抗人肺癌单克隆抗体(3D3)的研制及其特性鉴定

本文用人肺腺癌组织免疫的BALB/c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞融合,获得1株单克隆抗体(McAb 3D3)。Ig类测定为IgG_1型。杂交瘤培养上清液和腹水的效价分别为1∶10~3～10~4和1∶10~6。采用间接免疫荧光法(IFA)观察到McAb3D3主要与肺腺癌细胞株A549和L342反应,与其它组织肿瘤细胞株没有反应。ABC免疫酶染色试验显示McAb3D3主要与肺腺癌组织反应,与正常肺组织没有反应。

用载人肺癌的裸鼠研制的单克隆抗体

肿瘤细胞与正常细胞共有大量的强抗原,而大多数肿瘤相关抗原则相对较弱,这就给用肿瘤细胞免疫BALB/c小鼠以研制抗肿瘤单克隆抗体(McAb)的工作带来了不少困难。Watanabe等用免疫功能重建的方法获得了抗胃癌的McAb。

her2基因在肺癌中的研究进展

her2基因位于17q21,编码的蛋白质是具有酪氨酸蛋白激酶活性的跨膜蛋白,是人表皮生长因子受体之一。her2突变主要发生在外显子20,her2在肺癌中的表达可能与肺癌的类型、细胞分化程度及性别等存在一定的相关性。her2的单克隆抗体和小分子酪氨酸激酶抑制剂的临床试验虽然对her2异常的肺癌患者起到了一定作用,但并没有取得令人振奋的治疗效果。目前RNA干扰her2基因表达的试验正在进行,有望成为治疗肺癌的新策略。

脾内一次性免疫莸取抗人体肺癌单克隆抗体

用人体肺腺癌细胞(LAX)脾内一次性免疫BALB/C小鼠后,将脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(NSO)融合,融合率为80％,对LAX细胞反应阳性率为20％。以酶联免疫吸附试验,免疫荧光试验和免疫组织化学试验,检测其与正常人体细胞,人体肿瘤细胞和人体肺腺癌的反应,发现获得的ALA-05单克隆抗体与正常人体细胞无交叉反应,与多株人体其他肿瘤细胞也无反应,而与人体肺腺癌则呈阳性反应,且为抗膜抗体。免疫扩散法证明其是IgG_(2a)。

抗人肺癌单克隆抗体研制

本文应用细胞杂交技术建立了分泌鼠抗人肺癌单克隆抗体的杂交瘤细胞系F-19,N-35,SIA-2。经14-16个月体外传代培养抗体仍稳定分泌。经用免疫组化技术对305例人肺癌组织和其它人体正常和非正常组织进行了鉴定,并探讨了这些单克隆抗体进人临床实用的潜力。

单抗LC-1与针对的人肺腺癌SPC-A-1细胞肿瘤相关抗原复合物的内化研究

我们运用抗人肺癌单抗LC-1结合胶体金免疫电镜技术研究了人肺腺癌SPC-A-1细胞表面抗原抗体复合物被内吞的全过程,发现该细胞表面抗原抗体复合物是通过受体介导内吞途径被内化,经多泡体富集后至溶酶体消化降解。此外我们还用流式细胞仪分析了内吞前后该细胞表面抗原量的变化和短期内的恢复情况。LC-1在诱发该细胞表面抗原内化的同时还诱发了它对该核糖体的自噬。

人小细胞肺癌放射免疫治疗的实验研究

本文介绍了^(131)I标记抗人小细胞肺癌单克隆抗体(2F_7)免疫显像及免疫治疗的实验结果。^(131)I2F_7能与荷瘤裸鼠体内的小细胞肺癌是特异性结合,使肿瘤清晰显示。与对照组相比,能明显地抑制肿瘤的生长和延长荷瘤裸鼠的存活期。

