粘附分子CD_(54)、CD_(44)在苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡中的作用

目的观察苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡时细胞粘附分子(CD54、CD44)表达水平的变化,探讨粘附分子在苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡中的作用。方法以一定浓度的苦瓜蛋白处理K562细胞;CCK-8试剂盒检测其对细胞生长的影响;流式细细术(An-nexinⅤ)、透射电镜等方法检测细胞凋亡;同时应用流式细细术检测粘附分子(CD54、CD44)蛋白表达水平的变化。结果苦瓜蛋白对K562细胞生长具有明显的抑制作用;流式细胞术及形态学观察(电镜)证实一定作用浓度的苦瓜蛋白可诱导K562细胞发生明显的细胞凋亡;苦瓜蛋白处理组K562细胞中CD54、CD44表达分别为18.62%和1.32%,对照组分别为0.25%和0.17%,分别上调了18.37%、1.15%。结论苦瓜蛋白引起K562细胞凋亡的过程中,粘附分子CD54表达上调;CD54表达上调可能是苦瓜蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的机制之一,其机制可能涉及细胞粘附依赖性细胞凋亡。

苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡及其对Bcl-2、PCNA蛋白表达的影响

目的观察苦瓜蛋白是否具有诱导K562细胞凋亡的生物学活性,探讨苦瓜蛋白对K562细胞Bcl-2及PCNA表达水平的影响及其作用的分子机制。方法以一定浓度的苦瓜蛋白处理K562细胞12～72小时,CCK-8检测其对细胞生长的影响;流式细胞术(AnnexinⅤ)、细胞形态学(光镜及电镜)等方法检测细胞凋亡;同时应用流式细胞术检测Bcl-2及PCNA蛋白表达的变化。结果苦瓜蛋白对K562细胞生长具有明显的抑制作用;流式细胞术及形态学观察(光镜及电镜)证实一定作用浓度的苦瓜蛋白可诱导K562细胞发生明显的细胞凋亡,且随着作用时间的延长细胞凋亡率逐渐升高。苦瓜蛋白处理组K562细胞中Bcl-2及PCNA蛋白的表达分别为0.33%和98.36%,对照组分别为74.03%和97.63%。结论苦瓜蛋白对K562细胞生长具有明显抑制作用,其作用主要通过诱导K562细胞产生细胞凋亡,而不是抑制细胞增殖。苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡过程中,Bcl-2蛋白表达的下调对调控细胞凋亡有重要作用。

高效液相色谱法测定地肤子中地肤子皂苷Ic的含量

目的 建立地肤子中地肤子皂苷Ic(MomordinIc)的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱 蒸发光散射检测器 (ELSD)测定了地肤子中MomordinIc的含量 ,色谱柱 :ShimpackCLC ODS(15 0mm× 6mm) ;流动相 :甲醇 水 冰醋酸 (85∶15∶0 .2 ) ;流速 :1.0ml/min ;ELSD参数 :漂移管温度 70℃ ;氮气压力 :0 .2 1MPa。结果 回归方程为logY =1.34logX +5 .0 2 ,r=0 .9995 ,分析了 4批商品药材地肤子中MomordinIc的含量为 0 .83% 2 .2 1% ;平均回收率为 98.30 % ;RSD为 3.1%。结论 方法快速简便 ,重现性良好 。

不同采收期地肤子中皂甙含量的变化

In order to examine the most appropriate collecting time, HPLC\|ELSD and colorimetric methods were respectively used to determine the content of momordin Ic and total saponins in \%Kochia scoparia \%(L.) Schrad. fruit at different collecting times. It was shown that the best collecting time was when fruit just matured.

苦瓜蛋白对K562/A02耐药逆转作用的研究

[目的]观察苦瓜蛋白对K562/A02细胞多药耐药的逆转及对P-gp表达、功能的影响。[方法]采用CCK-8法测IC50,用流式细胞仪测定苦瓜蛋白对K562/A02细胞上P-gp表达及细胞内ADM潴留的影响。[结果]苦瓜蛋白能提高K562/A02对多种化疗药物敏感性,使P-gp蛋白表达下降,提高细胞内ADM的浓度。[结论]苦瓜蛋白能部分逆转K562/A02的耐药性,逆转机制与下调P-gp蛋白的表达有关。

苦瓜蛋白在K562/A02细胞生长抑制和凋亡中的作用及其机制研究

目的:研究苦瓜蛋白(momordin)诱导人慢性粒细胞白血病耐药细胞株K562/A02的凋亡及作用机制。方法:采用CCK-8法检测细胞生长抑制率,FCM法和细胞形态学检测细胞凋亡,FCM法检测P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、p53、bcl-2和caspase-3蛋白表达水平,并运用caspase-8活性检测试剂盒检测caspase-8的活性。结果:苦瓜蛋白能抑制K562/A02耐药细胞的生长且呈剂量依赖关系,并能诱导细胞凋亡,能使P-gp、p53和bcl-2的表达下降,而使caspase-3和caspase-8活性增强。结论:苦瓜蛋白可逆转耐药细胞株K562/A02的细胞凋亡受抑性,主要机制可能与其下调p53、P-gp和bcl-2的表达以及提高caspase活性有关。

