柯乐猪MMP2基因多态性及其与繁殖性状的关联分析

【目的】探究基质金属蛋白酶2(matrix metallopeptidase 2,MMP2)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)及其与繁殖性状的相关性,筛选与柯乐猪繁殖性状相关的遗传标记。【方法】试验选择212头健康的经产柯乐母猪,采用直接测序法筛选柯乐猪MMP2基因SNP位点,利用RNAfold在线软件预测MMP2基因不同单倍型mRNA二级结构,并通过SPSS 22.0软件分析MMP2基因SNP位点与柯乐猪繁殖性状的相关性。【结果】在柯乐猪MMP2基因第2外显子中检测到1个SNP位点(g.30062403 C>T),在第4外显子中检测到2个SNPs位点(g.30065309 C>T和g.30065312 C>T),均存在3种基因型(CC、CT和CT)。遗传特性分析结果显示,g.30062403 C>T位点为低度多态,g.30065309 C>T和g.30065312 C>T位点属于中度多态。卡方适合性检验结果显示,g.30062403 C>T位点显著偏离Hardy-Weinberg平衡(P<0.05),另2个位点均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。连锁不平衡分析结果显示,g.30065309 C>T和g.30065312 C>T位点之间存在强连锁不平衡。单倍型mRNA二级结构分析显示,单倍型H1的mRNA二级结构与原序列相同,其他3种单倍型均导致mRNA二级结构和最小自由能发生变化。关联分析结果显示,g.30062403 C>T位点TT基因型个体的窝产活仔数显著高于CC基因型,断奶窝重显著高于CT基因型(P<0.05);g.30065309 C>T位点CC基因型个体的断奶仔数显著高于TT基因型(P<0.05);g.30065312 C>T位点TT基因型个体的窝产活仔数、断奶仔数均显著高于CT基因型(P<0.05)。双倍型H2H2为窝产仔数、窝产活仔数、断奶仔数、断奶窝重的优势双倍型,H1H4为初生窝重的优势双倍型。【结论】柯乐猪MMP2基因3个SNPs位点与其窝产仔数、窝产活仔数、初生窝重、断奶仔数及断奶窝重均存在显著关联性,可作为分子育种遗传标记。

N-乙酰半胱氨酸对努比亚山羊PLCB3和MMP2基因表达的影响

为了探究N-乙酰半胱氨酸(N-Acetylcysteine,NAC)对山羊繁殖性能相关基因PLCB3与MMP2的影响机制,试验以努比亚山羊为研究对象,将其分为饲喂组(0.07%NAC)和空白组,采用实时荧光定量PCR法检测饲喂组和空白组子宫、输卵管、垂体、下丘脑、卵巢5个器官中PLCB3和MMP2基因表达量的变化。结果表明:空白组和饲喂组PLCB3和MMP2基因在5个器官中均有表达。组内比较,空白组各器官中PLCB3基因的表达量由高到低的顺序为垂体>子宫>下丘脑>输卵管>卵巢,饲喂组中的顺序为垂体>子宫>下丘脑>卵巢>输卵管;组间比较,空白组垂体中PLCB3基因的表达量显著高于饲喂组(P<0.05);总体来看,空白组各器官中PLCB3基因的表达量高于饲喂组。组内比较,空白组各器官中MMP2基因的表达量由高到低的顺序为垂体>子宫>下丘脑>输卵管>卵巢,饲喂组中的顺序为垂体>子宫>下丘脑>卵巢>输卵管,其中垂体和子宫中的表达量极显著高于输卵管、下丘脑和卵巢(P<0.01);组间比较,饲喂组垂体中MMP2基因的表达量极显著高于空白组(P<0.01),子宫中的表达量显著高于空白组(P<0.05);总体来看,饲喂组各器官中MMP2基因的表达量高于空白组。说明在饲粮中添加0.07%的NAC会使PLCB3基因在性腺器官中的表达量降低,MMP2基因在性腺器官中的表达量升高,推测NAC会通过影响性腺轴中PLCB3和MMP2基因表达量来影响努比亚山羊的繁殖性能。

Mmp2基因克隆及其对肝癌细胞的作用

克隆人基质金属蛋白酶-2基因(Mmp2)编码区并构建重组真核表达载体pEYFP-Mmp2,研究其在肝癌细胞中的作用。以肝癌细胞Hep G2的总RNA为模板,通过RT-PCR获得cDNA,并通过PCR获得Mmp2基因编码区。经TA克隆和测序鉴定将无任何突变的Mmp2基因编码区插入到真核表达载体pEYFPN1中,构建p EYFP-Mmp2重组真核表达载体并进行酶切鉴定和测序鉴定。pEYFP-Mmp2稳定性转染肝癌细胞,经G418筛选获得Mmp2稳转单克隆细胞株,并用Western blotting分析鉴定。用实时无标记细胞增殖分析技术(RTCA)分析Mmp2基因对肝癌细胞生长增殖的作用,细胞划痕愈合实验分析Mmp2基因对肝癌细胞迁移的作用。结果证明成功构建重组真核表达载体pEYFP-Mmp2,Western Blotting证实稳转株中高表达外源融合蛋白MMP2-YFP。细胞增殖和迁移结果表明,Mmp2基因可以抑制肝癌细胞增殖但能够促进肝癌细胞迁移。以上研究表明,Mmp2基因能够促进肝癌细胞迁移。

