HMGN1激活TLR4/MyD88/NF-κB p65/IKK-β信号通路诱导小鼠BV2小胶质细胞活化上调其促炎介质表达

目的 探究高迁移率族核小体结合蛋白1(HMGN1)对小鼠BV2细胞炎症反应的影响并探究其可能的机制。方法使用(0、 100、 200、 500、 1000、 2000)ng/mL的重组HMGN1孵育BV2细胞6 h。用显微镜观察细胞形态变化,实时定量PCR检测细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、 IL-1β、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1) mRNA水平。随后把小胶质细胞随机分成对照组、模型组、抑制剂组和拮抗剂组。模型组用500 ng/mL的HMGN1处理BV2细胞,拮抗剂组在模型组的基础上加入瑞沙托维(resatorvid)/TAK-242进行干预,使用实时定量PCR和免疫荧光细胞化学染色检测细胞中的M1/M2型标志物的表达情况,Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、 Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子κB p65(NF-κB p65)和NF-κB抑制物激酶β(IKK-β)的蛋白表达。结果 HMGN1处理后,BV2细胞形态发生明显变化,呈阿米巴样;与0 ng/mL HMGN1组相比,TNF-α、 IL-6、 IL-1β、 MCP-1的mRNA水平随HMGN1剂量的增加而升高;M1型标志物iNOS的mRNA水平随HMGN1剂量的增加而升高,M2型标志物CD206的水平随HMGN1剂量的升高而降低。与模型组相比,拮抗剂组M1型标志物iNOS的mRNA水平显著降低,M2型标志物CD206的水平显著升高。免疫荧光细胞化学染色结果也显示MI型标志物iNOS在拮抗剂组中的表达降低。Western blot的结果提示,拮抗剂组iNOS、 TLR4、 MyD88、 NF-κB p65和IKK-β的蛋白表达显著降低。结论 HMGN1可能通过激活TLR4/MyD88/NF-κB p65/IKK-β信号通路诱导BV2小胶质细胞活化来上调其促炎介质的水平。

基于TLR4/NF-κB信号通路探究壮药双路通脑方对缺血性脑卒中大鼠肠组织损伤及肠道菌群的影响

目的 探究壮药双路通脑方对缺血性脑卒中大鼠脑组织Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB信号通路及肠组织损伤、肠道菌群的影响。方法 将50只大鼠建立缺血性脑卒中模型,随机分为低(7.16g/kg)、中(14.33 g/kg)、高(28.66 g/kg)剂量双路通脑方组和模型(M)组,并设假手术(S)组,每组10只。制作模型前30 min予以相应剂量双路通脑方颗粒溶液灌胃,在大鼠成模清醒后1 h给予该颗粒灌胃,连续6 d,每天2次。M组和S组同步灌胃无菌水。2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法测量脑梗死体积;酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、干扰素(INF)-γ水平;Western印迹检测脑TLR4/NF-κB通路蛋白及结肠密封蛋白(Occludin)、闭合蛋白(Claudin)-1、紧密连接蛋白(ZO)-1蛋白表达;苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织结构变化;16 S rDNA扩增测序法分析肠道菌群构成。结果 M组脑梗死比例较S组显著增加(P<0.05);中、高剂量双路通脑方组脑梗死比例较M组显著降低(P<0.05),且高剂量双路通脑方组最低,后续以高剂量28.66 g/kg进行研究。与S组相比,M组结肠黏膜结构损伤,TNF-α、IL-6、INF-γ、TLR4、髓样细胞分化因子(MyD)88蛋白及p-核因子κB抑制蛋白(IκB)/IκB、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平显著较高,ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白水平显著较低(均P<0.05)。与M组相比,双路通脑方治疗可改善结肠黏膜结构,TNF-α、IL-6、INF-γ、TLR4、MyD88蛋白及p-IκB/IκB、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平明显降低,ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白水平显著较高(P<0.05)。肠道菌群分析显示,与S组相比,M组菌群多样性和丰度降低,在门水平,M组厚壁菌门丰度和F/B值明显升高,而拟杆菌门明显降低(P<0.05);在属水平,M组瘤球菌属、拟杆菌属等丰度明显较高,双歧杆菌属、乳杆菌属等丰度明显较低(P<0.05)。与M组相比,双路通脑方治疗可上调菌群多样性和丰度,明显提高拟杆菌门丰度,提高降低厚壁菌门丰度和F/B值,明显增加双歧杆菌属、乳杆菌属等丰度,明显降低艾克曼菌属等丰度(均P<0.05)。结论 双路通脑方可重塑肠道菌群,恢复肠道屏障,并抑制脑TLR4/NF-κB通路活化,实现对缺血性脑卒中大鼠的治疗作用。

