苦瓜种子发育过程中水溶性蛋白组分的研究

选取在果型和果色上具典型性的4个苦瓜品种为材料，对不同发育时期种子的可溶性蛋白提取物进行了SDS-PAGE和IEF分析．结果表明，所有品种苦瓜种子均含有丰富的可溶性蛋白（14.4～116.0kD），其中以分子量为27．6，47．4和43．4kD的蛋白含量较高，有3种蛋白的分子量在30kD左右，不同品种之间在小分子量蛋白的表达上有一定差异；所有品种种子均含有4种以上的碱性蛋白，但不同品种之间碱性蛋白的含量和积累规律存在一定的差异．

苦瓜籽蛋白的PEG/(NH_4)_2SO_4双水相分离及抑菌作用的研究

优化试验条件影响因素,建立PEG/(NH4)2SO4双水相系统,确定出分离苦瓜籽蛋白的最适PEG6000和(NH4)2SO4质量分数分别是22%、25%,分配系数为0.089,回收率为96%。双水相分离的苦瓜籽蛋白经SDS-PAGE凝胶电泳显示,主要蛋白质是50 KD4、3 KD和10 KD亚基结合形成的多聚体12S(327 KD)球蛋白,还原条件下出现诸多小于35 kD的蛋白组分,表明蛋白质亚基是通过二硫键结合。抑菌试验显示苦瓜籽蛋白对受试细菌菌和真菌产生明显的抑菌活性,其MIC远低于苯甲酸钠,而且在不同盐离子浓度、温度、pH及紫外线等因素处理时,均具有一定的稳定性。此外试验还表明苦瓜籽蛋白也具有较强的清除羟自由基能力和总抗氧化能力。

苦瓜子蛋白的体外抗氧化活性研究

测定了苦瓜子蛋白提取过程中不同提取物的体外抗氧化活性,从而获得不同目标活性的蛋白组分.结果表明,90%饱和度的硫酸铵沉淀蛋白的柱纯化组分抗氧化活性较强,30%的次之,60%的最弱,三种饱和度硫酸铵沉淀纯化得到的苦瓜子蛋白在不同抗氧化体系中存在抗氧化活性差异.

苦瓜种子蛋白质的研究

用SDS－PAGE分析表明：苦瓜种子主要含有57KD和49KD蛋白组分，它们由诸多低分子量（LMW＜47KD）蛋白亚基通过双硫桥结合，是药用价值高，营养丰富的蛋白资源。

苦瓜种子蛋白的双水相提取及抑菌性研究

筛选优化了聚乙二醇(PEG)/硫酸铵双水相的质量分数、分配系数、回收率等影响因素,得到了苦瓜种子蛋白的最佳萃取条件:在26%硫酸铵、22%聚乙二醇条件下,分配系数最小,达0.089,回收率为96%,得到分子量为35.6 kD和12.3kD的苦瓜纯化蛋白。抑菌试验表明,苦瓜种子蛋白对细菌、真菌均有不同程度的抑制作用,且纯化蛋白的抑菌性大于粗提蛋白。

不同基因型苦瓜种子发育过程中核糖体失活蛋白的累积变化

【目的】研究不同基因型苦瓜核糖体失活蛋白(RIPs)在种子发育过程中的累积规律,为苦瓜RIPs的进一步利用提供理论依据。【方法】选取3个不同组群苦瓜品种为材料,对不同发育时期种子的盐溶性蛋白提取物进行SDS-PAGE分析。【结果】3个苦瓜品种种子的盐溶性蛋白组分存在明显差异,其中以分子量为20.0～29.0kDa的蛋白质差异最为明显;29.0kDa分子量的蛋白质在长大果型材料MC1及密瘤小果型材料MC11中的表达量比野生型材料MC18略高。3个苦瓜材料的29.0kDa蛋白质在种子不同发育时期的表达量无明显差异,然而,在不同栽培季节其表达量差异显著。【结论】不同类型苦瓜材料种子中的RIPs含量变化在种子发育不同时期没有明显差异,而成熟种子具有产量高、易采收和贮藏等优点,是作为RIPs生产原材料采收的适宜时期;由于不同类型苦瓜的种子产量潜力有较大差异,因此,选择RIPs含量高且种子产量高的材料作为RIPs生产的品种较为适宜。