Her-2/neu和MMP2在胰腺癌中的表达及其意义

笔者应用免疫组织化学法检测Her 2 /neu和MMP2基因在 3 4例胰腺癌、5例胰腺囊腺瘤、5例胰腺囊肿和 2例正常胰腺组织中的表达水平。结果示胰腺癌中Her 2 /neu和MMP2表达明显高于胰腺正常组织和良性病变 (P <0 .0 5)。Her 2 /neu的表达在有淋巴结转移的胰腺癌中明显低于无淋巴结转移的胰腺癌 (P <0 .0 5) ;随TNM分期增高 ,其表达阳性率显著降低。MMP2表达在肿瘤直径大于 4.5cm及有淋巴结转移的胰腺癌中均明显高于肿瘤直径小于 4.5cm及无淋巴结转移者 (P <0 .0 5) ;随TNM分期增高 ,其表达阳性率也增高。MMP2在预后不良组中表达水平较生存组高 ,但差异无显著性 (P >0 .0 5)。提示Her 2 /neu和MMP2过度表达可能与胰腺癌的发生发展有关 ;Her 2 /neu可能在胰腺癌发生转移之前发挥作用 ,而MMP2与胰腺癌的侵袭、转移密切相关。检测二者表达水平对指导临床治疗和评估预后可能有较重要价值。

Gga-miR-29b-3p抑制MDV转化细胞侵袭和原癌基因Meq表达

目的:研究gga-miR-29b-3p对马立克氏病(MD)肿瘤转化细胞侵袭和原癌基因Meq表达的影响。方法:选取SPF白来航鸡在感染马立克氏病病毒(MDV)后引发的内脏淋巴瘤为样本,通过实时荧光定量PCR检测gga-miR-29b-3p的表达情况;利用在线生物软件对gga-miR-29b-3p潜在的靶基因进行功能分析。以该miRNA为研究对象,MDV转化细胞系MDCC-MSB1为试验材料,分别转染miRNA激动剂或阴性对照,检测细胞侵袭相关基因MMP2和MMP9以及MDV原癌基因Meq的表达情况。结果:Gga-miR-29b-3p在感染MDV白来航鸡的肿瘤化脾脏和肝脏淋巴瘤中均显著低表达。信号通路方面miRNA的预测靶基因分别参与FoxO信号通路、mTOR信号通路、Jak-STAT信号通路、Toll样受体信号通路、ErbB信号通路、VEGF信号通路和细胞凋亡等,这些信号通路可参与肿瘤发生进程。转染miRNA激动剂后,MMP2和MMP9基因的表达量在48 h显著下调(P<0.05);Meq基因在48 h表达显著下调(P<0.05)。结论:Gga-miR-29b-3p抑制细胞侵袭和病毒原癌基因的表达,其潜在靶基因能够介导肿瘤发生,提示该miRNA可能参与MD肿瘤转化过程。

基质金属蛋白酶2在肾细胞癌中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶2(MMP2)在肾细胞癌(RCC)中的表达及意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及表达丰度定量法检测肾细胞癌组织和正常对照组中MMP2基因mRNA的表达。结果RCC组MMP2基因mRNA表达水平均明显高于正常对照组(P<0.01)。结论RCC组织中MMP2基因mRNA的表达较正常肾组织高,与肿瘤分期、分级相关,可作为判断肾癌预后的指标。

β-榄香烯对肝癌细胞SK-hep-1的迁移和侵袭力的影响

目的:观察β-榄香烯对肝癌SK-hep-1细胞的侵袭、转移等生物学行为的影响,探讨其对MMP2基因的调节。方法:将SK-hep-1细胞分为3组:control组、β-榄香烯(80μg/ml)组、TGF-β1(transforminggrowth factorβ1,TGF-β1)(10μg/ml)组,RT-PCR检测各组细胞的MMP2(matrix metalloproteinase-2,MMP2)mRNA表达;通过划痕试验及transwell细胞侵袭试验进一步对β-榄香烯作用的肝癌细胞迁移和侵袭能力进行分析。结果:β-榄香烯作用肝癌细胞中MMP2mRNA表达低于control组和TGF-β1组(P<0.05)。β-榄香烯组穿膜细胞数(50±10)少于control组(150±16)及TGF-β1组(300±13),(P<0.05)。β-榄香烯组细胞的迁移数(92±8)明显低于control组(180±14)及TGF-β组(300±20),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:β-榄香烯能下调肝癌细胞SK-hep-1的MMP2mRNA表达,降低肝癌细胞的侵袭、迁移能力。

gga-miR-140-3p抑制马立克病病毒转化细胞MSB1增殖、迁移和侵袭

以马立克病病毒(MDV)感染SPF白来航鸡,收集脾和肝来源的淋巴瘤,利用实时荧光定量PCR(qRTPCR)进行检测,结果显示gga-miR-140-3p在感染MDV的肿瘤化脾和肝淋巴瘤中低表达。为揭示该miRNA在马立克病(MD)肿瘤转化过程中的作用,以该miRNA为研究对象,MDV转化细胞系MDCC-MSB1为试验材料,分别转染miRNA激动剂或阴性对照,检测细胞增殖和迁移,并检测与细胞侵袭密切相关的基因MMP2和MMP9mRNA表达情况。结果显示,与阴性对照组相比,转染gga-miR-140-3p激动剂后,细胞增殖在24、36和48h后发生显著(P<0.05)抑制,在60和72h后发生极显著(P<0.01)抑制。转染激动剂后,细胞迁移数也显著(P<0.05)减少。转染激动剂后,MMP2在转染后24h转录显著下调(P<0.05),转染后48和72h转录极显著(P<0.01)下调,MMP9基因在转染后48h转录显著(P<0.05)下调。gga-miR-140-3p作为在MDV感染组织中异常表达的miRNA,能够影响MD肿瘤淋巴细胞的特征——增殖、迁移和侵袭,提示该miRNA可能参与MD肿瘤转化过程。