MnSOD基因Val16Ala多态性与前列腺癌骨转移患者易感性的关系

目的探讨MnSOD基因Val16Ala多态性与前列腺癌骨转移患者易感性的关系。方法选择94例前列腺癌患者为研究对象。根据患者是否发生骨转移进行分组,将前列腺癌发生骨转移的患者作为骨转移组,将前列腺癌未发生骨转移的患者作为前列腺癌组。统计分析骨转移组与前列腺癌组患者临床资料(年龄、病程、TNM分期、体质量指数等)、两组MnSOD基因Val16Ala遗传平衡检验、MnSOD基因Val16Ala多态性分布以及携带不同基因型前列腺癌骨转移患者临床特征。结果骨转移组40例,前列腺癌54例。两组年龄、病程、TNM分期、体质量指数等临床资料比较,差异无统计学意义(P>0.05)。骨转移组和前列腺癌组MnSOD基因Val/Val、Val/Ala和Ala/Ala基因型实际频数和理论频数分布比较,差异无统计学意义(P>0.05)。骨转移组MnSOD基因Ala/Ala基因型、Ala等位基因频率高于前列腺癌组,Val/Val基因型频率、Val等位基因频率低于前列腺癌组(P<0.05)。MnSOD基因Val16Ala基因型与前列腺癌骨转移患者PSA、年龄以及Gleason评分无关(P>0.05);TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期患者Ala/Ala比例75.00%(18/24)显著高于Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.05)。结论MnSOD基因Val16Ala多态性与前列腺癌骨转移患者易感性存在关系,可能存在促进前列腺癌发生骨转移的作用。

柽柳MnSOD基因的克隆及功能验证

根据已克隆得到的柽柳MnSOD基因片段,采用RACE技术从柽柳中获得MnSOD的cDNA全长序列。该基因全长为1087bp。其中,5'非编码区40bp,3'非编码区333bp,开放读码框(ORF)长699bp,编码232个氨基酸。分子量为26KD,等电点为7.10。该MnSOD氨基酸序列与拟南芥MnSOD序列同源性最高为83%,从12个物种的序列比对可以看出MnSOD氨基酸序列保守性较高。该序列的Genbank注册号为AY573576(基因)和AAS77885(蛋白)。将MnSOD基因与酵母表达载体pYES2连接,并进一步转化到酵母基因组中。对重组酵母INVSc1(pYES2-SOD)和对照INVSc1(pYES2)进行干旱、高温胁迫实验。结果表明:重组酵母的抗干旱、高温能力明显高于对照,证实了来源于柽柳的MnSOD基因具有抗干旱和耐高温能力。

MnSOD 9Ala/Val基因多态性与冠心病的关系

目的探讨锰超氧化物歧化酶9 Ala/Val(MnSOD9 Ala/Val)基因多态性与冠心病、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和锰超氧化物歧化酶(MnSOD)活性以及丙二醛(MDA)浓度的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测262例冠心病患者和100例对照组的MnSOD9 Ala/Val基因多态性的基因型,采用比色法测定血浆T-SOD、MnSOD活性以及MDA浓度。结果与对照组比较,冠心病患者的血浆T-SOD和MnSOD活性[(23.61±16.51)U/ml与(44.01±22.68)U/ml,P<0.001和(21.56±13.11)U/ml与(28.79±8.65)U/ml,P<0.001]明显降低,MDA浓度显著增高[(2.47±0.73),(2.15±0.55)nmol/ml,P<0.01];冠心病患者的MnSOD 9 AA基因型和A等位基因频率较对照组明显增多(64.2%与43.0%,P=0.001和80.0%与67.0%,P=0.014);MnSODAA基因型的MnSOD活牲较VV基因型明显降低[(22.87±13.47)与(32.04±9.19)U/ml,P<0.01)];MnSOD与MDA负相关(r=-0.15,P<0.01)。结论冠心病患者的血浆T-SOD和MnSOD活性明显降低,MDA浓度显著增高;MnSOD 9 Ala/Val基因多态性AA基因型的血浆MnSOD活性降低。