急性脑梗死患者入院时Hcy、HMGB1、TLR4水平与单核巨噬细胞极化的相关性

目的探讨急性脑梗死(ACI)患者入院时同型半胱氨酸(Hcy)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)水平与单核巨噬细胞极化的相关性。方法选择2020年8月至2022年8月该院收治的107例ACI患者为病例组,另选取同期体检健康者50例为对照组,比较2组入院时血清Hcy、HMGB1、TLR4水平,比较2组单核巨噬细胞极化情况[M1型细胞比例、M2型细胞比例、M1/M2比值、M1型极化标志物(白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α)、M2型极化标志物(白细胞介素-10、转化生长因子-β)],分析ACI患者Hcy、HMGB1、TLR4水平与单核巨噬细胞极化的关系,分析ACI患者Hcy、HMGB1、TLR4水平与ACI患者预后的关系。根据ACI患者预后情况,将患者分为预后良好组和预后不良组,比较其血清Hcy、HMGB1、TLR4水平。通过受试者工作特征(ROC)曲线分析Hcy、HMGB1、TLR4对ACI预后的预测效能。结果与对照组比较,病例组血清Hcy、HMGB1、TLR4水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,病例组M1型细胞比例、M1/M2比值、白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α水平明显升高(P<0.05),白细胞介素-10、转化生长因子-β水平明显降低(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,ACI患者血清Hcy、HMGB1、TLR4水平与M1型细胞比例、M1/M2比值、白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α水平呈正相关(P<0.05),与白细胞介素-10、转化生长因子-β水平呈负相关(P<0.05)。与预后良好组比较,预后不良组血清Hcy、HMGB1、TLR4水平明显升高(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,Hcy、HMGB1、TLR4联合预测ACI预后的效能较高,其曲线下面积、灵敏度、特异度依次为0.840、77.80%、80.00%。结论Hcy、HMGB1、TLR4在ACI患者外周血中呈高表达,其水平与单核巨噬细胞极化及预后关系密切,有望成为ACI临床诊治的生物标志物。

拉考沙胺联合奥卡西平治疗局灶性癫痫的疗效及对脑电图频段功率、血清TLR-4、NF-κB水平影响

目的探讨拉考沙胺联合奥卡西平治疗局灶性癫痫的疗效及对患者脑电图频段功率、血清Toll样受体-4(TLR-4)、核转录因子-κB(NF-κB)水平影响。方法选取2022年1月至2023年2月本院收治的局灶性癫痫患者102例,根据随机数字表法分为基线组和试验组,每组51例。基线组采用奥卡西平治疗,试验组采用拉考沙胺联合奥卡西平治疗。两组均治疗6个月后评估疗效。比较两组患者治疗前、治疗6个月癫痫发作频率、脑电图频段功率,检测血清TLR-4、NF-κB水平。分析两组患者治疗6个月TLR-4、NF-κB水平与疗效的关系。统计两组患者治疗期间不良反应发生率。结果试验组治疗总有效率高于基线组(P<0.05)。治疗6个月,两组患者癫痫发作频率降低,且试验组低于基线组(P<0.05);两组α、β频段功率升高,δ、θ频段功率降低,且试验组变化幅度大于基线组(P<0.05)。治疗6个月,试验组、基线组TLR-4(r=-0.820、-0.666,P均<0.001)、NF-κB(r=-0.744、-0.643,P均<0.001)水平与疗效均呈负相关。治疗期间试验组不良反应发生率与基线组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论拉考沙胺联合奥卡西平治疗局灶性癫痫疗效显著,可有效改善患者脑电图频段功率,减少发作频率,且安全性有保障。

苦豆碱通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3通路改善香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞损伤

