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大豆锰超氧化物歧化酶基因在乳酸乳球菌中的分泌表达 被引量:4
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作者 马红丹 张丽媛 +4 位作者 赵邯郸 徐丹丹 曲静 关淑艳 王丕武 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第1期135-139,共5页
为使大豆锰超氧化物歧化酶(Mn superoxide dismutase,Mn SOD)在乳酸乳球菌中高效表达,将克隆的Mn SOD基因开放阅读框序列分别重组到质粒p NZ8149和经改造的质粒p NZS上,表达载体p NZ-SOD和分泌表达载体p NZS-SOD,将两者分别以电穿孔法... 为使大豆锰超氧化物歧化酶(Mn superoxide dismutase,Mn SOD)在乳酸乳球菌中高效表达,将克隆的Mn SOD基因开放阅读框序列分别重组到质粒p NZ8149和经改造的质粒p NZS上,表达载体p NZ-SOD和分泌表达载体p NZS-SOD,将两者分别以电穿孔法转化乳酸乳球菌L.lactis NZ3900,经Elliker琼脂板筛选、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、酶切鉴定正确后,获得的两重组菌株加入Nisin进行诱导表达,对L.lactis NZ3900/p NZ-SOD和L.lactis NZ3900/p NZS-SOD的表达产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和酶活性对比分析。结果显示:L.lactis NZ3900/p NZS-SOD菌株表达SOD总活性约是L.lactis NZ3900/p NZ-SOD菌株的1.6倍,是L.lactis NZ3900/p NZ8149的13.5倍,且可将表达的约2/3的SOD分泌到胞外,表明经改造的乳酸菌分泌表达系统L.lactis NZ3900/p NZS能够分泌表达SOD,并增强SOD的表达。 展开更多
关键词 超氧化物歧化酶(mn SOD) 食品级分泌表达载体 乳酸乳球菌
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锰超氧化物歧化酶基因多态性与2型糖尿病微血管病变研究
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作者 贾艳坤 于德民 《实用糖尿病杂志》 2009年第1期30-32,共3页
应用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)检测天津地区汉族人群中232例T2DM患者及96例对照者Mn-SODC(1183)T多态性,其中T2DM患者分为DN089例、DN177例、DN262例及DR089例、BDR96例、PDR20例。结果DN2T/T基因型频率(82.3%)明显高... 应用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)检测天津地区汉族人群中232例T2DM患者及96例对照者Mn-SODC(1183)T多态性,其中T2DM患者分为DN089例、DN177例、DN262例及DR089例、BDR96例、PDR20例。结果DN2T/T基因型频率(82.3%)明显高于DN0(60.7%),而与DN1无差异,T等位基因频率在肾病各组间无统计学差异。T/T基因型及T等位基因分布在DR组间均无差异。结论Mn-SOD1183T/T基因型是TDM的危险因素。 展开更多
关键词 糖尿病肾病(DN) 糖尿病视网膜病变(DR) 超氧化物歧化酶(mn—SOD) 基因多态性
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条斑紫菜锰超氧化物歧化酶原核表达及多克隆抗体制备 被引量:1
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作者 邵林 茅云翔 +2 位作者 阎斌伦 孔凡娜 王健 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期47-52,共6页
研究紫菜抗逆的分子机制,将本实验室克隆的条斑紫菜(Porphyra yezoensisUeda)锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,Mn SOD)基因全长cDNA克隆到质粒pET-30c(+)中,构建原核表达载体pET-S,转化大肠杆菌BL21(DE3)表达Mn SOD,... 研究紫菜抗逆的分子机制,将本实验室克隆的条斑紫菜(Porphyra yezoensisUeda)锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,Mn SOD)基因全长cDNA克隆到质粒pET-30c(+)中,构建原核表达载体pET-S,转化大肠杆菌BL21(DE3)表达Mn SOD,表达产物的分子量约为30 KDa。利用不同浓度的Mn2+诱导重组Mn SOD的表达,可以检测到比活力随Mn2+浓度增高而上升的趋势。用重组Mn SOD免疫新西兰大白兔,制备了多克隆抗体,多克隆抗体的效价为1∶8 000。免疫印迹实验(Western Blot)表明该多克隆抗体具有很好的特异性。 展开更多
关键词 条斑紫菜 超氧化物歧化酶(mn SOD) 原核表达 酶活性 多克隆抗体
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Effects of UV-B irradiation on isoforms of antioxidant enzymes and their activities in red alga Grateloupia filicina(Rhodophyta) 被引量:3
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作者 赵吉强 李丽霞 《Chinese Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2014年第6期1364-1372,共9页