苦瓜蛋白诱导K562/A02细胞凋亡

目的:观察苦瓜蛋白对K562/A02细胞凋亡受抑逆转作用及其分子机制。方法:CCK-8法测定苦瓜蛋白对耐药细胞K562/A02的IC50值,细胞形态学和AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡,流式细胞法测定P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达及caspase-3和caspase-8活性。结果:苦瓜蛋白显著抑制K562/A02耐药细胞的增殖;经苦瓜蛋白处理后细胞形态上出现典型的凋亡改变,AnnexinV/PI双染法显示凋亡细胞明显增加;P-gp蛋白表达下降,caspase-3和caspase-8活性显著增强。结论:苦瓜蛋白能诱导K562/A02耐药细胞凋亡,逆转耐药白血病细胞P-gp高表达所介导的细胞凋亡抑制。

苦瓜蛋白对小鼠移植性肝癌H_(22)肿瘤的抑制作用

目的:探讨苦瓜蛋白对荷瘤小鼠肿瘤生长和免疫器官的影响。方法:将清洁级ICR雄性小鼠按体重随机分成4组,建立肝癌H22皮下移植瘤模型,分为生理盐水对照组(con)、高剂量组(t3)、中剂量组(t2)和低剂量组(t1)。在普通饲料饲喂的基础上采用腹腔注射给药法分别予空白对照组给以生理盐水;高、中、低剂量组分别给以不同剂量苦瓜蛋白。观察其对肿瘤生长的影响;并观察其对肝、脾组织脏器指数的影响。结果:苦瓜蛋白干预组与对照组相比,低、中、高组抑瘤率分别为52.05%、66.89%及85.81%;与对照组比较,体重、瘤重等指标变化均具有统计学意义(P<0.05);肝、脾组织脏器指数变化等方面无统计学差异(P>0.05)。结论:苦瓜蛋白对在体肿瘤的生长具有显著抑制作用,对荷瘤小鼠的肝脾等免疫器官无明显抑制作用。

苦瓜蛋白诱发胃癌细胞SGC7901凋亡的研究

目的 :探讨苦瓜蛋白抗肿瘤活性的机制。方法 :从新鲜的苦瓜种子中分离纯化苦瓜蛋白 ,通过MTT比色法分析其对SGC7901细胞以及正常人二倍体细胞2BS增殖的影响 ,并应用光镜、电镜观察及流式细胞术等手段 ,研究苦瓜蛋白诱发胃癌细胞SGC7901的形态学、DNA含量变化。结果 :苦瓜蛋白对胃癌细胞SGC7901的IC50约为18μg/ml,在相同剂量下对2BS细胞的抑制率仅为8 % ;与对照组细胞相比 ,加药后的SGC7901细胞发生典型的凋亡形态学改变及DNA含量变化。结论 :苦瓜蛋白对胃癌细胞SGC7901的增长具有明显的抑制作用 。

苦瓜蛋白抑制肿瘤基质金属蛋白酶的活性及表达

[目的]探讨苦瓜蛋白对H22荷瘤小鼠基质金属蛋白酶表达及其活性的影响。[方法]将清洁级ICR雄性小鼠随机分成5组,建立肝癌H22移植瘤模型,分为阴性对照组、高剂量组(T3)、中剂量组(T2)、低剂量组(T1)及阳性对照组(CTX,环磷酰胺处理组)。在普通饲料饲喂的基础上采用腹腔注射给药法分别予阴性对照组生理盐水;高、中、低剂量组分别给以不同剂量苦瓜蛋白;阳性对照组予环磷酰胺。观察苦瓜蛋白对抑瘤率的影响,明胶酶谱法检测荷瘤小鼠血清基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9的活性及其变化。[结果]苦瓜蛋白组低、中、高剂量组及阳性对照组抑瘤率分别为52.05%、66.89%、85.81%及65.10%;各苦瓜蛋白干预组与阴性对照组相比,MMP-2、MMP-9的活性降低,酶原表达下调(P<0.01),上述作用与苦瓜蛋白剂量相关。[结论]苦瓜蛋白具有抑制基质金属蛋白酶表达及其活性的作用,其抗肿瘤作用可能与苦瓜蛋白具有抑制MMPs的活性及其表达有关。

HPLC法测定地肤子凝胶中地肤子皂苷Ic的质量分数

为测定地肤子凝胶中w（地肤子皂苷Ic）,采用HPLC法,色谱柱为Agilent HC-C18（150mm×4.6mm,5μm）,流动相为甲醇-φ（冰醋酸）=1.3%水溶液（体积比85∶15）,柱温20℃,流速1.0mL/min,检测波长208nm。测定中,ρ（地肤子皂苷Ic）=98.4~246.0μg/mL,其峰面积与质量浓度呈良好的线性关系,样品平均回收率为97.7%,RSD=1.99%,测定3批样品中的平均w（地肤子皂苷Ic）=0.564mg/g。该方法快速简便,结果准确、可靠,重复性良好,可用于地肤子凝胶剂中w（地肤子皂苷Ic）的测定。

