盐度胁迫下口虾蛄Mn-SOD基因的表达分析

利用实时定量PCR技术,分析了Z9～Z11期口虾蛄Oratosquilla oratoria Mn-SOD基因在不同盐度胁迫下的表达情况.试验共设置8组,盐度分别为12.8、16.3、19.8、23.3、26.8（对照组）、30.3、33.8、37.3,各组均在盐度胁迫后的1.5、3、6、9、12、24、36、48、72 h取样.结果表明：在盐度胁迫时间为6、9、12、48、72 h时,各盐度组口虾蛄Mn-SOD基因的表达量总体上极显著或显著低于对照组（P＜0.01或P＜0.05）,且与对照组盐度差值小的23.3、30.3两个盐度组,Mn-SOD基因表达量总体上均高于极高盐度（37.3）和极底盐度（12.8）组,在胁迫时间为24、36 h时,除12.8、16.3两个低盐度组外,其余盐度组Mn-SOD基因的表达量总体上极显著高于对照组（P＜0.01）;除极高和极低盐度组外,其余盐度组Mn-SOD基因的表达量均随着胁迫时间的延长总体上呈先降低再升高再逐步降低的变化趋势,盐度为12.8、16.3、19.8、23.3、30.3、33.8、37.3的各试验组,Mn-SOD基因最大表达量的时间点分别为6、12、24、24、24、24、24h.研究表明,各试验盐度组口虾蛄在72 h内对盐度胁迫的适应总趋势为不适应—最不适应—逐步适应—不适应.

小麦Mn-SOD基因的克隆及其在盐胁迫下的表达分析

为了探索小麦Mn-SOD基因的克隆及表达,根据GenBank上公布的序列(AF092524)设计引物,利用Reverse-transcriptase Polymerase Chain Reaction(RT-PCR)技术克隆了小麦Mn-SOD基因的cDNA全长,并发现该基因主要在根中表达,在其他组织中的表达量比较低。通过不同浓度的NaCl溶液处理,发现该基因在小麦的根中可以被诱导调控表达。随着NaCl浓度的提高,该基因的表达量持续增强;但是NaCl的浓度超过0.20 mol.L-1时,其表达量反而下降。

角果木Mn-SOD基因分离及其在酵母中的功能鉴定

为明确抗氧化系统在植物抵御盐胁迫中的作用,采用RT-PCR的方法分离角果木抗氧化酶相关基因Mn-SOD,采用酶切连接法构建酵母表达载体p YES2/Mn SOD,获得含有重组质粒的酵母菌INVScⅠ(p YES2/Mn SOD)能有效表达Mn SOD特异蛋白带。高浓度盐胁迫筛选结果表明,Mn-SOD基因在酵母中的表达能明显提高酵母菌INVSCⅠ的耐盐性。

低氧-复氧胁迫对鲢抗氧化酶活性及Cu/Zn-SOD和Mn-SOD基因表达的影响

为探究低氧-复氧胁迫对鲢(Hypophthalmichthys molitrix)抗氧化酶活性及Cu/Zn-SOD和Mn-SOD基因表达的影响,对鲢进行急性低氧、持续低氧及复氧实验,进而分析血清、心脏和肝脏中不同抗氧化酶和SODs基因表达的变化特征。结果表明:在急性低氧胁迫后,血清中总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性随着氧浓度的降低均呈上升趋势,但超氧化物歧化酶(SOD)活性呈先升后降的趋势。在持续低氧胁迫后,血清中T-AOC和GSH-PX活性随着低氧胁迫时间的增加显著升高(P<0.05);心脏中SOD活性显著高于常氧水平(P<0.05),但Cu/Zn-SOD和Mn-SOD基因表达在低氧胁迫24h时显著低于常氧水平(P<0.05);肝脏中SOD活性在低氧胁迫24h时显著高于常氧水平(P<0.05),且Cu/Zn-SOD和Mn-SOD基因表达在低氧胁迫24h时也显著高于常氧水平(P<0.05)。复氧后,血清、心脏和肝脏中T-AOC、SOD、CAT和GSHPX活性均能恢复至常氧水平,且心脏和肝脏中Cu/Zn-SOD和Mn-SOD基因表达的也能恢复至常氧水平,但肝脏中Mn-SOD基因表达恢复至常氧水平较在心脏中所需时间更少。因而,鲢可以通过调节抗氧化酶的活性来保护自身免受氧化应激造成的损伤。研究为解析低氧胁迫下鲢抗氧化应激机制提供了基础。

