦白粉病抗性控制基因Mlo的同源性达 83%。另一个为非通读序列 ,含有两个可能的开放阅读框 ,分别包含抗病基因NBS保守结构域 2和 3以及与水稻抗稻瘟病基因Pib蛋白末端相似的 1 3个LRR区域 ,推测该序列属于NBS_LRR类。白粉菌诱导前后 ,该片段RT_PCR扩增产物存在差异 ,表明该片段可能与小麦抗病性相关。利用“中国春”缺体_四体系 ,将该NBS_LRR类序列定位在小麦 1D染色体上。

蓖麻基因组Mlo基因家族成员的鉴定及其序列特征分析

Mlo基因家族是一类重要的植物抗病基因,而蓖麻基因组Mlo成员的鉴定和分析为进一步培育蓖麻抗病品种奠定基础。本研究通过系统地分析蓖麻基因组数据,从中共鉴定出16个Mlo成员,其中15个具有完整的ORF,1个序列缺失。对15个具有完整ORF的蓖麻Mlo基因进行结构分析发现,它们在序列长度上差异较大,但其编码蛋白均具有一个保守的Mlo结构域和6-7次跨膜结构,主要定位在细胞膜上。对蓖麻Mlo基因与其他物种的Mlo基因进行聚类关系分析,结果显示,可将蓖麻Mlo基因家族分为7类（Ⅰ-Ⅶ）,其中第Ⅶ类只包含2个蓖麻Mlo基因（RcMlo8和RcMlo9）,这可能是蓖麻中特有的一类Mlo;蓖麻RcMlo3、RcMlo2、RcMlo6和RcMlo12与已知的抗病Mlo基因分别聚在第Ⅳ和第Ⅴ类,这4个基因可能是蓖麻基因组中具有抗病功能的Mlo。本研究结果为进一步克隆蓖麻Mlo基因并研究其功能奠定了良好的基础。

小麦TaMlo8基因的克隆及表达分析

【目的】克隆小麦Mlo基因家族新成员,分析其编码蛋白的结构、进化地位以及其在小麦根、茎、叶组织和生物胁迫下的表达模式。【方法】采用电子克隆、RT-PCR技术,从小麦品种"水源11"中分离出1个Mlo的cD-NA序列基因,对其进行克隆和序列分析;利用InterProScan、TMpred、SignalP等在线分析工具,预测TaMlo蛋白的保守结构域、跨膜结构、信号肽、细胞定位等特征;采用DNASTAR软件分别进行氨基酸序列同源性比对和进化树分析,并利用qRT-PCR技术对其表达谱进行分析。【结果】以玉米ZmMlo8基因为种子序列,克隆了小麦新基因TaMlo8(暂命名)cDNA序列,该序列长1 897bp,ORF为1 497bp,编码499个氨基酸;InterProScan和SignalP预测结果显示,其为Mlo家族成员,含信号肽和7个跨膜区;BLASTX结果显示,TaMlo8与玉米ZmMlo8蛋白的相似性达78%;系统进化树显示,TaMlo8与玉米ZmMlo8处于同一分支下,而与小麦其他Mlo家族成员处于不同的分支上,进一步说明TaMlo8为小麦Mlo家族的新成员;表达谱分析表明,TaMlo8是组成型低表达,在小麦根、茎、叶组织中的表达量基本一致,在小麦与条锈菌互作的非亲和体系中诱导表达,在小麦与白粉菌的感病反应中诱导表达。【结论】克隆到1个小麦Mlo基因新成员TaMlo8,其在小麦与条锈菌的抗性反应和小麦与白粉菌的感病反应中起一定作用,说明TaMlo8基因对条锈菌和白粉菌的抗病路径可能不同,为进一步研究其在小麦生物胁迫反应中的潜在功能奠定了基础。

水稻中大麦Mlo和玉米Hm1抗病基因同源序列的分析和定位

大麦抗病基因Mlo和玉米抗病基因Hm1编码的产物不具有绝大多数植物抗病基因产物所含有的保守结构域。这两个抗病基因的作用机理也不符合基因对基因学说。从水稻中分离克隆了Mlo基因的同源序列OsMlo 1和玉米Hm1基因的同源序列DFR 1。利用水稻分子标记遗传连锁图 ,将OsMlo 1定位于水稻第六染色体的两个分子标记RZ6 6 7和RG4 2 4之间 ;OsMlo 1距离这两个分子标记分别为 2 0 .6和 6 .0cM(centi Morgan)。将DFR 1定位于水稻第一染色体两个分子标记R2 6 35和RG4 6 2之间 ;DFR 1距离这两个分子标记分别为 11.3和 2 3.9cM。参照已发表的水稻分子标记连锁图 ,发现OsMlo 1和DFR 1的染色体位点分别与两个已报道的水稻抗稻瘟病数量性状位点 (QTL)有较好的对应关系。结果提示 ,水稻中与大麦Mlo和玉米Hm1同源的基因可能也参于抗病反应的调控。

老年女性乳腺癌术后X线乳腺摄影改进MLO位摄影方法比较

目的 探讨老年女性乳腺癌手术以后改进乳腺内外侧斜位摄影方式和临床应用价值。方法 对94例老年女性乳腺癌术后患者进行常规乳腺复查,然后通过试验进行对照研究,从而将常规摄影位和改进后的内外侧斜位进行对比,找出存在的不同之处。对改进的内外侧斜位与常规内外侧斜位图像采用Wilcoxon秩和检验进行统计学研究,根据老年女性乳腺癌患者乳腺切口位置的不同分组进行,并对改进的内外侧斜位与常规内外侧斜位图像由2位阅片者进行双盲打分比较。结果 老年女性乳腺癌腺体切口在内上方者,切线位乳头评分提高;老年女性乳腺癌腺体切口在外上方者,改进后的内外侧斜位的乳腺腺体显露程度和切线位乳头评分都高于常规内外侧斜位,对比常规内外侧斜位,改进后的内外侧斜位图像评分提高明显,差异有统计学意义,P<0.05。结论对老年女性乳腺癌患者的乳腺进行检查时,可以通过体位内外倾斜来改进内外侧斜位的摄影方式,从而使图像质量显著提高。

瓜叶菊Mlo基因的克隆、分析及VIGS载体构建

试验以瓜叶菊(Pericallis hybrida B.Nord.)为试验材料,采用RT-PCR和RACE方法获得白粉菌调控相关Mlo基因的cDNA全长序列,通过VIGS技术构建载体,进行基因沉默并转入到农杆菌GV3101中。序列分析表明,该基因cDNA全长包含1个1 296 bp的开放阅读框,编码431个氨基酸。荧光定量结果表明,Mlo基因在瓜叶菊的根、茎、叶中都有表达,叶片中表达量最高,根中表达量最低。根据PCR结果和双酶切鉴定结果表明载体构建成功。通过PCR结果显示载体已成功转入农杆菌GV3101中。该研究为下一步分析基因沉默后瓜叶菊中Mlo基因变化提供依据。