单克隆抗体Dot-ELISA检测血吸虫病循环抗原的研究.Ⅰ.

将血吸虫肠相关阴极抗原的单克隆抗体3D8A联结过氧化物酶后用于直接法Dot-ELISA检测急性、慢性与晚期血吸虫病人血清中循环抗原,阳性率分别为90.6、83.2及30.7％。正常人血清及非寄生虫感染病人血清均未见阳性反应。EPG>100组血清阳性率及抗原水平高于EPG<100。慢性血吸虫病人经吡喹酮治疗后一年,粪检阴性者大部分血清抗原转为阴性;粪检阳性者血清检查仍为阳性。结果表明,肠相关阴极抗原单克隆抗体3D8A能用于Dot-ELISA检测各期病人血清中循环抗原,并能反映病人感染度与药物治疗效果。

单克隆抗体Dot-ELISA检测血吸虫病人循环抗原

制备抗日本血吸虫排泄分泌抗原单克隆抗体(McAb),应用于斑点酶联免疫吸咐试验(Dot-ELISA)检测血吸虫病人循环抗原.血吸虫病人血清的阳性率为80.9％(152/188),其中EPG为1～24、25～99和≥100的病人检出率分别为76.8％、86、6％和100％。血吸虫病人经吡喹酮治疗1年以上粪检阴性者50例,均为阴性.并殖吸虫病人、华支睾吸虫病人、丝虫病人和健康人血清均为阴性.McAb-Dot-ELISA操作简便,试剂用量少,肉眼判断结果,可用于血吸虫病的诊断和疗效考核。

血吸虫循环抗原检测的现场试验Ⅰ

将血吸虫肠相关趋阴极抗原的单克隆抗体用于Dot—ELISA,共检测2175份血清,其中急性血吸虫病血清210份,阳性率为91.9％;慢性血吸虫病血清798份,阳性率为86.7％;正常人血清752份,假阳性率为1.1％;除肺吸虫病外,对其他寄生虫病或非寄生虫感染疾病血清无明显交叉反应。用单盲法Dot—ELISA检测3批血清,结果敏感性为86.5％～95.1％;特异性为96.9％～100.0％。检测流行区居民547份血清,Dot—ELISA阳性反应130份;粪检阳性72例。两者均为阳性者55例,相符率为76.4％。上述结果表明,Dot—ELISA检测循环抗原确实具有较好的敏感性与特异性,适于大规模应用及流行病学调查。

血吸虫循环抗原检测及疗效考核价值

采用单克隆抗体(McAb)S31/32双夹心ELISA法检测感染不同寄生虫病人血清中循环抗原(CAg)427份,其中慢性血吸虫病188例,阳性检出率为95.2%,晚期血吸虫病阳性率4.5%(2/44),正常53人假阳性率5.7%.测定其他寄生虫感染患者及肝炎病人,除发现肺吸虫病、旋毛虫病和华枝睾吸虫病有交叉反应外,其它均呈阴性反应.同时,检测血吸虫病治疗前、后CAg,计495 份血清,慢性血吸虫病治疗前188例,阳性率95.2%,吡喹酮治疗后3、6、12和36个月,其阴转率分别为20.4%、31.9%、96.2%和87.7%.比较双夹心ELISA法和一步法ELISA检查CAg,无显著差异.测试结果提示,采用单抗S31/32建立的双夹心ELISA检测血吸虫循环抗原有很高的敏感性和良好的特异性,病人在治疗后一年其阴转率高,有很好的疗效考核价值.