河川沙塘鳢(Odontobutis potamophila)Mn-SOD基因的克隆及表达分析

本研究采用c DNA末端快速扩增(RACE)和实时荧光定量PCR等技术,对河川沙塘鳢(Odontobutis potamophila)的Mn-SOD基因进行了克隆和表达模式分析。结果显示,克隆得到的河川沙塘鳢Mn-SOD基因的c DNA序列全长为1008 bp,包括678 bp的开放阅读框(ORF),15 bp的5'UTR区和315 bp的3'UTR区,并且具有脊椎动物典型的加尾信号AATAAA和31 bp的Poly A尾巴,推测该序列共编码225个氨基酸。该基因包含Sod_Fe_N(28-109)与Sod_Fe_C(116-219)2个保守的结构域,此结构与其他物种极为相似,表明该基因在物种进化中比较保守。与已知物种Mn-SOD进行同源性比对发现,河川沙塘鳢Mn-SOD氨基酸序列与条石鲷(Oplegnathus fasciatus)和线鳢(Channa striata)相似性最高,均为90.3%。采用q RT-PCR技术检测了Mn-SOD基因在河川沙塘鳢8个组织(肾、肝、肌肉、脑、脾、鳃、眼、心脏)和8个发育时期(受精卵期、桑椹胚期、原肠胚期、神经胚期、体节期、口裂期、出膜后1 d、出膜后3 d)的表达情况。在检测的8个组织中都有Mn-SOD基因的表达,肌肉中的表达量最高;胚胎到仔鱼的8个发育时期都有Mn-SOD基因的表达,桑椹胚期表达量最高。在急性NaNO_2胁迫处理后,河川沙塘鳢肝组织Mn-SOD基因的m RNA表达呈先升高后降低的趋势。而鳃组织Mn-SOD基因的m RNA表达呈先降低后升高再降低的趋势。研究表明,Mn-SOD很可能在对抗NaNO_2胁迫引起的氧化损伤中起重要作用,这将为控制河川沙塘鳢的人工育苗及养殖条件提供有价值的参考资料。

maspin、Mn-SOD表达与鼻咽癌组织放疗敏感相关性研究

目的研究maspin及Mn-SOD在放射治疗鼻咽癌中的表达,探讨其在放射治疗鼻咽癌中的意义。方法取60例2006年第1次入院放射治疗鼻咽癌,运用原位杂交方法检测放射治疗鼻咽癌中maspin及Mn-SOD mRNA的表达。结果在放疗敏感及放疗抗拒鼻咽癌中,maspin mRNA中度及强阳性表达率分别为70.00%和42.50%,Mn-SOD mRNA中度及强阳性表达率分别为55.00%和40.00%,差异有统计学意义。在放疗抗拒鼻咽癌中,maspin及Mn-SOD mRNA中度及强阳性表达率均与T分期呈正相关,T3和T4期中表达率分别为63.16%和63.16%,T1和T2期中表达率分别为23.81%和19.05%。在有、无远处转移中,maspin mRNA中度及强阳性的表达率分别为72.73%和31.03%,Mn-SOD mRNA中度及强阳性表达率分别为81.82%和24.14%,差异有统计学意义。结论 maspin、Mn-SOD参与了放射抗拒鼻咽癌的发展。

GRP78和Mn-SOD表达与鼻咽癌组织放疗敏感相关性研究

目的 研究GRP78、Mn-SOD mRNA在放射治疗鼻咽癌中的表达,探讨其在放射治疗鼻咽癌中的意义.方法 取60例2006年1月13日～11月26日第1次入院放射治疗鼻咽癌,运用原位杂交方法检测放射治疗鼻咽癌中GRP78及Mn-SODmRNA的表达.结果 在放疗敏感及放疗抗拒鼻咽癌患者中,GRP78 mRNA中度和强阳性表达率分别为20.00％和47.50％,Mn-SOD mRNA中度和强阳性表达率分别为55.00％和40.00％,差异有统计学意义.在放疗抗拒鼻咽癌患者中,GRP78 mRNA中度和强阳性表达率与TNM分期呈正相关,Ⅲ～Ⅳ期GRP78 mRNA中度和强阳性表达率为58.62％,Ⅰ～Ⅱ期表达率为18.18％,与T分期呈正相关,T3～T4期中表达率为68.42％,T1～T2期中表达率为28.57％;Mn-SOD mRNA中度和强阳性表达率与T分期呈正相关,T3～T4期中表达率为63.16％,T1～T2期中表达率为19.05％;在有、无远处转移中,GRP78 mRNA中度和强阳性表达率分别为72.73％和37.93％,Mn-SOD mRNA中度和强阳性表达率分别为81.82％和24.14％,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 GRP78、Mn-SOD参与了放疗抗拒鼻咽癌的发展.