目的探究苦豆碱(Alo)对香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞损伤的作用及其可能的作用机制。方法16HBE人支气管上皮细胞经100 mL/L香烟烟雾提取物(CSE)和(50、100、200)μmol/L Alo共处理后,CCK-8法检测细胞活力,试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)活性;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)、Western blot法检测细胞凋亡,ELISA检测炎性因子水平;2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针和相关试剂盒检测氧化应激水平;Western blot法检测Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)通路相关蛋白表达水平。16HBE细胞经100 mL/L CSE和200μmol/L Alo共处理后,采用上述方法检测过表达TLR4对TLR4/NF-κB/NLRP3通路、细胞LDH活性、凋亡、炎症反应及氧化应激的影响。结果CSE暴露可降低16HBE细胞活力,增加LDH释放和细胞凋亡,增强炎症反应和氧化应激水平,且激活TLR4/NF-κB/NLRP3通路;经Alo处理后,细胞活性升高,LDH释放减少、凋亡降低、炎症减轻、氧化应激水平下降,且TLR4/NF-κB/NLRP3通路失活;TLR4过表达可逆转Alo处理对CSE诱导的16HBE细胞损伤的保护作用。结论Alo可通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3通路减轻CSE诱导的人支气管上皮细胞损伤。

樱黄素抑制TLR4/MyD88通路减轻肠上皮炎症反应改善小鼠克罗恩病样结肠炎

目的探讨天然植物化合物樱黄素(PRU)对肠上皮细胞炎症和屏障结构的作用及其对小鼠克罗恩病样结肠炎的影响。方法建立脂多糖(LPS)诱导的结肠类器官炎症损伤模型和2,4,6-三硝基苯磺酸溶液(TNBS)诱导的小鼠结肠炎模型,用于评估PRU对肠上皮炎症反应和肠屏障的影响。另外,使用网络药理学结合体内外研究分析PRU调控肠上皮炎症影响肠炎的分子机制。结果PRU干预可抑制LPS诱导的结肠类器官中促炎介质肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β的释放以及改善TNBS诱导的小鼠结肠炎症状(体质量下降、疾病活动指数和炎症评分升高);同时,PRU促进LPS诱导的小鼠结肠类器官TNBS小鼠肠上皮细胞间紧密连接蛋白闭锁小带蛋白1(ZO-1),密封蛋白1(claudin-1)的表达和改善移位,同时保护肠屏障结构。PRU可靶向结合Toll样受体4(TLR4)并抑制TLR4/髓样分化因子88(MyD88)信号通路活化。结论PRU可通过靶向拮抗TLR4/MyD88信号的激活,抑制肠上皮细胞炎症和保护肠屏障损伤从而改善克罗病样肠炎。

基于TLR4炎症信号通路探讨针灸对颈性眩晕大鼠中缝背核神经元细胞活性及血管活性物质的影响

目的基于Toll样受体(TLR)4炎症信号通路探讨针灸对颈性眩晕大鼠中缝背核神经元细胞活性及血管活性物质的影响。方法选取40只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常(N)组、模型(M)组、针灸(A)组、西比灵(W)组,每组10只,M、A、W组采用颈椎失稳法建立颈性眩晕模型,N组不建立该模型,建模成功后,对A组给与针灸治疗,对W组灌胃盐酸氟桂利嗪(西比灵)0.5 mg/kg,N、M组灌胃同体积生理盐水,记录各组一般情况,平衡木实验测定行为学,TUNEL法测定缝背核神经元细胞活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血管活性物质,Western印迹检测TLR4蛋白表达。结果N组皮毛光泽,活动自如,一般情况均正常,对外界刺激也反应灵敏,M组皮毛光泽可见降低,且活动明显受限,颈部活动受限最为明显,进食、进水量明显减少,对外界刺激反应可见明显降低,而与M组相比,A、W组一般情况明显改善,饮食逐渐恢复正常,颈部活动也明显恢复;与N组相比,M组平衡木得分显著降低(P<0.05);与M组比较,A、W两组平衡木得分显著升高(P<0.05);W组与A组相比无明显差异(P>0.05);与N组相比,M组中缝背核神经元细胞凋亡显著升高(P<0.05);与M组比较,A、W两组中缝背核神经元细胞凋亡显著降低(P<0.05);W组与A组相比无明显差异(P>0.05);与N组相比,M组血浆中降钙素基因相关肽(CGRP)水平显著降低,内皮素(ET)-1、血栓素(TXB)2、神经肽(NP)Y水平显著升高(P<0.05);与M组比较,S、W两组血浆中CGRP水平显著升高,ET-1、TXB2、NPY水平显著降低(P<0.05);W组与A组相比无明显差异(P>0.05);与N组相比,M组脑组织中TLR4蛋白表达显著升高(P<0.05);与M组比较,A、W两组脑组织中TLR4蛋白表达显著降低(P<0.05);W组与A组相比无明显差异(P>0.05);T组与W组相比无明显差异(P>0.05);U组比T组明显降低(P<0.05)。结论针灸可显著抑制颈性眩晕大鼠中缝背核神经元细胞活性并有效调控血管活性物质水平,其作用机制可能与抑制TLR4炎症信号通路有关。

