一种新的无传染性的检测HBeAg抗HBe的单克隆酶联免疫吸附法(MonoLISA)的建立与应用

应用我室自1988年5月以来建立的抗乙型肝炎e抗原两个抗原决定簇的单克隆抗体,和在大肠杆菌中高效表达的乙型肝炎病毒e抗原,组装成检测HBeAg/抗HBe的酶联免疫试剂(简称Mo-noLISA)。测定了该试剂的特异性、敏感性和可重复性,并与用日本单克隆抗体和血清e抗原组装的类似的EIA试剂进行了比较。结果两种试剂检测92份乙肝病人血清e抗原和38份血清e抗体的总符合率,分别为97.8％和100％。用两种试剂同时滴定一份已知HBeAg阳往和一份抗-HBe阳性的血清,证明两者的敏感性无显著差异。重复性试验证实,该试剂的重复率为100％。由此证明,用抗-HBeMcAb和基因工程抗原组装的诊断试剂,特异性强,敏感性高,可重复性好,且无传染性。这不仅为诊断试剂原材料的更新提供了丰富的来源,而且将该类试剂提高到一个新水平。

单克隆多克隆抗体不同标记ELISA技术对HBeAg/抗-HBe检测评估

采用抗-HBe单克隆和多克隆抗体进行生物素或酶标记作酶免疫试剂检测HBeAg及抗-HBe,结果显示单克隆抗体(McAb)敏感性高于多克隆抗体(PcAb)。生物素试剂在检测HBeAg的稀释度为1:5000,比酶标法ELISA高1倍多,与RIA相当,且稳定性优于RIA。生物素标记抗体至少1年内保持效价不变,1年内批间变异系数为5.8％,相同标本重复检测变异系数为5.94％,是一种较理想的检测e系统的方法之一。另外,研究发现一孔一期法同时测HBeAg/抗-HBe时,无论标记抗体为单克隆或多克隆,其包被只能用单克隆抗体。

乙肝患者外周血HBV抗原抗体表达及病毒载量与T细胞亚群检测分析

目的 探讨乙型肝炎患者外周血抗原抗体表达及乙肝病毒载量与T细胞亚群关系及其临床意义.方法 2010年5月～10月苏州市第五人民医院住院乙肝患者70例（实验组）、正常对照40例,分别采用流式细胞术检测外周血T细胞亚群、微粒子酶免分析法获取HBV抗原抗体结果、实时荧光定量法检测HBV-DNA.按HBV抗原抗体检测结果分为HBeAg阳性乙肝组与HBeAg阴性乙肝组.按HBV-DNA载量分为三组（〈104,104～106,107～108） IU/ml.结果 ①HBeAg阳性乙肝与HBeAg阴性乙肝T细胞亚群检测值（%）分别为CD3＋：69.81±1.1,68.76±3.03;CD4^＋：32.84±2.55,35.32±3.45;CD8^＋：31.66±1.67,29.68±2.58,与正常人T细胞亚群结果（CD3＋：75.17±1.31;CD4^＋：42.29±2.13;CD8^＋：24.73±0.83）差异具有统计学显著性意义（t=3.637~7.468,P〈0.001）.两检测组间T细胞亚群差异无统计学显著性意义,但CD4^＋与CD8^＋比值后者高于前者.②HBV-DNA定量结果小于104 IU/ml时,只有CD3＋（69.59%±3.73%）与正常人组间差异具有统计学显著性意义（t=3.574,P=0.000 8）.当病毒量大于104 IU/ml而小于106 IU/ml时,CD3＋（71.89%±2.21%）与正常人组间差异具有统计学显著性意义（t=2.665,P=0.010 1）,CD8^＋（31.29%±2.03%）与正常人组间差异具有统计学显著性意义（t=7.183,P〈0.000 1）.当病毒量大于107 IU/ml而小于108 IU/ml时,CD3＋,CD4^＋,CD8^＋（66.71%±1.99%,33.79%±2.22%,32.84%±1.52%）与正常人组差异具有统计学显著性意义（t=5.514～9.567,P〈0.000 1）;且该组与上一组CD4^＋（38.38%±3.20%）间差异有统计学显著性意义（t=2.297,P=0.025）.结论 临床上乙肝患者HBV抗原抗体的不同表达,其T细胞亚群、DNA含量与正常人组存在显著性差异,通过它们的协同检测可以监控患者的免疫功能状况,适时调节患者的免疫功能水平,为乙肝患者的抗病毒治疗提供帮助.

血清HBV标志的ELISA技术的建立与发展

本文介绍本室10年来在检测血清乙型肝炎病毒(HBV)标志的ELISA技术的建立与发展。对HBV的3个抗原抗体系统的检测,主要的研究发展方向是:建立与应用单克隆抗体作为试剂材料;改进与发展一步培育法ELISA技术原理;更新底物的应用。应用情况表明,这整套ELISA检测技术是可行的,达到了预期的目的,符合当前我国的实际需要,能够在各级医疗,预防与研究机构推广应用。

从检验指标判断乙型病毒性肝炎患者的传染性

乙型肝炎病毒感染是我国乃至世界范围内的公共问题。乙型肝炎病毒感染的隐匿性,使感染不能及时发现,进而导致疾病的传播。乙型肝炎病毒的检测指标能够间接反映患者体内病毒的感染状态,本文旨在讨论传统检验指标乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、表面抗体(抗-HBs)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、e抗体(抗-HBe)、乙型肝炎核心抗体(抗-HBc)、乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)以及新的生物学标记物共价闭合环状DNA(cccDNA)、乙型肝炎核心抗原相关抗原(HBcrAg)对乙型肝炎患者体内病毒复制情况的提示意义。

新疆地区HBV感染者的血清学标志物和PreS_2Ag/PreS_2Ab的对比研究

目的了解新疆地区汉、维、哈、回、蒙古族乙型肝炎病毒感染者血清学标志物与PreS2Ag、PreS2Ab之间的关系。方法应用乙型肝炎病毒PreS2Ag、PreS2Ab酶联免疫试剂,检测了新疆地区318例不同民族HBV感染者中的PreS2Ag、PreS2Ab。结果在新疆地区129例HBeAg+组中,PreS2Ag+119例,PreS2Ab+10例,阳性率分别为92.25%和8.40%;在189例Anti-HBe+组中,PreS2Ag+148例,PreS2Ab+14例,阳性率为78.31%、7.41%;结论在新疆的各民族HBV感染者HBeAg+和Anti-HBe+组中的PreS2Ag的阳性率,经统计学处理后,χ2=8.58,P<0.005有显著意义;在HBeAg+组中,PreS2Ag、PreS2Ab的阳性率各有不同,各民族之间,经统计学处理χ2<3.84,P>0.05,差异无显著性。在Anti-HBe+组中,汉族与维、哈、的阳性率之间的比较χ2=7.88,14.43,P<0.005;汉族与回族PreS2Ab之间χ2=4.64,P<0.05。