TNFAIP3、Mn-SOD在放射治疗鼻咽癌中的意义

目的 ：研究肿瘤坏死因子α诱导蛋白3（tumor necrosis factor alpha induced protein 3,TNFAIP3）、锰超氧化物歧化酶（Manganese superoxide dismutase,Mn-SOD）mRNA在放射治疗后鼻咽癌中的表达,探讨其在鼻咽癌放射治疗中的意义。方法 ：运用原位杂交方法检测放射治疗后鼻咽癌中TNFAIP3及Mn-SOD mRNA的表达。结果：TNFAIP3 mRNA中度及强阳性表达率在放疗敏感鼻咽癌中为15.00%,在放疗抗拒鼻咽癌中为45.00%;Mn-SOD mRNA中度及强阳性表达率在放疗敏感鼻咽癌中为55.00%,在放疗抗拒鼻咽癌中为40.00%,差异均有统计学意义（P均〈0.05）。在放疗抗拒鼻咽癌中,TNFAIP3 mRNA中度及强阳性表达率与TNM分期呈正相关,Ⅲ～Ⅳ期表达率为48.28%,Ⅰ～Ⅱ期表达率为36.36%,Mn-SOD mRNA中度及强阳性表达率与T分期呈正相关,T3～T4期中表达率为63.16%,T1～T2期中表达率为19.05%;TNFAIP3 mRNA中度及强阳性表达率在有远处转移的放疗抗拒鼻咽癌中为81.81%,在无远处转移的放疗抗拒鼻咽癌中为31.03%,Mn-SOD mRNA中度及强阳性表达率在有远处转移的放疗抗拒鼻咽癌中为81.82%,在无远处转移的放疗抗拒鼻咽癌中为24.14%,差异均有统计学意义（P均〈0.05）。结论：TNFAIP3参与了放疗抗拒鼻咽癌的发生、发展;Mn-SOD能增加鼻咽癌的放射敏感性,增强放疗鼻咽癌的抗氧化作用。

条斑紫菜锰超氧化物歧化酶基因克隆与序列分析

为研究紫菜抗逆抗病的分子机制,以本实验室建立的条斑紫菜表达序列标签（EST）和全长cDNA富集文库,结合PCR技术,克隆了条斑紫菜编码锰超氧化物歧化酶（Mn-SOD）的cDNA及基因组DNA全长序列,并进行了序列特性相关分析.研究结果表明：该基因cDNA序列全长为958个核苷酸,包含一个完整Mn-SOD基因的ORF,编码224个氨基酸和终止密码子;该基因在基因组中序列长度为1416bp,包含4个外显子和3个内含子,这既不同于高等植物的6个外显子和5个内含子,也不同于人的5个外显子和4个内含子;该基因编码区密码子的平均GC含量为60.9%,第三位密码子的GC含量高达84.9%;序列中包含4个与Mn^2＋的结合位点及一个保守的金属结合结构域,预测分子量为24469.09Da,等电点为5.99;条斑紫菜Mn-SOD与人的相关蛋白具有类似的空间结构,都有6个跨膜α螺旋结构域;由cDNA序列推导的氨基酸序列与莱茵衣藻相似性为57.7%,系统发生分析表明条斑紫菜Mn-SOD与绿藻莱茵衣藻和硅藻海链藻的亲缘关系较近.这是该基因在红藻门中的首次报道.

杧果Mn-MiSOD基因的克隆与表达模式分析

本研究在前期研究基础上,采用改良RACE技术和RT-PCR技术克隆了一个杧果Mn-MiSOD基因的全长序列。生物信息学分析显示,该cDNA全长为794 bp,包含一个690 bp的开放阅读框,编码230个氨基酸,分子量为25.67 kDa,等电点为6.3。表达模式分析显示,该基因在各个组织中均表达,但在成熟叶片和果实中表达水平更高。低温胁迫、盐胁迫和PEG干旱胁迫均诱导该基因的表达。热处理、柠檬酸处理、草酸处理、1-MCP处理以及热处理+1-MCP处理上调Mn-MiSOD基因在果实中的表达水平。实验结果表明,Mn-MiSOD基因可能在杧果逆境胁迫和采后生理方面起重要作用。