脑蛋白水解物联合长春西汀通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路治疗重症高血压性脑出血的疗效及机制

目的 探究脑蛋白水解物联合长春西汀通过Toll样受体(TLR)4/髓样分化因子(MyD)88/核因子(NF)-κB信号通路治疗重症高血压性脑出血的疗效及机制。方法 选择102例重症高血压性脑出血患者随机分为两组各51例,对照组给予复方丹参液治疗,实验组给予脑蛋白水解物联合长春西汀治疗。于治疗前后分别检测患者临床指标变化、神经功能评分;检测血清氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)变化;检测血清内皮功能指标人内皮素(ET)-1,血管内皮生长因子(VEGF)、神经生长因子(NGF)变化;检测TLR4/MyD88信号通路、TLR4、MyD88和核因子(NF)-κB水平。结果 治疗前两组临床指标、神经功能评分、血清SOD、GSH-Px、MDA、ET-1、VEGF、NGF、TLR4、MyD88、NF-κB水平无显著差异(P>0.05);治疗后,与对照组相比,实验组临床相关指标、美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分降低,格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分和Barthel指数评分升高,SOD和GSH-Px水平升高,MDA、ET-1水平降低,VEGF和NGF水平升高,TLR4、MyD88、NF-κB水平降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 脑蛋白水解物联合长春西汀可改善重症高血压性脑出血患者神经功能,其机制与降低氧化损伤和TLR4/MyD88/核因子(NF)-κB信号通路的调控有关。

有氧运动对CAP大鼠前列腺组织miR-155表达、TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨有氧运动对慢性非细菌性前列腺炎(CAP)大鼠前列腺组织miR-155表达、Toll样受体(TLR)4/核转录因子(NF)-κB信号通路的影响。方法雄性健康SD大鼠随机分为正常对照组(正常组)、CAP模型对照组(模型组)、游泳运动观察组(运动组),每组10只,注射消痔灵进行大鼠造模,模型形成期7 d,后运动组进行50 min/(次·d)的游泳运动,每周运动6 d,持续28 d,正常组和模型组不进行任何运动,自由活动取食;末次运动结束后2 h处死大鼠,采用ELISA检测前列腺组织白细胞介素(IL)-8、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α表达,Western印迹检测TLR4、NF-κB P65蛋白相对表达,实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-155表达,观察各组前列腺组织病理学改变。结果28 d游泳运动结束后,与正常组比较,模型组和运动组前列腺组织内IL-8、IL-6、TNF-α、TLR4、NF-κB P65和miR-155表达均显著升高(P<0.05);与模型组比较,运动组上述各项观察指标均显著降低(P<0.05);相关分析显示,TLR4、NF-κB P65与IL-8、IL-6、TNF-α表达呈正相关,miR-155与TLR4、NF-κB P65、IL-8、IL-6、TNF-α表达呈正相关(均P<0.01);病理观察显示,正常组前列腺组织学观察未见异常改变,模型组前列腺组织内可见腺体上皮细胞及纤维组织明显增生,间质中淋巴细胞等慢性炎症细胞浸润;与模型组比较,运动组前列腺腺体上皮细胞轻度增生,间质轻度纤维化,慢性炎症细胞浸润现象明显好转。结论有氧运动能够对CAP大鼠炎症起到缓解作用,其作用机制可能与miR-155调控TLR4/NF-κB信号通路有关。

