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限制性内切酶MluⅠ基因的合成、克隆和初步表达
被引量:
1
1
作者
覃鸿妮
钱莉春
+1 位作者
沈晓燕
梅啸
《西南师范大学学报(自然科学版)》
CAS
北大核心
2016年第10期46-53,共8页
在已知基因序列但缺乏DNA模版的情况下,人工设计合成多条引物,采用重叠PCR技术体外人工合成899bp的MluⅠ基因和1 312bp的M.MluⅠ基因.并将合成的MluⅠ基因连接到表达载体pet30a上,重组表达载体构成pet30a-MluⅠ,将M.MluⅠ基因连接到表...
在已知基因序列但缺乏DNA模版的情况下,人工设计合成多条引物,采用重叠PCR技术体外人工合成899bp的MluⅠ基因和1 312bp的M.MluⅠ基因.并将合成的MluⅠ基因连接到表达载体pet30a上,重组表达载体构成pet30a-MluⅠ,将M.MluⅠ基因连接到表达载体PUC19上,重组表达载体构成PUC19-M.MluⅠ.测序结果显示,载体构建成功后利用体外重组转化技术,将pet30a-MluⅠ和PUC19-M.MluⅠ转入T7expression E.coli表达菌株中.重组工程菌经IPTG诱导,用SDS-PAGE鉴定,发现限制性内切酶MluⅠ成功表达.该酶的成功表达不仅为后续研究提供了材料,而且为实验室制备限制性内切酶在方法上开辟了新的途径,为更多新发现的内切酶基因的成功克隆提供了参考.
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关键词
限制性内切酶
mluⅰ
基因的合成
基因克隆
基因表达
下载PDF
职称材料
限制性内切酶Mlu Ⅰ蛋白及其硒代衍生物的制备
被引量:
1
2
作者
邵钰晨
马燕燕
+5 位作者
谷庆花
鲍渴望
孙晓宇
陈晓雨
李婷婷
司鑫鑫
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第5期1528-1537,共10页
【背景】限制性内切酶Mlu Ⅰ是一种常用的工具酶,在分子生物学领域发挥着重要的作用,其三维结构尚未被解析。【目的】在大肠杆菌中克隆表达、纯化重组Mlu Ⅰ蛋白及其硒代蛋白,并进行结晶条件的研究。【方法】构建重组表达载体pET28b-Mlu...
【背景】限制性内切酶Mlu Ⅰ是一种常用的工具酶,在分子生物学领域发挥着重要的作用,其三维结构尚未被解析。【目的】在大肠杆菌中克隆表达、纯化重组Mlu Ⅰ蛋白及其硒代蛋白,并进行结晶条件的研究。【方法】构建重组表达载体pET28b-Mlu Ⅰ,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中诱导表达,利用亲和层析和凝胶过滤层析纯化重组Mlu Ⅰ蛋白和硒代Mlu Ⅰ蛋白。对蛋白进行质谱检测、圆二色谱检测以及酶活检测,利用坐滴法进行结晶条件的筛选。【结果】构建了重组表达载体pET28b-Mlu Ⅰ并纯化获得达到结晶纯度的蛋白,通过质谱检测确定硒代Mlu Ⅰ蛋白中的8个甲硫氨酸全部被取代,结合酶活测试及圆二色谱检测确定了硒代对Mlu Ⅰ蛋白的活性、结构无明显影响。采用坐滴法进行初步的晶体生长研究,重组蛋白目前已在1种条件下获得针状晶体并进行初步衍射,获得分辨率在0.32 nm左右的衍射数据。【结论】Mlu Ⅰ蛋白及硒代Mlu Ⅰ蛋白纯化体系的构建和结晶条件的研究,可为下一步解析Mlu Ⅰ三维结构、作用机制的探讨及定向改造奠定基础。
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关键词
限制性内切酶
mluⅰ
硒代蛋白
结晶
原文传递
题名
限制性内切酶MluⅠ基因的合成、克隆和初步表达
被引量:
1
1
作者
覃鸿妮
钱莉春
沈晓燕
梅啸
机构
苏州工业园区服务外包职业学院
苏州金唯智生物科技有限公司
出处
《西南师范大学学报(自然科学版)》
CAS
北大核心
2016年第10期46-53,共8页
基金
苏州工业园区服务外包职业学院教研教改研究课题(JG-201601)
文摘
在已知基因序列但缺乏DNA模版的情况下,人工设计合成多条引物,采用重叠PCR技术体外人工合成899bp的MluⅠ基因和1 312bp的M.MluⅠ基因.并将合成的MluⅠ基因连接到表达载体pet30a上,重组表达载体构成pet30a-MluⅠ,将M.MluⅠ基因连接到表达载体PUC19上,重组表达载体构成PUC19-M.MluⅠ.测序结果显示,载体构建成功后利用体外重组转化技术,将pet30a-MluⅠ和PUC19-M.MluⅠ转入T7expression E.coli表达菌株中.重组工程菌经IPTG诱导,用SDS-PAGE鉴定,发现限制性内切酶MluⅠ成功表达.该酶的成功表达不仅为后续研究提供了材料,而且为实验室制备限制性内切酶在方法上开辟了新的途径,为更多新发现的内切酶基因的成功克隆提供了参考.