抗rSjCTPI单克隆抗体检测血吸虫循环抗原的研究

为探讨抗重组血吸虫磷酸丙糖异构酶 (r Sj CTPI)的单克隆抗体检测血吸虫循环酶抗原在血吸虫病免疫诊断和疗效考核中的价值。制备日本血吸虫 r Sj CTPI表达蛋白 ,以此重组蛋白免疫小鼠 ,筛选出高效价的抗 r Sj CTPI单抗 ,建立以纯化的抗血吸虫可溶性虫卵抗原 (SEA)的多克隆抗体 (Ig G)为捕捉系统 ,以酶标的抗 r Sj CTPI单抗为检测系统的酶联免疫吸附试验 (P- M- EL ISA)法检测血吸虫病人等血清。并对该法的敏感性、特异性、交叉反应以及疗效考核与常规的 SEA- EL ISA比较。结果获得了一株抗 r Sj CTPI的单克隆抗体 ,其抗体同型为 Ig G1。P- M- EL ISA检测急性、慢性血吸虫病人、健康人以及华枝睾吸虫病人、肺吸虫病人血清的阳性率分别为 10 0 %、91.7%、 0、0和0。而 SEA- EL TSA为 10 0 %、98.3%、6 .6 9%、10 %和 2 0 %。P- M- EL ISA法对 30例同批血吸虫病人治疗前的阳性率和治愈后 4个月的阴转率分别为 10 0 %和 30 % ;而 SEA- EL TSA分别为 10 0 %和 10 %。结果表明 ,应用抗 r Sj CT-PI单抗检测血吸虫病人循环抗原的 P- M- EL ISA法具有较高的敏感性和特异性 ,并有一定的疗效考核价值。

抗rSjCTPI单克隆抗体检测血吸虫循环抗原疗效考核价值研究

目的 进一步探讨抗重组血吸虫磷酸丙糖异构酶 (r Sj CTPI)的单克隆抗体检测血吸虫循环抗原对血吸虫病疗效考核的价值。方法 建立以纯化的抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原 (SEA )的多克隆抗体 (Ig G)为捕捉系统 ,以酶标抗 r Sj CTPI为检测系统的酶联免疫吸附试验 (P- M- EL ISA)法 ,分别对同批治疗前及治疗后 2、4、6、12个月的血吸虫病人进行检测 ,并与常规检测抗体的 SEA-EL ISA法比较。结果 P- M- EL ISA法对治疗前血吸虫病人检测阳性率为 96 .6 % ,而检测抗体的SEA- EL ISA为 98.3%。 P- M- EL ISA法对治愈后 2、4、6、12个月血清循环抗原检测阴转率分别为15 .3%、 37.3%、 5 2 .0 %、 83.3% ,而检测抗体的 SEA - EL ISA法分别为 3.4%、 6 .8%、 12 .0 %、16 .7%。结论 表明该法既有较好的诊断价值 ,又有较好的疗效考核价值。

斑点-ELISA和独特型/抗独特型抑制试验检测日本血吸虫病患者循环表膜抗原

将血吸虫成虫表膜机原的单克隆抗体8SE4联接辣根过氧化物酶制成结合物,用于直接法斑点-ELISA检测循环抗原。结果48例血吸虫病患者的阳性率为81.3％(39例),24例正常人未出现假阳性反应。检测华支睾吸虫及并殖吸虫病患者各18例,均无交叉反应。本结果证实日本血吸虫病患者血清中有循环表膜抗原存在。直接法斑点-ELISA方法简便,具有较高的敏感性和特异性,可作为诊断日本血吸虫病的补充方法。本文还报告了独特型/抗独特型(8SE_4/抗8SE_4)抑制试验检测循环表膜抗原的初步结果。

McAb-RIHA法检测日本血吸虫病患者血清循环抗原的效果

本文报告了用抗日本血吸虫肠相关趋阴极抗原单克隆抗体致敏血球建立反问间接血凝试验，对66例急性血吸虫病，123例慢性血吸虫病，57例肝吸虫病，54例钩虫病和82例非疫区健康人血清的检测效果。结果显示，该方法检测急、慢性血吸虫病血清的敏感性分别达到98．5％。和81．3％，与肝吸虫病血清交叉反应率为10．5％，与钩虫病血清未见交叉反应，与非疫区健康人血清仅有1．2％的假阳性巨应。与平行对照的McAb－Dot－ELISA检测结果相比，两者在检测敏感性和特异性上差别均无显著意义，具有较高符合率，表明McAb－RIHA试验是一种诊断效率和可靠性较高的检测日本血吸虫病血清循环抗原的方法，尤其适宜基层和现场应用。

