木犀草素对神经性疼痛模型大鼠MCP-1/CCR2信号轴的影响

目的:探讨木犀草素调节单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)/CC趋化因子受体2(CCR2)信号轴,对神经性疼痛(NP)模型大鼠神经胶质细胞激活和免疫炎症的影响。方法:采用坐骨神经慢性压迫损伤法构建大鼠NP模型。将大鼠按随机数字表法分为模型组、阿魏酸钠组及木犀草素低、中、高剂量组,每组12只;另选择同期12只大鼠为假手术组。各组大鼠腹腔注射及灌胃相应药物,每天1次,连续14 d。测定大鼠机械性缩足反射阈值(MWT)和热刺激缩足反射潜伏期(TWL);实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及免疫组织化学法检测脊髓中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及小胶质细胞标志物离子钙接头蛋白分子1(Iba-1)mRNA及蛋白表达;流式细胞仪检测大鼠外周血中CD4^(+)、CD8^(+)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠脊髓病理损伤情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脊髓中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平;蛋白质印迹法(Western blotting)检测脊髓中MCP-1、CCR2蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠MWT、TWL、CD4^(+)T细胞比例及CD4^(+)/CD8^(+)比值降低,Iba-1、GFAP mRNA及蛋白表达、CD8^(+)T细胞比例、炎症因子水平(IL-6、IL-1β、TNF-α)、MCP-1及CCR2蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,木犀草素低、中、高剂量组及阿魏酸钠组大鼠MWT、TWL、CD4^(+)T细胞比例及CD4^(+)/CD8^(+)比值升高,Iba-1、GFAP mRNA及蛋白表达、CD8^(+)T细胞比例、炎症因子水平(IL-6、IL-1β、TNF-α)、MCP-1及CCR2蛋白表达降低,且木犀草素作用效果呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:木犀草素具有抗炎、增强免疫、抑制胶质细胞活化,缓解NP的作用,其作用机制可能与抑制MCP-1/CCR2信号轴的激活有关。

异钩藤碱对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的 探讨异钩藤碱(IRN)调节单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)/CC趋化因子受体2(CCR2)信号通路对哮喘小鼠气道炎症的影响。方法 通过注射和吸入卵清蛋白的方法建立哮喘小鼠模型,将造模成功后的小鼠随机分为哮喘组、IRN低剂量组(IRN-L组,灌胃10 mg/kg IRN)、IRN高剂量组(IRN-H组,灌胃20 mg/kg IRN)、IRN-H+CCL2组[灌胃20 mg/kg IRN+腹腔注射7.5 ng CC趋化因子配体(CCL2)]、阳性对照组(腹腔注射2 mg/kg地塞米松),并以注射和吸入无菌磷酸盐缓冲液的小鼠为空白对照组,每组10只。各药物组小鼠每天给予相应药物1次,连续给药2周。检测各组小鼠气道高反应指标——呼吸间歇(Penh)值,血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素13(IL-13)、IL-4水平,支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞(EOS)、淋巴细胞(LYM)和中性粒细胞(NEU)数量,肺组织中MCP-1、CCR2蛋白表达水平;观察肺组织病理学变化并进行炎症细胞浸润评分。结果 与空白对照组比较,哮喘组小鼠肺组织炎症细胞浸润较明显,并有细胞肿胀、脱落现象发生;炎症细胞浸润评分,Penh值,IL-4、IL-13、TNF-α水平,EOS、NEU、LYM数量和MCP-1、CCR2蛋白表达水平均显著增加或升高(P<0.05);与哮喘组比较,IRN-L组、IRN-H组、阳性对照组小鼠肺组织病理损伤得到改善,上述定量指标均显著降低(P<0.05);与IRN-L组比较,IRN-H组、阳性对照组上述定量指标均显著降低(P<0.05);IRN-H组与阳性对照组比较,上述定量指标差异均无统计学意义(P>0.05);与IRN-H组比较,IRN-H+CCL2组上述定量指标均显著增加或升高(P<0.05),CCL2逆转了高剂量IRN对哮喘小鼠的保护作用。结论 IRN可能通过抑制MCP-1/CCR2信号通路的激活来减少哮喘小鼠气道炎症因子的释放,从而达到改善哮喘的目的。

苦参碱减轻慢性肾小球肾炎大鼠肾脏损伤及其机制

目的探讨苦参碱(Mat)通过调节单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)/趋化因子C-C-基元受体2(CCR2)信号通路对慢性肾小球肾炎大鼠肾脏损伤的影响。方法采用皮下注射牛血清清蛋白的方式建立慢性肾小球肾炎大鼠模型,将50只大鼠随机均分为对照组、模型组、苦参碱低、高剂量组(Mat-L组、Mat-H组)、苦参碱^(+)CCR2组(Mat^(+)CCR2组),每组10只,连续灌胃4周。检测24 h尿蛋白排泄量;剥离脾脏与胸腺,计算脏器指数;检测各组大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)含量;HE染色法观察各组大鼠肾组织病理变化;ELISA法检测肾组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6水平;流式细胞术检测各组大鼠外周血T淋巴细胞亚群比例;Western blotting法测定MCP-1、CCR2蛋白表达。结果模型组大鼠脾脏指数和胸腺指数显著降低,肾组织有大量炎症细胞浸润,24 h尿蛋白、BUN、Scr、TNF-α、IL-6以及MCP-1、CCR2表达显著升高,外周血T细胞亚群CD3^(+)、CD4^(+)以及CD4^(+)/CD8^(+)比值显著降低,CD8^(+)比例显著升高(P<0.05);Mat-L组、Mat-H组大鼠脾脏指数和胸腺指数升高,肾组织炎症浸润现象改善,24 h尿蛋白、BUN、Scr、TNF-α、IL-6以及MCP-1、CCR2表达显著降低,外周血T细胞亚群CD3^(+)、CD4^(+)以及CD4^(+)/CD8^(+)比值显著升高,CD8^(+)比例显著降低(P<0.05);CCR2减弱了Mat-H对慢性肾小球肾炎大鼠免疫功能的影响。结论苦参碱可以缓解慢性肾小球肾炎大鼠的炎症损伤,提高大鼠外周免疫功能,其作用机制可能与抑制MCP-1/CCR2信号通路有关。