MnSOD过表达对t-BHP诱导间充质干细胞凋亡的保护作用

通过重组慢病毒系统感染人间充质干细胞(mesenchymal stromal cells,MSCs),建立了能够稳定、高效表达锰超氧化物歧化酶(MnSOD)的细胞株MnSOD-MSCs.从胎儿肝脏组织克隆MnSOD基因,构建重组慢病毒MnSOD的表达载体,感染MSCs.根据荧光表达进行流式分选,获得能够继续稳定传代的高表达MnSOD基因的MSCs,RT-PCR和Western blot结果证实细胞株中的MnSOD基因稳定高表达.用不同浓度的第三丁基过氧化氢(t-BHP)处理细胞,通过CCK-8法检测细胞的存活率,SA-β-gal染色观察细胞的衰老情况,流式细胞技术分析细胞的凋亡率,实时荧光定量PCR分析p53和p53正向细胞凋亡调控因子(PUMA)的表达.结果发现,MnSOD过表达可提高细胞的存活率,抑制细胞的凋亡,SA-β-gal染色阳性率降低,且p53和PUMA表达下调.这提示MnSOD过表达对t-BHP诱导的细胞凋亡具有保护作用.

柽柳MnSOD基因(英文)

在环境胁迫下,植物体内活性氧(ROS)的大量积累会对其本身产生毒害作用。SOD酶在清除这些活性氧化酶机制中发挥关键作用。大量研究表明,MnSOD可有效增强转基因植物抵抗氧化胁迫的能力。我们从抗逆性较强的木本植物紫杆柽柳中克隆到一个新的MnSOD基因,并将该全长基因在GenBank上注册,其登录号分别为AY573576(基因序列)和AAS77885(氨基酸序列)。这将为研究木本植物的抗逆机理和该酶在抗逆基因工程中的应用奠定基础。

TNF-αⅠ型受体对小鼠脑血管内皮细胞自由基产生和MnSOD表达的影响

目的探讨TNF-αⅠ型受体(TNFR1)对小鼠脑血管内皮细胞(BVEC)内氧自由基产生及锰超氧化物歧化酶(MnSOD)基因表达的影响。方法体外培养TNFR1基因敲除小鼠脑血管内皮细胞(BVEC/RI)和野生型小鼠脑血管内皮细胞,分别给予5ng/mLTNF-α刺激24h,用荧光显微镜观察细胞内氧自由基的产生,荧光定量PCR法及Western-blot法测定MnSOD基因mRNA和蛋白表达。结果给予TNF-α刺激后,细胞内活性氧(ROS)、锰超氧化物歧化酶基因mRNA及蛋白表达仅在BVEC内明显增高,而在BVEC/RI无明显变化。结论TNF-α可能通过作用于脑血管内皮细胞TNFR1增加细胞内氧自由基产生以及MnSOD基因及蛋白表达,从而介导了细胞氧化应激。

MnSOD模拟化合物通过线粒体途径诱导K562/ADM细胞凋亡

目的:观察锰超氧化物岐化酶模拟化合物(Mn-SODm)对人白血病K562/ADM耐药细胞凋亡诱导作用,并探讨其分子机制.方法:采用AnnexinV/PI双标记和细胞形态学法检测K562/ADM细胞凋亡;流式细胞术(FCM)检测细胞Bcl-2,Bax蛋白表达水平、线粒体跨膜电位(Δψm),细胞色素C(Cytc)含量和释放Caspase-3活性变化.结果:10,50mg/LMnSODm处理K562/ADM细胞后,AnnexinV/PI染色显示凋亡细胞明显增多,凋亡率分别为85.1%,96.8%;光学显微镜和透射电镜观察呈现典型的凋亡形态改变;FCM检测发现Bcl-2蛋白表达下调32%～73%,Bax蛋白表达增高4～10倍;线粒体Δψm释放降低35%～52%;Cytc含量增高28%～75%;Caspase-3活性增强5.1～6.4倍.结论:MnSODmke可抑制Bcl-2蛋白表达,促进Bax蛋白表达,并通过线粒体途径诱发K562/ADM耐药细胞凋亡.

泉州湾可口革囊星虫MnSOD全长cDNA的克隆及其生物信息学分析

根据已克隆得到的泉州湾可口革囊星虫MnSOD基因片段(GenBank登录号为EF 062359),采用5’RACE和3’RACE技术从泉州湾可口革囊星虫体壁中克隆获得MnSOD的cDNA全长序列.该基因全长988bp(GenBank登录号为JX117903),其中开放阅读框(ORF)长681bp,编码226个氨基酸,是不具跨膜区结构的亲水性稳定蛋白;预测分子量为25.15ku,理论等电点pI为5.96,分子式为C1 128H1 722N314O330S6;α螺旋是其蛋白质二级结构的主要元件,在氨基酸多肽链上有4个Mn结合位点,有3个二硫键位点.四聚体三维结构模型预测结果显示该MnSOD含12个α螺旋和3个β折叠构成一个篮子状的活性中心.泉州湾可口革囊星虫MnSOD基因与其他动物的胞质MnSOD在序列组成、结构及活性位点等方面存在高度相似性.