Macroalgae in a littoral zone are inevitably exposed to UV-B irradiance. We analyzed the effects of UV-B on isoenzyme patterns and activities of superoxide dismutase (SOD), peroxidase (POX), catalase (CAT), and ... Macroalgae in a littoral zone are inevitably exposed to UV-B irradiance. We analyzed the effects of UV-B on isoenzyme patterns and activities of superoxide dismutase (SOD), peroxidase (POX), catalase (CAT), and ascorbate peroxidase (APX) of red algae Grateloupia filicina (Lamour.) C. Agardh. The activities of SOD, CAT, and APX changed in response to UV-B in a time- and dose-dependent manner. POX activity increased significantly under all three UV-B treatments. The enzymatic assay showed three distinct bands of SODI (Mn-SOD), SODII (Fe-SOD), and SODIII (CuZn-SOD) under a low (Luv) and medium (Muv) dose of UV-B irradiation, while SODI and SODIII activities decreased significantly when exposed to a high dose of UV-B irradiation (Huv). The activity of POX isoenzymes increased significantly after exposure to UV-B, which is consistent with the total activity. In addition, a clear decrease in activity of CATIV was detected in response to all the three doses of UV treatments. Some bands ofAPX isoenzyme were also clearly influenced by UV-B irradiation. Correspondingly, the daily growth rate declined under all the three exposure doses, and was especially significant under Muv and Huv treatments. These data suggest that, although the protection mechanisms of antioxidant defense system are partly inducible by UV-B to prevent the damage, G.filicina has incomplete tolerance to higher UV-B irradiation stress. 展开更多
关键词 UV-B irradiation Grateloupiafilicina antioxidant system ISOENZYME ELECTROPHORESIS
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全长SOD2重组蛋白的可溶表达、纯化、稳定性与跨膜效应 被引量:1
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作者 潘剑茹 陈莉娟 +6 位作者 何火聪 苏颖 王香玲 李娴 陈翠煌 吴伦巧 刘树滔 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1168-1177,共10页
超氧化物歧化酶(SOD)家族是保护细胞免受正常代谢过程中产生的活性氧(ROS)毒性所必需的,含Mn2+离子的超氧化物歧化酶(Mn-SOD,SOD2)是其中最重要的一种。本研究合成了人源SOD2全基因序列,并将其插入带有GST的原核表达载体p GEX-4T-1中,... 超氧化物歧化酶(SOD)家族是保护细胞免受正常代谢过程中产生的活性氧(ROS)毒性所必需的,含Mn2+离子的超氧化物歧化酶(Mn-SOD,SOD2)是其中最重要的一种。本研究合成了人源SOD2全基因序列,并将其插入带有GST的原核表达载体p GEX-4T-1中,成功构建了GST-SOD2融合蛋白表达质粒。然后,将重组质粒p GEX-4T-1-SOD2转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG在25℃下诱导表达融合蛋白,得到可溶性GST-SOD2融合蛋白,经GST亲和树脂纯化得到比活为1 788 U/mg的纯蛋白,分子量约为46 k Da。利用凝血酶切去GST标签后经肝素亲和柱纯化得到了电泳纯的SOD2重组蛋白,该蛋白分子量约为25 k Da,与SOD2全长序列的理论分子量相符,比活为2 000 U/mg。两种重组SOD2蛋白在生理条件下都具有良好的SOD活性,且都具有显著的跨膜能力(P<0.05)。这些工作为深入研究两种全长重组SOD2蛋白的结构与生物效应建立了基础。 展开更多
关键词 mn超氧化物歧化酶 构建 融合蛋白 表达纯化 稳定性 跨膜效应
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