多价单克隆抗体检测血吸虫循环抗原现场诊断血吸虫病的价值

采用多价单克隆抗体Dot-ELISA试验,检测了血吸虫病流行区居民血清219份,并以单克隆抗体Dot-ELISA、环卵沉淀试验和粪检作为对照.结果:多价单抗Dot-ELISA、单克隆Dot-ELISA、DGS-COPT和粪便孵化阳性检出率分别为20.6%、31.1%、36.1%、11.4%.多价单抗Dot-ELISA检出率明显低于DGS-COPT,两法总符合率为80.8%,25例粪阳病人3种血清学方法检出率分别为52.0%、88.0%、100.0%.提示:多价单抗Dot-ELISA阳性检出率仍处于较低水平,其敏感性并未提高.

双抗体夹心ELISA检测循环抗原在血吸虫病控制流行地区应用的研究

对血吸虫病已控制流行地区1099名10岁以上的人群,应用抗血吸虫成虫抗原多克隆抗体(PcAb)为捕捉抗体,抗血吸虫虫卵抗原单克隆抗体(McAb)MG_2-HRP为覆盖抗体的双抗体夹心ELISA,检测血吸虫循环抗原(CAg),并以ELISA检测抗体(CAb)作平行对照.结果CAg和CAb的阳性检出率分别为4.55%和4.64%,两者的差异无显著意义(P>0.05).在50例CAg阳性者中,无血吸虫病治疗史者31例,而51例CAb阳性者中,无血吸虫病治疗史者仅6例.CAg和CAb联合检测能提高检出率.

McAb-ELISA检测血吸虫循环抗原——Ⅰ.McAb的制备、筛选及初步试验

将感染日本血吸虫或曼氏血吸虫尾蚴的BALB/c小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合,制备了30余株分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤,其靶抗原分别为血吸虫成虫表面膜、肠道、体细胞和虫卵。预试验结果表明,抗血吸虫成虫肠道多糖抗原McAb活性最强,将其用于夹心ELISA检测血吸虫成虫三氯醋酸可溶性抗原,敏感度达1ng/ml。用夹心ELISA测定正常兔血清呈阴性反应;测定感染兔血清呈阳性反应,且抗原水平与感染度呈正相关;8只感染兔治疗后3个月,除2份兔血清外,其余血清均转为阴性。提示本方法优于一般抗体测定法,是一种有潜力的免疫诊断方法。

两株识别血吸虫卵相关组分的单克隆抗体靶表位分析

免疫学鉴定两株主要识别卵相关抗原组分的单克隆抗体（２Ｈ１０，２Ｈ１）均属ＩｇＭ同型，能与日本及曼氏血吸虫可溶性卵抗原（ＳＥＡ）及其三氯醋酸可溶组分（ＳＥＡ－ＴＣＡ）形成趋弱阳极或趋中性沉淀带；与虫卵温育均可形成典型环卵沉淀物；两者ＩＦＡ反应谱有明显差异，但均能与肝、肠中的虫卵外围构成明显荧染；经纯化并标记长链生物素后均可建立灵敏度达毫微克水平的同相夹心酶联试验检出相应抗原组分，但２Ｈ１０仅能检出日本血吸虫ＳＥＡ（ＳＥＡｊ），而２Ｈ１则以检出曼氏种ＳＥＡｍ占优。两株单抗的交替异相组合检测，均为阴性，表明两者识别的表位不同。分别经过碘酸钠及三氟醋酸处理ＳＥＡｊ后进行酶联活性测定，显示２Ｈ１０与２Ｈ１所识别的表位均属糖基依赖型，而前者有显著较强的耐氧化性能，进一步佐证了两株单抗识别表位的异源属性。根据理化特性试探了靶组分的液相层析分离，证明２Ｈ１０与２Ｈ１识别的活性基团不为ＣｏｎＡ所有效吸附，应用Ｍｏｎｏ－ＱＦＰＬＣ离子交换层析，活性表位相对集中被０．２—０．４ｍｏｌ／Ｌ离子强度的ＮａＣｌ洗脱峰内。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及免疫印迹试验分析提示了活性组分分子量的不均一性及糖基属性的不可转印特点。