稳定表达MnSOD细胞系的建立及对电离辐射损伤的作用

通过基因转染技术将人ＭｎＳＯＤｃＤＮＡ载体导入中国仓鼠卵巢（ＣＨＯ）细胞，建立了稳定表达有义和反义ＭｎＳＯＤ的细胞系，并用此细胞模型初步探讨了ＭｎＳＯＤ在电离辐射损伤中的作用，从正反两个方面说明了ＭｎＳＯＤ对电离辐射敏感性的影响。

山新杨遗传转化体系的优化及转MnSOD基因植株的鉴定

为建立农杆菌介导的山新杨高效遗传转化体系,对MnSOD基因导入山新杨的遗传转化体系进行了优化,获得的较优转化体系如下：菌液浓度OD600=0.1,浸染2~5 min,共培养时加入200μmol/L乙酰丁香酮,脱菌时加入3 mg/L的AgNO3;对部分抗性植株经PCR及Northern杂交检测,证明MnSOD基因已经整合到山新杨基因组中并能够在转录水平上表达。

肉鸡对不同形态锰源的生物利用率研究

目的 : 研究肉仔鸡对不同形态锰源的相对生物学利用率。方法 : 将 62 4只 1日龄肉公鸡随机分为 1 3组 ,分别饲不添加锰的基础饲粮 (对照组 )或以不同锰化合物添加 60、1 2 0、1 80 mg/ kg锰的试验饲粮 2 1 d。结果 : 肉鸡生长性能各指标和腿病发生率以及肉鸡的跖骨灰锰含量、心肌细胞线粒体中 Mn SOD活性均未受到添加锰源以及锰源与锰水平互作的显著影响 ,但受到添加锰水平的显著影响。肉鸡心肌含锰量和 Mn SOD m RNA水平均未受到添加锰源与锰水平互作的显著影响 ,但受到添加锰源及添加锰水平的显著影响。其中中等和强络合强度有机锰源的生物学利用率明显高于无机硫酸锰和弱络合强度有机锰源。结论

以含锰超氧化物歧化酶基因表达评价肉鸡对不同形态锰源的生物学利用率

目的 通过两个试验研究确定心肌细胞线粒体中MnSOD的基因表达指标是否能更快、更敏感、更恒定地监测出肉仔鸡对不同形态锰源间生物学利用性的差异。方法 试验 (一 )将 5 4 6只商品代 1日龄AA肉公鸡按 4× 4两因子安排的完全随机设计分为 13个处理组 ,每组 6个重复笼 ,分别饲喂不添加锰的食用玉米 -豆粕型基础饲粮 (对照组 )或以无机硫酸锰、弱络合强度的蛋氨酸锰E、中等络合强度的复合氨基酸锰B及强络合强度的复合氨基酸锰C形式添加 0、6 0、12 0、180mg kg锰的试验饲粮 ,试验期 2 1天。 2 1日龄每个重复笼选取 3只与平均体重相近的鸡屠宰 ,立即取出心脏、左侧腿跖骨 ,分析组织锰浓度、心肌细胞线粒体中MnSOD活性及其基因表达。试验 (二 )将 2 70只商品代 1日龄AA肉公鸡随机分为 5个处理组 ,每组 6个重复笼 ,分别饲喂不添加锰的食用玉米 -豆粕型基础饲粮 (对照组 )及分别在对照组饲粮中添加 12 0mg kg锰的 4种锰源试验饲粮。分别于第 7、14、2 1日龄用与试验一相同的方法进行屠宰、组织样品的采集与制备及分析。结果 试验 (一 )中 2 1日龄肉鸡的跖骨灰锰含量、心肌锰含量和心肌细胞线粒体中MnSOD活性均受到饲粮添加锰水平的显著影响 (P =0 0 0 0 1) ,根据这三项指标与饲粮添加锰进食量的多元线性回?