壳聚糖影响动静脉内瘘模型兔血管重塑及TLR4/NF-κB信号通路改善血流动力学的机制

目的 观察壳聚糖对动静脉内瘘模型兔血管重塑及Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB信号通路的影响,初步探讨壳聚糖改善血流动力学的机制。方法 选取48只新西兰兔建立动静脉内瘘模型,术后在血管吻合部位涂以不同剂量(0、1、5、25μg/ml)壳聚糖溶液,分为模型对照组、低剂量壳聚糖组、中剂量壳聚糖组和高剂量壳聚糖组,每组12只,另取12只作为正常对照组,8 w后检测相关指标。苏木素-伊红(HE)染色观察血管组织形态学,Western印迹检测血管组织TLR4、髓样分化因子(MyD88)、NF-κB、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达量,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清TLR4、MyD88、NF-κB、PCNA蛋白及mRNA表达。测定各组平均动脉压(MAP)和中心静脉压(CVP)。结果 各组TLR4、MyD88、NF-κB、PCNA蛋白及mRNA表达量均有明显差异(P<0.05)。TLR4蛋白及mRNA表达量中,建模的各组明显高于正常对照组,模型对照组高于中、高剂量壳聚糖组(P<0.05)。MyD88、NF-κB、PCNA蛋白及其mRNA表达量中,低、高剂量壳聚糖组和模型对照组明显高于正常对照组(均P<0.05);模型对照组MyD88、NF-κB、PCNA蛋白表达量明显高于中剂量壳聚糖组(均P<0.05)。低、高剂量壳聚糖组MyD88蛋白表达量明显高于中剂量壳聚糖组(P<0.05);模型对照组MyD88、NF-κB蛋白表达量明显高于低、高剂量壳聚糖组(P<0.05)。模型对照组MyD88、NF-κB和PCNA mRNA明显高于低、中、高剂量壳聚糖组(P<0.05);低、高剂量壳聚糖组MyD88 mRNA表达量明显高于中剂量壳聚糖组(P<0.05)。TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达量与PCNA蛋白表达量呈正相关(r=0.471、0.455、0.351;P<0.05),TLR4 mRNA表达量与PCNA mRNA表达量呈正相关(r=0.395;P<0.05)。各组MAP和CVP差异均有统计学意义(P<0.001),低、高剂量壳聚糖组和模型对照组MAP和CVP均明显高于中剂量壳聚糖组和正常对照组(P<0.05),且模型对照组明显高于低、高剂量壳聚糖组(P<0.05)。结论 适宜剂量壳聚糖可以影响血管重塑,有效改善血流动力学,其作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路异常活化有关。

miR-27a-3p介导TLR4/TRIF信号通路对脑出血大鼠神经的保护作用

目的分析miR-27a-3p介导Toll样受体(TLR)4/β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)信号通路对脑出血大鼠神经的保护作用。方法选取80只SD级雄性大鼠,20只作为正常组,其余60只建立大鼠脑出血模型后随机分为模型组、上调组、下调组各20只,做miR-27a-3p转染,鉴定miR-27a-3p转染率、脑组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β含量、神经功能缺损情况、TLR4/TRIF信号通路蛋白表达情况。结果与模型组相比,上调组miR-27a-3p表达量升高,下调组miR-27a-3p表达量降低,具有统计学差异(P<0.05),证明miR-27a-3p转染成功。相比于正常组,模型组、上调组、下调组TNF-α、IL-1β含量、神经功能缺损评分、TLR4、TRIF、TRAM含量升高,具有统计学差异(P<0.05);相比于模型组,下调组TNF-α、IL-1β含量、神经功能缺损评分、TLR4、TRIF、TRAM含量升高,上调组TNF-α、IL-1β含量、神经功能缺损评分、TLR4、TRIF、TRAM含量降低,具有统计学差异(P<0.05);且下调组TNF-α、IL-1β含量、神经功能缺损评分、TLR4、TRIF、TRAM含量高于上调组,具有统计学差异(P<0.05)。结论miR-27a-3p可介导TLR4/TRIF信号通路对脑出血大鼠神经起到保护作用。减少大鼠脑内炎症反应。

