临床高毒力致泻性沙门氏菌快速检测方法的初步建立

目的沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌,对公众的生命健康和财产安全造成重大危害。基于此,我们拟建立并验证一种基于多重PCR结合分子标记探针的检测方法用于快速筛查临床高毒力致泻性沙门氏菌,旨在指导临床快速甄别由高毒力沙门氏菌引起的感染,及时采取治疗措施,降低患者负担。方法对沙门氏菌基因组生物信息学分析后选择沙门氏菌中高保守的invA、常见毒力因子pagC基因及肠毒素编码基因stn作为检测靶点,每个靶点分别设计3套备选引物和探针,进行梯度PCR筛选得到扩增效率最佳的引物对和探针(invAF、invAR、invAP,pagCF、pagCR、pagCP,stnF、stnR、stnP)。收集40株分离自临床患者标本的沙门氏菌进行灵敏度分析,选择沙门氏菌、大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌、产期肠杆菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、变形杆菌、鲍曼不动杆菌、粘质沙雷菌、嗜麦芽窄食单胞菌共12种临床常见细菌用于特异性验证。采用磁珠法抽提基因组DNA,将浓度稀释至10-2μg/ml用于特异性验证,将沙门氏菌基因组DNA进行倍比稀释,用于灵敏度验证。结果经验证,invA、pagC、stn作为多重PCR的3个检测靶标具有良好的检测性能,其中以invA为沙门氏菌菌种鉴定靶标其检测限可达为1×10^(-6)μg/ml(目标DNA浓度),特异性100%,以pagC、stn为区分高毒力沙门氏菌鉴定靶标其检测限分别可达为1×10^(-7)μg/ml、1×10^(-8)μg/ml(目标DNA浓度)。三个检测靶标分别标记不同检测波长的激发荧光基团,相互间无明显干扰。结论本研究建立的一种新的沙门氏菌检测方法具有较高灵敏度和特异性,能够快速准确鉴定患者是否存在致泻性沙门氏菌感染,为临床快速诊断沙门氏菌感染提供一种更加高效便捷的手段,该方法也可以对所感染沙门氏菌的毒力大小进行判断评估,为临床治疗方案的制定提供新的支撑。

针对代谢标志物的分子探针设计与合成

肿瘤患者的早期准确诊断非常重要,发展简单方便及费用低的诊断新方法具有极其重要的现实意义。大多数疾病的生物标志物都来自血清中的代谢物;但是血清中成分十分复杂,肿瘤代谢物含量低。关键科学问题在于如何,利用高敏感性和特异性的分子探针实现对实现在肿瘤发展初期血清标志物的诊断,由此大大提高肿瘤早期诊断率。该年度在改善荧光探针识别血清标志物的特异性、荧光探针设计新概念、新方法,以及新型荧光传感材料创制三个方面开展了创新研究。取得了一系列具有重要影响力的原创性研究成果。其中针对新型血清肿瘤标志物α-酮戊二酸、肿瘤细胞高尔基体环氧化酶标志物、溶酶体一氧化氮和粘度等特异性探针均为国际首创。对于肿瘤早期诊断以及分子、细胞水平研究肿瘤相关过程提供了重要工具。所提出的荧光探针设计新概念、新方法对于进一步创制高灵敏、高特异性、高稳定性荧光探针奠定基础;构建了基于染料和共聚型高分子、纳米颗粒的新型多功能荧光传感材料,不仅改善染料的荧光性质,而且提高了对肿瘤靶标的特异性识别能力,将进一步促进对肿瘤诊断的准确性,并且可能具备在诊断的同时发挥治疗肿瘤的潜能。

靶向肿瘤微环境标志物及其分子影像学应用进展

肿瘤微环境由肿瘤相关成纤维细胞、免疫细胞、肿瘤相关巨噬细胞和细胞外基质等构成,对肿瘤的发生和发展均具有至关重要的作用。肿瘤微环境和肿瘤间质可以作为潜在的靶点,准确发现特异的肿瘤靶点或标志物,与分子影像学技术相结合,在细胞分子水平对肿瘤的诊断及治疗具有重要意义,本文总结相关靶向肿瘤微环境标志物及其分子影像学的应用进展。

^(18)F标记吲哚苯醌衍生物分子探针的合成及正电子发射型计算机断层显像

基于2-苯基萘型结构,以2-甲基吲哚和四氯苯醌、1-二甲基胺-2-丙炔和碘甲基硼酸频哪醇酯作为起始底物,经5步反应合成了一种吲哚苯醌类分子探针的前体,其结构经1 H NMR,^(13)C NMR和HR-MS(ESI)表征。对该前体进行放射性标记,再经高效液相色谱分析纯化,最后将探针注入小鼠体内进行正电子发射型计算机断层显像(PET)。结果表明:探针分子进入小鼠体内后,在膀胱、胆和肠道聚集,随后经肠道和膀胱代谢排出体外。

胃癌新型PET分子探针的研发进展

胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,其在生物学和遗传学上具有显著的肿瘤异质性。PET是一种非侵入性的、实时在体的检查方法。使用PET显像进行早期检测、制定治疗计划和疗效监测有助于辅助诊断、预后,有利于提高胃癌患者5年生存率,并帮助临床医师诊断、鉴别其异质性,从而有针对性地选择个体化的治疗方案。因此,以PET显像为应用基础的胃癌特异性探针研究得到了研究者的高度重视。笔者总结了胃癌特异性靶点及其对应分子探针的热点研究,并阐述和分析了其发展历程及研究成果,希望为胃癌新型PET显像探针的研发提供参考和指导。

巴氏蘑菇微卫星序列的分离及其对Co^60辐射诱变菌株的鉴别

根据链霉素磁珠和生物素特异结合的特性,用生物素标记的二聚核苷酸重复序列探针从巴氏蘑菇的基因组中分离微卫星序列。将结合于链霉素磁珠上的标记探针同两端连接已知序列人工接头的巴氏蘑菇DNA酶切片段杂交。洗脱未杂交DNA片段后,用磁珠富集的片段建立微卫星文库。挑取522个菌落用对应重复序列为引物进行PCR筛选,得到48个阳性克隆,经测序有32个菌落含微卫星序列。微卫星富集效率为阳性克隆数的67%,总克隆数的6%。除去重复或无效的微卫星序列,在设计出的12对用于鉴别85个巴氏蘑菇的Co60辐射变异株微卫星引物中,有4对引物总共扩增出明显的变异菌株17个。证明有些微卫星位点可用于巴氏蘑菇辐射变异品种的指纹筛选与鉴别。