仿刺参超氧化物歧化酶基因cDNA全序列的克隆及其特征分析

以仿刺参Apostichopus japonicus为材料,利用cDNA末端快速扩增(RACE)方法首次得到仿刺参MnSOD的全长cDNA。该全长cDNA大小为955bp,其中5′端非编码区67bp,3′端非编码区216bp,开放阅读框(ORF)672bp,在3′端有多聚腺苷酸信号序列ATTTA,并有polyA加尾,符合有效翻译的基因全长cDNA的特征。MnSOD全长cDNA可编码223个氨基酸的前体蛋白,预测蛋白分子质量为24.64kD,理论等电点是6.66,为亲水性蛋白。该蛋白序列没有信号肽和跨膜结构,仅有一段线粒体导肽。其二级结构主要以α-螺旋为主,无规则卷曲和延伸链构成了蛋白中量最大的结构元件,不含β-折叠。仿刺参SOD的氨基酸序列与目前已报道的其他物种如人、牛、斑马鱼、原鸡、非洲爪蟾、中国对虾、皱纹盘鲍、海湾扇贝、果蝇等的MnSOD氨基酸序列进行序列比对的结果表明,相似性均在61%～69%之间,说明该基因在各物种间具有一定的保守性。该段氨基酸序列无N-糖基化位点,含有3个蛋白激酶C磷酸化位点,1个酪氨酸蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,5个肉豆蔻酰基化位点,还发现了1个SOD家族的特征肽段DVWEHAYY。对磷酸化位点分析发现,有1个丝氨酸Ser,3个苏氨酸Tyr可能成为蛋白激酶磷酸化位点。二硫键分析表明,SOD含有3个半胱氨酸Cys,形成1个二硫键,连接着第17位和第107位的Cys。仿刺参MnSOD全长cDNA的克隆为更好地理解生物体内防御系统的催化O2-发生歧化反应、消除活性氧、维持机体活性氧代谢的平衡提供了理论基础。

人锰超氧化物歧化酶基因的克隆及高表达

为获得高表达人锰超氧化物歧化酶(MnSOD)的工程菌。从肿瘤组织中提取总RNA ,利用逆转录聚合酶链反应扩增人MnSOD的cDNA ,将克隆的基因片段插入表达载体pET2 8a(+ )内的NcoI/EcoRI位点 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3 ) ,用PCR及SDS -PAGE的方法筛选高表达人MnSOD的工程菌。结果构建成功高表达人MnSOD的工程菌 ,表达的人MnSOD相对分子质量约为 2 2 0 0 0 ,表达量约占菌体蛋白的 3 0 %。为大量制备人MnSOD和进一步的应用研究奠定了基础。

锰超氧化物歧化酶过表达对H_(2)O_(2)诱导PC12细胞凋亡的影响

目的 揭示锰超氧化物歧化酶（MnSOD）在H2O2诱导PC12细胞凋亡中的作用及机制。方法 转染人正义和反义MnSOD基因的PC12细胞，用50 (mol H2O2攻击已转染的细胞系，并采用MTT法、流式细胞术和 Hoechst染色方法研究H2O2的细胞毒作用。结果 转染正义MnSOD的细胞比原细胞的MnSOD酶活性提高1.3倍，而转染反义MnSOD细胞的酶活性降低67%。结论 H2O2对PC12细胞毒作用是通过诱发PC12细胞凋亡作用来实现的；MnSOD具有抑制H2O2诱导PC12细胞凋亡作用，涉及线粒体的损伤，导致氧化还原失衡继而诱发细胞凋亡。

锰超氧化物歧化酶基因V(16)A多态性的种族差异及与糖尿病肾病的关系

目的:探讨锰超氧化物歧化酶(MnSOD)基因V(16)A多态性的种族差异及与糖尿病肾病(DN)的关系.方法:在中国昆明地区汉族人中对187例2型糖尿病患者(其中正常白蛋白尿即DN0组50例,微量白蛋白尿DN1组64例,大量白蛋白尿即DN2组73例)和97例健康对照者的MnSOD基因V(16)A多态性进行检测,并比较不同种族中该位点基因型和等位基因分布及频率.结果:(1)中国昆明地区汉族人中存在MnSOD基因V(16)A多态性;(2)与日本人群、俄罗斯人群相比其基因型和等位基因频都存在显著性差异,中国和日本人群以VV型为主,俄罗斯人群以AA和AV型为主;(3)DN组(DN1+DN2)VV基因型和V等位基因频率显著高于不伴肾病的DN0组(分别为χ2=6·42和5·08,P<0·05),Logistic回归分析表明VV基因型相对于VA+AA基因型是DN发生的遗传危险因素.结论:MnSODV(16)A多态性分布存在种族异质性,在中国昆明汉族人2型糖尿病患者中MnSOD基因V(16)A多态性与DN发生相关.不同种族人群MnSODV(16)A多态性分布的差异,可能是亚裔人群比白种人群2型糖尿病患者DN发病率高的原因之一.