基于HMGB1/TLR4信号通路使用迷走神经刺激治疗难治性癫痫的效果

目的探究基于高迁移率族蛋白(HMG)B1/Toll样受体(TLR)4信号通路使用迷走神经刺激(VNS)治疗难治性癫痫大鼠的效果。方法将40只大鼠随机分为空白对照组(A组)、难治性癫痫模型组(B组)、假刺激组(C组)、VNS组(D组)每组各10只。A组、B组不作任何刺激处理,C组左颈部植入VNS电极,但不刺激通电。D组左颈部植入VNS电极进行通电刺激。对比分析各组海马CA3区状况、每周癫痫发作次数、海马组织存活锥体细胞数、阳性细胞数、海马区单核趋化蛋白(MCP)-1、层黏连蛋白(LAP)、P糖蛋白(P-gp)灰度比值,HMGB1、TLR4蛋白表达。结果与A组相比,B组、C组海马CA3区细胞数量最少,且出现形态的严重损伤,核仁溶解、缩小、模糊不清,核断裂现象严重;D组海马CA3区细胞数量大幅度增加、形态趋于正常,核仁状态恢复良好。刺激结束1 w后,与B、C组相比,D组刺激结束后癫痫发作频率显著减少(P<0.05)。与A组相比,B组、C组海马组织存活锥体细胞数明显减少、海马组织阳性细胞数明显增加(P<0.05),与B、C组比较,D组海马组织存活锥体细胞数明显增加,海马组织阳性细胞数明显减少(P<0.05)。与A组相比,B组、C组海马区MCP-1、LAP、P-gp灰度比值、HMGB1、TLR4表达明显增加(P<0.05);与B、C组比较,D组海马区MCP-1、LAP、P-gp灰度比值、HMGB1、TLR4表达明显降低(P<0.05)。结论VNS可抑制难治性癫痫的发作,保护海马神经元,调节癫痫大鼠海马CA3区的基因表达;同时,通过抑制HMGB1/TLR4信号通路活性逆转耐药基因,进而调节神经功能,为难治性癫痫的治疗提供了新方向。

抑制Toll样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)通路加重鲍曼不动杆菌感染大鼠的炎症

目的利用Toll样受体4(TLR4)抑制剂TAK-242处理大鼠,检测鲍曼不动杆菌(A.baumannii)感染过程中TLR4的作用。方法将健康雄性SD大鼠分为正常对照组、TAK-242处理组、A.baumannii接种组以及TAK-242和A.baumannii联合处理组。TAK-242处理组大鼠通过尾静脉注射TAK-242(1 mg/kg),感染大鼠通过气道接种方法接种A.baumannii。于接种后72 h,取肺组织匀浆后接种至LB培养基,进行肺组织细菌计数;HE染色观察肺组织炎症变化。收集支气管肺泡灌洗液(BALF),ELISA检测BALF中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平。分离外周血单个核细胞(PBMC),Western blot法检测PBMC中磷酸化核因子κBp65(p-NF-κBp65)的蛋白水平。结果免疫功能正常的大鼠感染A.baumannii 72 h后,肺内细菌基本被清除,而TAK-242处理的大鼠接种A.baumannii后,肺中细菌计数显著增加;正常大鼠感染后,肺部有轻微炎症,TAK-242处理的大鼠接种A.baumannii后肺部炎症较为明显;TAK-242处理的大鼠接种A.baumannii后,TNF-α和IL-6增加幅度小于正常感染组大鼠;正常大鼠感染A.baumannii 72 h后,PBMC中p-NF-κBp65蛋白水平升高,而经过TAK-242处理的大鼠感染后,PBMC中p-NF-κBp65的水平升高不明显。结论抑制TLR4/NF-κB通路引起大鼠A.baumannii感染加重。

