苦瓜蛋白对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化形成及小肠胆固醇转运相关基因表达的影响

目的探讨苦瓜蛋白对载脂蛋白E基因敲除小鼠小肠胆固醇转运相关基因表达的影响,阐明苦瓜蛋白在动脉粥样硬化发生中的作用机制。方法选用36只6周龄的雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠,随机分为普食组(对照组)、高脂高胆固醇饲料组(高脂组)、高脂高胆固醇+苦瓜蛋白组(苦瓜蛋白组)。喂养12周后处死,比较各组血脂水平,苏丹Ⅳ染色观察全主动脉粥样硬化病变程度,主动脉窦冰冻切片油红O染色检测脂质沉积,逆转录聚合酶链反应和Western Blot分别检测ATP结合盒转运体G5和G8的mRNA和蛋白表达。结果高脂组总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇的水平比对照组明显升高(P<0.05),而苦瓜蛋白组总胆固醇(14.52±1.06 mmol/L比18.21±1.95 mmol/L)、甘油三酯(0.51±0.11 mmol/L比0.92±0.07 mmol/L)和低密度脂蛋白胆固醇(4.12 mmol/L±0.95比7.16±0.98 mmol/L)水平显著低于高脂组(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇的水平与高脂组比差异无显著性(P>0.05)。苦瓜蛋白组主动脉斑块面积(31.2%±3.6%比69.6%±4.8%)和主动脉窦脂质面积(26.02±3.07μ?比45.23±11.2μ?)比高脂组显著减少。苦瓜蛋白组小肠中ATP结合盒转运体G5和G8的mRNA和蛋白表达都比高脂组明显升高(P<0.05)。结论苦瓜蛋白可通过增加载脂蛋白E基因敲除小鼠小肠中ATP结合盒转运体G5和G8的表达,降低血脂水平,减少主动脉斑块及主动脉窦脂质沉积。

苦瓜蛋白MD28对Caco-2细胞胆固醇排出及ABCG5和ABCG8表达的影响

目的探讨苦瓜蛋白MD28对Caco-2细胞胆固醇排出及其相关基因ABCG5和ABCG8表达的影响,明确苦瓜蛋白MD28的降胆固醇机制。方法Caco-2细胞分为四组:Caco-2细胞对照组、Caco-2细胞模型组、Caco-2细胞模型+苦瓜蛋白MD28处理组和Caco-2细胞+苦瓜蛋白MD28处理组。加相应的处理因素处理后,高效液相色谱法测量细胞内胆固醇含量,油红O染色观察细胞内脂滴,逆转录聚合酶链反应和Western blotting分别检测细胞中ABCG5和ABCG8的mRNA和蛋白表达。结果高效液相色谱测定结果显示,与Caco-2细胞模型组比较,苦瓜蛋白MD28处理的细胞中胆固醇含量明显降低(P<0.05或P<0.01)。油红O染色显示,加苦瓜蛋白MD28处理组脂质沉积均相应低于没有加苦瓜蛋白MD28处理组。Caco-2细胞模型组ABCG5和ABCG8的mRNA和蛋白水平均有轻微上调,但与Caco-2细胞对照组比较无显著性差异,而经苦瓜蛋白MD28处理后,ABCG5和ABCG8明显上调(P<0.01),且与Caco-2细胞模型组比较差异显著(P<0.05)。结论苦瓜蛋白MD28能够显著上调人结肠腺癌细胞Caco-2中ABCG5和ABCG8的表达,其降低胞内胆固醇作用与增强胞内胆固醇的排出有关。

苦瓜蛋白对柯萨奇3型病毒感染大鼠心肌细胞的保护作用

目的在病毒性心肌炎心肌细胞模型上观察苦瓜蛋白对柯萨奇3型病毒(CVB3)感染SD大鼠心肌细胞的保护作用及其机制。方法体外原代培养SD大鼠心肌细胞,以CVB3感染培养大鼠心肌细胞,复制病毒性心肌炎心肌细胞模型,分别测定心肌细胞搏动百分比(PBC)、半数有效率(ED)、细胞病变(CPE)、心肌酶谱、半感染致死量(TC ID50),分析其对心肌细胞的保护作用。结果苦瓜蛋白的ED值为0.045 mg/mL,80、40、20、10μg/mL苦瓜蛋白可显著提高心肌细胞PBC、降低病毒的复制,80、40μg/mL苦瓜蛋白可减少CPE,降低心肌酶水平。结论苦瓜蛋白对感染CVB3的心肌细胞有较强的保护作用。