血吸虫病患者血清中循环25kD表膜抗原的检测

采用细胞杂交瘤技术获得一株血吸虫成虫抗原的单克隆抗体SM 38-3。其靶抗原为成虫表膜,免疫球蛋白型为1gG 2a,能识别血吸虫分子量为25k D的表膜蛋白抗原表位。该单克隆抗体纯化后标记过氧化物酶,用于Dot-ELISA测定慢性血吸虫病人血清115份,阳性反应103份,阳性率为89.6％;测定急性病人血清89份,阳性反应85份,阳性率为95.5％;测定141份正常人血清,阳性反应2份,假阳性率为1.4％。与血吸虫肠相关抗原的检测比较,结果阳性率与抗原滴度均无明显差别。

血吸虫循环抗原检测的现场试验Ⅱ

制备血吸虫病单克隆抗体诊断试剂盒,将其用于Dot—ELISA,分别检测江苏、安徽流行区急性血吸虫病患者及四川、江西、安徽流行区慢性血吸虫病患者血清中循环抗原。结果不同流行区Dot—ELISA反应的平均“+”值、阳性率和抗原滴度的几何均数不同,循环抗原水平可以反映流行区的疫情。另将Dot—ELISA、ELISA检测四川慢性血吸虫病人治前及治后半年、1年的血清循环抗原及抗体,结果循环抗原在病人治疗后很快下降,治后1年77.8％(35/45)病人的循环抗原转为阴性。循环抗体在病人治疗后也逐渐下降,但速度甚为缓慢。治疗后1年,仅21.7％(10/46)病人转为阴性。上述结果表明,循环抗原能更直接、更真实地反映防治效果。

McAb-RIHA法检测日本血吸虫病患者血清循环抗原的效果

本文报告了用抗日本血吸虫肠相关趋阴极抗原单克隆抗体致敏血球建立反向间接血凝试验,对66例急性血吸虫病,123例慢性血吸虫病,57例肝吸虫病,54例钩虫病和82例非疫区健康人血清的检测效果。结果显示,该方法检测急、慢性血吸虫病血清的敏感性分别达到98.5％和81.3％,与肝吸虫病血清交叉反应率为10.5％,与钩虫病血清未见交叉反应,与非疫区健康人血清仅有1.2％的假阳性反应。与平行对照的McAb-Dot-ELISA反应结果相比,两者在检测敏感性和特异性上差别均无显著意义,具有较高符合率,表明McAb-RIHA试验是一种诊断效率和可靠性较高的检测日本血吸虫病血清循环抗原的方法,尤其适宜基层和现场应用。

单克隆抗体双夹心ELISA检测血吸虫循环抗原对抗血吸虫药疗效考核的价值

应用日本血吸虫抗３１／３２ｋＤ（１Ｄ＝０．９９２１ｕ）单克隆抗体双夹心酶联免疫吸附试验（双夹心ＥＬＩＳＡ）检测血吸虫循环抗原，用于城市急性血吸虫病经吡喹酮治疗５年后无再次感染患者的疗效考核，阳性率为１２．２０％。与快速法ＥＬＩＳＡ检测循环抗原的符合率为９６．３４％。与常用检测抗体的ＩＨＡ、ＥＬＩＳＡ法平行对照，阳性率基本一致。与改进的粪便孵化法比较，两法的符合率为８５．３６％。无疫水接触史健康人未见阳性反应。对肝病患者无交叉反应。结果显示双夹心ＥＬＩＳＡ法检测循环抗原敏感性高，特异性强，具有良好的抗血吸虫药物疗效考核价值。