PCR-RFLP方法检测锰超氧化物歧化酶基因V(16)A多态性的实验条件研究

目的:确定PCR-RFLP技术检测锰超氧化物歧化酶基因(MnSOD)V(16)A多态性的最适实验条件.方法:对影响MnSOD基因PCR反应以及用限制性内切酶BsawI切割主要因素进行了系统研究.结果:最适退火温度为55℃;最适引物浓度为0.25μmol/L;最适Mg2+浓度为1.5 mmol/L;最适dNTP浓度为0.20 mmol/L;以0.6 U为最适Taq酶量.酶切体系为15μL体系中加8μL产物用2 U的酶消化,为后续研究奠定了实验基础.

锰超氧化物歧化酶基因Val(16)Ala(rs4880)多态性与糖尿病视网膜病变发生风险相关性的Meta分析

目的探讨锰超氧化物歧化酶(MnSOD)基因Val(16)Ala(rs4880)的多态性是否与糖尿病视网膜病变(DR)的发生风险有关。方法计算机检索PubMed、EMBASE和Cochrane library等外文数据库以及中国知网、维普和万方等中文数据库。两位评价员按照纳入与排除标准独立筛选文献、提取资料和评价纳入研究的方法学质量。本研究采用Stata14.0软件进行Meta分析;使用敏感性分析衡量研究结果的稳健性;使用Egger线性回归和Begg漏斗图来分析发表偏倚程度;通过亚组分析探讨异质性来源。结果本研究纳入的10篇文献中病例组1 500例和对照组1 330例。Meta分析结果显示,MnSOD基因Val(16)Ala(rs4880)多态性与加性模型(OR=0.76,P=0.02)和隐性模型(OR=0.60,P=0.04)下DR发生风险相关。亚组分析结果表明,在亚洲人种中,MnSOD基因Val(16)Ala(rs4880)多态性与DR发病风险有关(P=0.03,P<0.01);基因分型检测方法可能是MnSOD基因Val(16)Ala(rs4880)多态性与DR之间关系异质性的来源。漏斗图及Egger线性回归结果表明,在加性模型(P=0.59)、显性模型(P=1.00)及隐性模型(P=0.99)中纳入的10篇文献均无明显偏倚。结论本研究发现,在亚洲人群中,MnSOD基因Val(16)Ala(rs4880)多态性是DR发生的危险因素,因此临床应重点关注这些易感基因的携带者。

肉鸡心肌细胞中核转录因子Sp-1和AP-2及其结合序列研究

试验采用21日龄肉鸡的心肌组织作为研究对象用于抽提核蛋白,用蛋白质印记法和电泳迁移率变动分析法研究心肌细胞中与MnSOD基因转录相关的Sp-1和AP-2核转录因子及其结合序列。结果表明,在肉鸡心肌细胞的核蛋白中存有与MnSOD基因转录调控相关的核转录因子Sp-1和AP-2,且能与MnSOD基因启动子区特异性结合位点结合,其中在-79～-58有一个与人和大鼠相同的Sp-1结合位点核心序列(5'-GGGGCGGG-3'),在鸡MnSOD基因启动子区中AP-2结合位点核心序列与现有文献中报道的人和大鼠以及一些病毒AP-2结合位点核心序列不同,分别为位于-34～-14(5'-GGCGCAGGC-3')和-338～-319(5'-CCCAAGGTC-3')。上述结果提示,肉鸡心肌细胞中MnSOD基因的转录调控可能与核转录因子Sp-1和AP-2与MnSOD基因启动子区的特异性结合密切相关。

三种肿瘤易感性相关基因在韩国人中的多态性分析

目的调查疾病易感性相关的髓过氧化酶(MPO)、人类8-羟基鸟嘌呤糖苷酶(hOGG1)、锰超氧化物歧化酶(MnSOD)基因多态性在韩国人群中的分布状况。方法采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分别分析300名韩国健康男女大学生的MPO基因启动子区-463bp位点、hOGG1基因第7外显子第1245位碱基C/G、MnSOD基因1183位点T/C的单核苷酸多态性—M-4,计算基因型和基因频率。结果 MPO基因型频率为G/G型80.3%、G/A型19.0%、A/A型0.7%,基因频率为G 0.898、A 0.102。hOGG1基因型频率为Ser/Ser型24.7%、Ser/Cys型45.0%、Cys/Cys型30.3%,基因频率为Ser 0.472、Cys 0.528。MnSOD基因型频率为Val/Val型77.0%、Val/Ala型21.3%、Ala/Ala型1.7%,基因频率为Val 0.877、Ala 0.123。结论韩国人的疾病易感相关基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律且与我国人口较为接近。