苦瓜子蛋白分离纯化的研究

把苦瓜子粉碎后用50 mmol/L乙酸抽提、硫酸铵沉淀,经透析得到蛋白粗提液,然后用考玛斯亮蓝G-250法测蛋白质含量为16.517μg/g;SDS-PAGE分析表明,苦瓜种子含有3种蛋白组分,相对分子质量分别为29.5,22.0和9.6 kDa,其中分子量为29.5 kDa的含量最多,9.6 kDa的含量次之,22.0 kDa的含量最少。再对粗提液过Sephadex G-100凝胶柱进一步纯化得到4个主峰,吸光度分别为0.62,0.28,0.36,0.42;经SDS-PAGE检测,得知第1,2峰分子量均为29.5 kDa。

苦瓜蛋白构成及其对种子萌发和菌类抑制作用的研究

凝胶电泳分析表明 ,苦瓜种子含有多种蛋白组分 ,其中 57KD和 4 9KD蛋白由多个或多种亚基以二硫键结合形成。苦瓜蛋白显著抑制真菌和细菌的生长 。

苦瓜籽蛋白碱溶酸沉体系的选择研究

采用碱溶酸沉方法从苦瓜籽中提取苦瓜籽蛋白,考察了NH3·H2O、NaOH 2种碱溶试剂及3种酸沉试剂H2SO4、柠檬酸和H3PO4对苦瓜籽蛋白的提取效果,确定较佳的提取苦瓜籽蛋白碱溶酸沉体系。试验结果表明:苦瓜籽蛋白酸沉最佳pH值为4,提取苦瓜籽蛋白较佳的碱溶酸沉体系为NaOH-柠檬酸体系;通过与专利报道的NH3·H2O-H2SO4体系对比,得出NH3·H2OH2SO4体系苦瓜籽蛋白活性成分质量较NaOH-柠檬酸体系的低23%。

苦瓜的营养与利用研究

分析不同品种苦瓜成分表明,苦瓜中含有丰富多样的营养成分—蛋白质、糖、维生素C、钙、镁、磷、铁等,具有独特的多功能药理效应。苦瓜种子蛋白是多亚基聚合体,显示出多种多样性,将为苦瓜遗传选育提供有效的分子标记。

鲜切梨保鲜剂的研究

柠檬酸具有很好的抑制鲜切梨褐变的效果,而苦瓜籽蛋白的抑菌效果非常明显。本论文采用正交实验结合两者优点制得的保鲜剂的最佳工艺参数为:V(苦瓜籽蛋白液):V(柠檬酸溶液)=1:1,其中柠檬酸溶液为1.0%,蛋白液浓度为100mg/mL,最佳浸泡时间为9min,浸泡处理的鲜切梨于8±0.5℃贮藏12d后仍可保持较好的品质,抗褐变和抑菌效果较好。

苦瓜籽核糖体失活蛋白MAP30的纯化与性质研究

采用丙酮分级沉淀、Superdex 75层析和Blue Sepharose CL-6B层析,从苦瓜籽中获得核糖体失活蛋白MAP30。纯化的MAP30经PAGE、SDS-PAGE、IEF和Periodate-Schiff分析均为单一蛋白着色带或单一糖蛋白着色带,根据SDS-PAGE计算其相对分子量为30kDa,经IEF-PAGE计算其pI为9.0,采用硫酸-苯酚法测得其含糖量为1.05%。N端测序结果为Asp-Val-Asn-Phe-Asp-LeuSer-。光谱学研究表明:最大紫外吸收峰为280nm,以278nm波长光激发时,该蛋白具有304nm荧光发射峰和316nm副峰,以295nm波长光激发时,该蛋白的最大荧光发射峰在317nm。体外试验表明其对小鼠黑色素细胞瘤B16细胞具有明显抑制作用,而对完整细胞毒性极小。

苦瓜籽核糖体失活蛋白的基本性质研究

经硫酸铵分级沉淀、SP-Sepharose FF离子交换层析、Blue Sepharose CL-6B亲和层析和Superdex75分子筛层析从苦瓜籽中纯化出苦瓜核糖体失活蛋白．纯化的蛋白经IEF、梯度PAGE、SDS-PAGE和Periodate—Schiff分析均为单一蛋白着色带或单一糖蛋白着色带．根据SDS—PAGE计算其相对分子量为3．0×10^4Da，IEF显示其pI为9．0．N端测序结果为Asp—Val—Ser—Phe-Arg．采用傅里叶变换红外光谱（FTIR）和圆二色谱（CD谱）对纯化RIP的二级结构进行定量分析，结果显示其α-螺旋和β-折叠含量均在30％以上．