3种CAg检测方法评价吡喹酮治疗日本血吸虫病疗效的比较

目的 :探讨 3种不同的循环抗原 (CAg)检测方法在日本血吸虫病人经吡喹酮治疗后疗效考核的应用价值。方法 :采用单克隆抗体 (MAb)JPG3,分别建立了Dot ELISA、Sandwich ELISA和R IHA 3种CAg检测方法 ,用吡喹酮 (50mg·kg- 1,顿服 )治疗日本血吸虫病人 ,进行治疗后不同时期的同步血清学检测 ,并评估检测结果。结果 :吡喹酮治疗后半年 ,上述 3种检测方法的CAg阴转率分别为 75 .8%、72 .6 %和43.5% (P <0 .0 1 ) ,治疗后 1年分别为 83.9%、88.7%和 71 .0 % (P <0 .0 5) ;治疗后 2年分别为87.1 %、95 .2 %和 93 .5 % (P >0 .0 5) ;CAg阳性病例的平均抗原滴度倒数 (GMRT)随治疗后时间的延长逐步下降 ,治疗后 2年三种方法均达到各自的最低阳性稀释度。结论 :考核吡喹酮治疗日本血吸虫病人近期 (半年或 1年 )疗效 ,Dot ELISA和Sandwich ELISA均较好 ,但后者在结果判读上较前者更为客观 ;考核远期 (2年 )疗效 ,3种方法的检测结果无显著性差别 ;

血吸虫单抗夹心酶标法(S-ELISA)的建立及其检测循环抗原的实验研究

目的建立血吸虫病循环抗原的检测方法。方法用辣根过氧化物酶标记血吸虫单克隆抗体,建立夹心酶标法(S-ELISA),并检测血吸虫病人及其它类型人群的血清。结果S-ELISA对急性血吸虫病人的检出率为88.64%,OD值算术均数为0.372;慢性血吸虫患者和正常人的检出率分别为75.00%和6.00%,与肝吸虫和乙型肝炎血清的交叉反应为0,肺吸虫的交叉反应为10.39%。血吸虫不同感染度人群平均OD值无论是算术均数还是几何均数,均随着感染度的增加而呈现上升的趋势。结论本方法操作简便,有较好的敏感性与特异性,适宜于对血吸虫病的检测。

日本血吸虫循环抗原与抗独特型抗体的检测及其比较

以日本血吸虫肠相关ＭｃＡｂ－Ｇ３及单克隆抗独特型抗体ＮＰ３０致敏红细胞，建立ＲＩＨＡ诊断血吸虫病。结果是正常人、急、慢性及晚期血吸虫病人Ｇ３－ＲＩＨＡ阳性率分别为２．１７％、９８．７９％、８４．０％、３２．１４％；ＮＰ３０－ＲＩＨＡ阳性率各为１．４５％、９７．５８％、８１．３％、２８．５７％。７５例慢性感染人群中，两者与Ｋａｔｏ阳性符合率分别为８４．０％、８１．３％；而阴性符合率各是３１．５％、３７．０％轻、中、重感染度人群循环抗原／抗独特型抗体阳性率：Ｇ３－ＲＩＨＡ分别为８０．３３％、１００．０％、１００．０％；ＮＰ３０－ＲＩＨＡ为８０．３３％、８８．８９％、８０．０％，显示慢血病人血清中循环抗原及／或抗独特型抗体与ＥＰＧ无相关性。本文提示循环抗原、抗独特型抗体在免疫调变及／或免疫网络系统中呈竞争与抑制状态。