关键词
限制性内切酶
mluⅰ
基因的合成
基因克隆
基因表达
Keywords
Restriction enzyme
synthesis of
mluⅰ
gene
gene cloning
gene expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
限制性内切酶Mlu Ⅰ蛋白及其硒代衍生物的制备
被引量:
1
2
作者
邵钰晨
马燕燕
谷庆花
鲍渴望
孙晓宇
陈晓雨
李婷婷
司鑫鑫
机构
江苏海洋大学药学院
江苏海洋大学江苏省海洋药物活性分子筛选重点实验室
出处
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第5期1528-1537,共10页
基金
江苏省海洋药物活性分子筛选重点实验室开放基金(HY201802)
江苏省研究生科研与实践创新计划(KYCX20-2892)。
文摘
【背景】限制性内切酶Mlu Ⅰ是一种常用的工具酶,在分子生物学领域发挥着重要的作用,其三维结构尚未被解析。【目的】在大肠杆菌中克隆表达、纯化重组Mlu Ⅰ蛋白及其硒代蛋白,并进行结晶条件的研究。【方法】构建重组表达载体pET28b-Mlu Ⅰ,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中诱导表达,利用亲和层析和凝胶过滤层析纯化重组Mlu Ⅰ蛋白和硒代Mlu Ⅰ蛋白。对蛋白进行质谱检测、圆二色谱检测以及酶活检测,利用坐滴法进行结晶条件的筛选。【结果】构建了重组表达载体pET28b-Mlu Ⅰ并纯化获得达到结晶纯度的蛋白,通过质谱检测确定硒代Mlu Ⅰ蛋白中的8个甲硫氨酸全部被取代,结合酶活测试及圆二色谱检测确定了硒代对Mlu Ⅰ蛋白的活性、结构无明显影响。采用坐滴法进行初步的晶体生长研究,重组蛋白目前已在1种条件下获得针状晶体并进行初步衍射,获得分辨率在0.32 nm左右的衍射数据。【结论】Mlu Ⅰ蛋白及硒代Mlu Ⅰ蛋白纯化体系的构建和结晶条件的研究,可为下一步解析Mlu Ⅰ三维结构、作用机制的探讨及定向改造奠定基础。
关键词
限制性内切酶
mluⅰ
硒代蛋白
结晶
Keywords
restriction endonuclease
mlu
ⅰ
selenoprotein
crystallization
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
限制性内切酶MluⅠ基因的合成、克隆和初步表达
覃鸿妮
钱莉春
沈晓燕
梅啸
《西南师范大学学报(自然科学版)》
CAS
北大核心
2016
1
下载PDF
职称材料
2
限制性内切酶Mlu Ⅰ蛋白及其硒代衍生物的制备
邵钰晨
马燕燕
谷庆花
鲍渴望
孙晓宇
陈晓雨
李婷婷
司鑫鑫
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
1
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