苦瓜蛋白对A549肺癌细胞的抑制作用及其对MAPK信号通路的影响

目的:观察苦瓜蛋白对非小细胞肺癌A549细胞的生长抑制及促凋亡作用;探讨苦瓜蛋白对A549细胞p42/44-MAPK及其磷酸化p42/44-MAPK蛋白表达水平的影响及其作用分子机制。方法:以不同浓度梯度的苦瓜蛋白处理A549细胞,分别作用不同时间,CCK-8检测其对细胞生长抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡。提取苦瓜蛋白不同作用时间点的全细胞蛋白,westernblot检测p42/44-MAPK及p-p42/44-MAPK信号分子的变化。结果:苦瓜蛋白对A549细胞生长具有明显抑制作用,可显著地诱导A549细胞凋亡。与阴性对照比较,苦瓜蛋白可以不同程度下调p42/44-MAPK及p-p42/44-MAPK信号分子的表达(P<0.05)。结论:苦瓜蛋白对非小细胞肺癌A549细胞具有明显地抑制作用及抗肿瘤作用,其作用可能通过诱导A549细胞凋亡来实现;苦瓜蛋白可以不同程度地下调p42/44-MAPK和磷酸化p42/44-MAPK的表达;MAPK信号通路可能部分参与了苦瓜蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制,驱使肿瘤细胞发生凋亡。

HPLC法测定祛湿止痒颗粒中地肤子皂苷Ic的含量

目的对祛湿止痒颗粒的质量控制方法进行研究,建立祛湿止痒颗粒的定性定量的检测方法。方法采用HPLC-蒸发光散射检测器(ELSD)测定祛湿止痒颗粒中地肤子皂苷Ic的含量,并进行了方法学研究。结果含量测定中,阴性样品无干扰,地肤子皂苷Ic在1.016～25.400μg范围内线性关系良好,r=0.9998,平均加样回收率99.11%,RSD=0.53%。结论鉴别方法简单易行;含量测定方法专属性强、重复性良好,能够准确测定祛湿止痒颗粒中地肤子皂苷Ic含量。

正交试验法优选地肤子皂苷Ⅰ c的提取工艺研究

目的 研究地肤子皂苷Ⅰ c的最佳提取工艺.方法 采用正交设计法优选提取工艺,应用高效液相色谱法测定地肤子皂苷Ⅰ c的含量,以溶媒用量、乙醇浓度、回流时间、回流次数为因素,每个因素3个水平,地肤子皂苷Ⅰ c为评价指标.结果 影响地肤子皂苷提取的因素从大到小顺序为乙醇用量、提取次数、乙醇浓度、提取时间.最佳提取条件是取地肤子加10倍量70%乙醇,回流提取2次,每次60min.结论 该提取工艺方法简单、合理,为地肤子皂苷Ⅰ c提取的进一步研究提供一定的参考依据.

地肤子配方颗粒的质量标准

目的建立地肤子配方颗粒质量标准。方法以地肤子皂苷Ic为对照品,采用薄层色谱法(TCL)进行定性鉴别;采用高效液相色谱法(HPLC)对地肤子配方颗粒中的地肤子皂苷Ic进行含量测定,并在此基础上建立地肤子配方颗粒的指纹图谱;对地肤子配方颗粒各项指标进行检查。结果 TLC中地肤子配方颗粒在地肤子皂苷Ic相应位置,显示相同颜色的斑点;醇溶性浸出物含量27.44%～30.95%;地肤子皂苷Ic在18.768 2～600.582 4 mg·L-1呈良好的线性关系(R2=0.999 5),平均回收率102.04%(RSD为0.98%,n=9),指纹图谱相似度系数大于0.95;地肤子配方颗粒水分、溶化性、粒度等均达到2015年版《中华人民共和国药典》颗粒剂的要求。结论该实验建立的定性及定量方法简单可行,重复性好,准确度高,可用于地肤子配方颗粒的质量控制。

祛湿止痒颗粒的质量标准

目的对祛湿止痒颗粒的质量控制方法进行研究,建立祛湿止痒颗粒的定性定量的检测方法。方法采用薄层色谱(TLC)法对其处方组成药味苦参、白鲜皮和牡丹皮进行了定性分析;采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法测定祛湿止痒颗粒中地肤子皂苷Ic,并进行了方法学研究。结果 TCL鉴别方法能特征地鉴别苦参、白鲜皮和牡丹皮,斑点均清晰,阴性无干扰;地肤子皂苷Ic在2.55～12.76μg线性关系良好,r=0.999 8,平均加样回收率99.11%,RSD为0.53%。结论鉴别方法简单易行;测定方法专属性强,重复性良好,能够准确测定祛湿止痒颗粒中地肤子皂苷Ic。