基于TLR4/NF-κB信号通路探讨槲皮素对直肠癌模型大鼠炎症反应和应激反应的影响

目的探究槲皮素介导Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB信号通路对直肠癌模型大鼠炎症反应和应激反应的影响。方法饲养SD大鼠,二甲基肼构建直肠癌模型,用不同浓度的槲皮素(25、50、75 mg/kg)处理7 d,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清中白细胞介素(IL)-1β,IL-6,肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平,苏木素-伊红(HE)染色检测组织病理学变化,qRT-PCR和Western印迹检测TLR4、NF-κB p65的表达,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;结果与NC组相比,Model组炎症因子IL-1β,IL-6,TNF-α表达显著升高;结肠组织上皮细胞不规则,结构被破坏;TLR4和NF-κB p65 mRNA和蛋白表达显著升高;G0/G1期细胞明显减少,S期细胞明显增多,细胞凋亡率明显减少(P<0.05);与Model组相比,槲皮素处理各组炎症因子IL-1β,IL-6,TNF-α显著降低,组织病理结构稍微有所改善,TLR4和NF-κB p65 mRNA和蛋白表达明显降低,G0/G1期细胞明显增多,S期、G2/M期细胞明显减少,细胞凋亡率明显增多(P<0.05),以上病理指标随着槲皮素浓度的增大而改善。结论槲皮素可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路激活,抑制直肠癌模型大鼠的炎症反应和应激反应。

婴幼儿呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎Toll样受体4(TLR4)的检测及分析

目的:观察婴幼儿呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎急性期外周血单核细胞表面TLR4的表达以及TLR4表达和急性感染期疾病严重程度之间的关联,并对RSV感染的发病机制作讨论。方法:应用直接免疫荧光法对2374例急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物标本进行RSV病毒抗原检测,对其中40名婴幼儿鼻咽部脱落上皮细胞RSV阳性患儿,用流式细胞仪检测其外周血单核细胞表面TLR4的表达,同时设30名同龄健康儿童为对照组。结果:1岁以内患儿RSV阳性率为50.89%,男性阳性比例高于女性,但阳性率无显著性差异(χ2=2.106,P>0.05);患儿组TLR4为87.57%±7.49%,对照组TLR4为54.92%±4.21%,两者存在显著性差异(P<0.05)。结论:①RSV是婴幼儿期间的急性下呼吸道感染的主要病原体。②RSV阳性肺炎感染患儿早期外周血单核细胞表面TLR4表达明显升高。

Toll样受体2(TLR2)激动剂Pam3Csk4预处理对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌攻击小鼠的保护作用

目的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染日趋严重,免疫防治被寄予厚望。本研究旨在探索Toll样受体2(TLR2)激动剂Pam3Csk4预处理小鼠对MRSA攻击的保护作用。方法每只昆明小鼠用(25、50、100)μg Pam3Csk4尾静脉预处理12、24 h,小鼠尾静脉注射7×1010集落形成单位(CFU)/kg的MRSA(ATCC43300)。小鼠生存率按前24 h每2 h观察1次,后续每6 h记录小鼠存活情况,共观察1周。感染MRSA(3×108CFU/只)6 h后,菌落计数法观察肝、脾和肾等器官对MRSA的清除能力;3×108CFU/只MRSA攻击6、12、24 h后,ELISA检测小鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、γ干扰素(IFN-γ)和IL-10含量,实时荧光定量PCR(q PCR)检测MRSA攻击后小鼠脾脏TNF-α、IL-6、IFN-γ和IL-10的mRNA水平,以及Pam3Csk4预处理小鼠24 h后,CXC趋化因子配体1(CXCL1)和Fcγ受体Ⅲ(FcγRⅢ)表达量。结果 100μg Pam3Csk4预处理能显著提高MRSA攻击小鼠的生存率,与Pam3Csk4预处理时间呈时间依赖关系;MRSA攻击小鼠的生存时间与Pam3Csk4预处理剂量相关,50μg以上剂量Pam3Csk4预处理能显著提高MRSA攻击小鼠生存率至70%以上;与对照组比较,Pam3Csk4预处理小鼠血清中TNF-α在6 h和12 h均显著降低,24 h后2组间无显著差别;IL-6在处理6 h内显著降低,12 h和24 h后无显著差异,IFN-γ在24 h内均显著降低,而IL-10则无显著变化;Pam3Csk4预处理24 h后,脾脏中CXCL1和FcγRⅢ表达量均显著高于生理盐水组。结论 Pam3Csk4预处理对MRSA攻击小鼠具有保护作用。

