鼠疫F1单克隆抗体建株过程中的动物免疫

目的探讨在建立抗鼠疫F1抗原的单克隆抗体杂交瘤株的过程中抗原免疫的剂量及免疫方法.方法采用F1抗原常规免疫、改良的F1抗原脾内注射免疫以及EV菌免疫3种方法免疫6～8周龄,体重为10～20g,健康的雌性BALB/c小鼠,并用间接ELISA法检测尾血中的抗体. 结果在常规免疫中,200μg 组和100μg组免疫效果优于50μg组,而200μg组和100μg组免疫效果基本一致;改良的F1抗原脾内注射免疫,血中抗体效价较高;EV菌免疫的效果不理想. 结论用F1抗原常规免疫小鼠,免疫剂量用100μg/只较为合适;若要缩短免疫时间,采用改良的脾内注射免疫法是理想的选择.

BALB/c小鼠选择与腹水产量和抗体效价间关系的研究

目的观察在鼠疫F1单克隆抗体制备过程中，BALB／c小鼠的选择和饲养与所获腹水量和抗体效价的关系，为大量制备该单克隆抗体提供实验室参考依据。方法根据小鼠周龄、性别和饲养条件对BALB／c小鼠进行分组，并采用动物体内诱生法制备腹水，间接ELISA用来检测腹水中F1单克隆抗体效价。结果12～16周龄组、雄性和加强营养组小鼠所获腹水产量和效价均高于其它周龄组和对照组。结论选择适当周龄的雄性小鼠、饲养过程中加强营养和管理可适当提高腹水产量和抗体的效价。

鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA诊断试剂盒的研制

目的研制鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA诊断试剂盒，并进行验证。方法用鼠疫菌F1抗原免疫家兔制备抗血清，经50％饱和硫酸铵盐析2次后，再经Sephacryl S-300凝胶柱层析纯化，作为包被抗体；制备鼠疫菌F1抗原单克隆抗体腹水，并进行纯化，用HRP标记单抗，作为酶标抗体；建立鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA检测方法，连续制备3批诊断试剂盒，并建立内部质控品。对试剂盒进行板内板间精密性、灵敏度、线性范围、特异性、重复性、准确性和稳定性验证。结果制备的试剂盒检测精密性参比品的板内变异系数为5．2％，板间变异系数为8．23％；试剂盒的线性范围为3．91～62．5ng／ml，最低检测限为3．0ng／ml；试剂盒检测鼠疫菌菌液的结果为阳性，而与近缘假结核耶尔森菌无交叉反应；试剂盒检测高、中、低3种浓度Fl抗原含量的变异系数为4．54％～8．4％，回收率在104％-108％之间；试剂盒稳定性良好，有效期至少为1年。结论成功制备了鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA诊断试剂盒，为鼠疫的临床诊断及流行病学监测提供了一种快速检测手段，也为新型鼠疫组分疫苗F1抗原含量的检测提供了方法。