A new cucurbitane triterpenoid from Momordica charantia

One new cucurbitane-type triterpenoid saponin, 5β,19-epoxycucurbita-6,23-diene-3β,19,25-triol-3-O-β-D-allopyranoside （1）,named momordicoside P was isolated from the fresh fruits ofMomordica charantia. The structure of the saponin was elucidated by spectral methods, including 2D-NMR spectra.

苦瓜水提物对小鼠肝微粒体CYP3A及肠道P-糖蛋白的影响

目的研究苦瓜水提物对小鼠肝脏细胞色素氧化酶P450(CYP450)中CYP3A及肠道药物转运体P-糖蛋白(P-gp)的影响,以推测苦瓜水提物对人CYP3A及P-gp的影响。方法小鼠经口投与苦瓜水提物粉末低、高剂量(10,50 mg/kg,2次/d)1周,取肝脏以差速离心法分离肝微粒体,用Bradford法定量蛋白;以红霉素法和氨基比林法定量CYP3A的活性。小鼠经口投与苦瓜水提物粉末低、中、高剂量(10,50,250 mg/kg)1次,以扑热息痛(25 mg/kg)为测定P-gp活性的探针药,通过分光光度法测定血清中扑热息痛浓度来推测苦瓜水提物对肠道P-gp的影响。结果与蒸馏水对照组相比,苦瓜水提物高剂量对小鼠肝CYP3A具有明显的抑制作用(P<0.05)。苦瓜水提物250 mg/kg灌胃后30 min,可使血清中扑热息痛的浓度明显升高(P<0.05),说明其显著抑制了肠道P-gp。结论苦瓜水提物在大剂量服用时可抑制小鼠肝脏CYP3A的活性及肠道P-gp的活性。

不同苦瓜品种降糖多肽-P粗提物含量的比较

为了研究不同品种的苦瓜中降糖多肽-P含量的基本特性,采用福林酚法测定了14种不同品种苦瓜果实和种仁中降糖多肽-P粗提物的含量。结果表明:不同品种苦瓜果实中降糖多肽-粗提物含量不同,含量最高的品种为189-4,含量最低的品种为221-2,前者含量约为后者的7倍,所有品种降糖多肽-P粗提物含量平均值为0.541 mg/g FW;不同品种苦瓜种仁中降糖多肽-P粗提物含量也不同,含量最高的品种为226,含量最低的品种为175,前者含量约为后者的15倍,所有品种降糖多肽-P粗提物含量平均值为40.42 mg/g FW。

苦瓜afp1基因的克隆与序列分析

通过异硫氰酸胍法提取苦瓜总RNA,采用一步RT-PCR方法获得394bp苦瓜afp1基因序列。应用DNA star软件进行序列分析,表明这个片段包含了基因完整的编码。Blast分析表明,它与荠菜的防卫基因有很高的同源性,序列一致率为87%。该试验结果将为分子植物抗病育种提供基因材料。

苦瓜植株不同组织中降糖血糖多肽活性成分的RT-PCR分析

目的研究苦瓜降糖活性多肽P在苦瓜不同组织器官中的分布。方法用改良Trizol一步法提取苦瓜不同组织的总RNA,采用RT-PCR方法扩增降糖多肽P基因,分析其表达。结果成熟果实的种子和果肉中均可明显检测到降糖多肽P基因的表达,其他组织中则未能检测出。结论苦瓜降糖多肽P活性成分主要在苦瓜果肉和种子中表达,这2种组织是苦瓜降血糖作用的主要药用部位。

体外拼装苦瓜降糖多肽P基因

目的 以苦瓜降糖多肽P基因为例,探讨用寡核苷酸片段体外拼装基因的方法。方法根据已知苦瓜降糖多肽P的蛋白序列和大肠杆菌的密码子偏爱性,反向翻译出可在大肠杆菌内表达的苦瓜降糖多肽P基因,设计24条40 bp的降糖多肽P基因寡核苷酸片段引物,通过PCR进行寡核苷酸片段的扩增和拼装。将拼装好的多肽P基因的cDNA与pET-32a载体连接后,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Ni2+-NTA纯化后检测其对四氧嘧啶引起的糖尿病小鼠的降糖活性。结果苦瓜降糖多肽P基因经2轮PCR扩增后,即可见目的 条带;经第3轮PCR扩增,即可见清晰的目的 条带。经测序鉴定,与设计的降糖多肽P基因序列完全一致。重组蛋白在E.coli BL21(DE3)中获得可溶性表达,且可与鼠抗His单抗发生特异性反应。纯化的融合蛋白纯度达90%以上,产量为10 mg/L,其对四氧嘧啶引起的糖尿病小鼠具有降糖活性。结论体外基因拼装法是一种有效获取目的 基因的方法,可进行密码子偏爱性设计,在宿主系统中有效表达目的 基因。