肺癌单克隆抗体的混合应用在100例肺癌的免疫组化检查

本文混合应用我室制备的三株抗人肺癌单克隆抗体F—19、SIA—2,N—35,对100例各型肺癌石腊切片标本进行了免疫组化(ABC法)检测,总阳性率91％。其中肺鳞癌93％,肺腺癌86％,肺泡细胞癌83％,肺混合癌(鳞+腺)100％,肺未分化癌91％,较之单个抗体检测大大提高了阳性率。尤其对肺未分化癌(小细胞癌达100％)。避免了单一抗体检测阴性而丢失的阳性病例,并对检测中出现的核抗原作了初探。采用抗原竞争抑制试验证明三株抗体分别针对不同的抗原决定簇,用免疫封闭试验排外CEA抗体。

rmhTNF-α联合PD-1单抗治疗小鼠Lewis肺癌的研究

目的研究重组改构人肿瘤坏死因子-α(rmhTNF-α)联合PD-1单抗(anti-PD-1)对小鼠Lewis肺癌的治疗效果及作用机制。方法24只6~8周龄C57BL/6雌鼠,依据随机数字表法分为4组,每组6只:生理盐水组、rmhTNF-α组、anti-PD-1单抗组、联合给药组。游标卡尺测瘤体并用活体成像观测。16 d后安乐处死小鼠,剥离肿瘤称重。观察小鼠生存期。免疫组化检测肿瘤CD8+T细胞数目。结果与生理盐水组比较,rmhTNF-α组、antiPD-1组、联合给药组肿瘤体积、瘤重均减小,差异有高度统计学意义(P<0.01);rmhTNF-α组肿瘤体积大于联合给药组,差异有统计学意义(P<0.05);而联合给药组与anti-PD-1组肿瘤体积差异无统计学意义(P>0.05);联合给药组瘤重分别与rmhTNF-α、anti-PD-1组比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。与生理盐水组比较,rmhTNF-α组、anti-PD-1组、联合给药组生存期增加,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),而联合给药组生存期分别与rmhTNF-α组、anti-PD-1组比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。rmhTNF-α组与生理盐水组比较,肿瘤CD8+T细胞数目增多(P<0.05);anti-PD-1组、联合给药组与生理盐水组比较,肿瘤CD8+T细胞数目显著增加(P<0.01);联合给药组肿瘤CD8+T细胞数目少于rmhTNF-α组(P<0.01),而与anti-PD-1组比较,肿瘤CD8+T细胞数目差异无统计学意义(P>0.05)。结论rmhTNF-α具有抑制小鼠肺癌的作用,但不具有增强PD-1抗体治疗肺癌的作用。

全人源EGFR单抗的筛选和鉴定

目的:制备全人源表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体,为基于人EGFR靶点的肿瘤免疫调节治疗提供基础制剂。方法:采集110例胸部肿瘤(肺癌102例,乳腺癌8例)患者外周血,构建噬菌体单链抗体库。经噬菌体展示后筛选阳性克隆,测序并构建全长轻重链表达载体质粒,共转染HEK293。通过亲和层析获得纯化抗体,抗原抗体免疫反应测定抗体特异性和敏感性,生物膜干涉(biolayer interferometry,BLI)技术测定抗体亲和力和流式细胞技术(fluorescence activating cell sorter,FACS)检测对肿瘤细胞系EGFR结合活性。结果:成功构建肺癌单链抗体噬菌体库,抗体库库容≥108,筛选获得两株单抗,分别为BTHG17-1,BTHG17-2,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定结合抗原敏感性为10 ng/mL,亲和力在10-8 mol/L水平,两抗体结合相同表位,可特异性结合野生型EGFR和突变体EGFRvⅢ蛋白,具有结合肺癌和神经胶质瘤细胞活性。结论:获得较高亲和力全人源EGFR单链抗体(single-chain variable fragment,scFv),具有EGFR(包括EGFRVⅢ)特异性,为EGFR靶点封阻和免疫导向治疗研究提供一种新抗体工具。