miR-146调控TLR4/NF-κB通路减少卵泡颗粒细胞凋亡及干预卵巢早衰中的机制研究

目的探究miR-146通过调控Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)减少卵泡颗粒细胞凋亡和干预卵巢早衰(premature ovarian failure,,POF)的机制。方法野生小鼠实验:60只SPF级C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=30)和POF组(n=30)。POF组建立卵巢早衰模型,造模后15天qPCR检测2组小鼠卵巢组织中miRNA-146表达水平;基因敲除鼠实验:40只C57BL/6小鼠和20只miR-146敲除小鼠分为三组:对照组(n=20)、野生型POF组(n=20)和miR-146敲除POF组(n=20),野生型POF组和miR-146敲除POF组建立POF模型,建模后15天HE染色分析各组小鼠卵巢组织病理情况及原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和闭锁卵泡数,ELISA检测各组小鼠卵巢组织炎症信号通路分子TLR,NF-κB,肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)的表达水平;Western blot检测卵巢组织凋亡蛋白BCL2-Associated X蛋白(Bax),B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl2)和TLR4信号通路蛋白TLR4,NF-κB表达水平。结果野生鼠实验表明与对照组相比,POF组小鼠卵泡中miR-146表达水平下调(0.51±0.14 vs 1.52±0.21),差异具有统计学意义(t=7.338,P<0.01);基因敲除鼠实验表明:与对照组相比,野生型POF组和miR-146敲除POF组原始卵泡(9.43±2.03,6.43±1.60 vs 16.82±2.11)、初级卵泡(6.15±1.11,5.01±1.10 vs 8.88±1.12)、次级卵泡(5.11±1.71,4.01±1.26 vs 7.11±1.34)均降低,闭锁卵泡(10.17±1.41,11.46±1.96 vs 7.18±1.64)升高,差异具有统计学意义(F=7.787,8.214,9.726,7.811,均P<0.01)。与对照组相比,野生鼠POF组和miR-146敲除POF组小鼠卵巢组织TLR4(68.18±5.92pg/ml,91.11±16.34 pg/ml vs 24.81±2.81 pg/ml),NF-κB(74.19±8.11 pg/ml,88.11±16.71pg/ml vs 68.18±5.92 pg/ml),TNF-α(72.81±2.10 pg/ml,94.31±2.26 pg/ml vs 28.07±3.67 pg/ml)和IL-6(69.19±7.11,81.11±16.34 vs 19.43±10.81 pg/ml)分泌显著升高,差异均有统计学意义(F=6.281,7.264,8.724,6.817,均P<0.01);与对照组相比,野生鼠POF组和miR-146敲除POF组小鼠卵巢组织Bax蛋白表达水平降低(1.18±0.19.0.61±0.14 vs1.81±0.21),Bcl2蛋白表达升高(0.59±0.05,0.91±0.05 vs 0.58±0.02),TLR4(1.10±0.12,0.41±0.04 vs 1.13±0.11)和NF-κB(0.81±0.02,0.31±0.06 vs 0.87±0.27)降低,差异均有显著性统计学意义(F=7.235,6.714,7.612,7.737,均P<0.01)。结论miR-146具有减少卵泡颗粒细胞凋亡的作用,其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路的调控和抑制炎症因子的释放相关。

miR-18a通过阻断TLR4/NF-κB通路减轻小鼠过敏性鼻炎的炎症和组织损伤

目的探究微小RNA-18a(miR-18a)在小鼠过敏性鼻炎发病过程中的作用。方法22只BALB/c小鼠被随机分为空白组、模型组及miR-18a组。模型组和miR-18a组小鼠采用腹腔注射卵清蛋白(OVA)混悬液的方法制备过敏性鼻炎模型,miR-18a组小鼠同时给予过表达miR-18a的慢病毒载体质粒。采用行为学评分及HE染色评价各组小鼠过敏症状及形态学变化,ELISA检测血浆白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,免疫荧光组织化学染色检测小鼠鼻黏膜组织CD45^(+)细胞浸润情况,流式细胞术检测鼻腔灌洗液CD45^(+)细胞数量,荧光定量PCR检测鼻黏膜组织IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达水平,Western blot法检测鼻黏膜组织Toll样受体4(TLR4)、核因子κB p65(NF-κB p65)、NF-κB抑制物α(IκBα)、磷酸化的IκBα(p-IκBα)的蛋白表达。结果与空白组相比,模型组小鼠血浆IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著增高,鼻黏膜组织及鼻腔灌洗液CD45^(+)细胞数量增多,鼻黏膜组织IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平及TLR4、NF-κB p65、p-IκBα表达水平升高;与模型组相比,miR-18a组小鼠血浆中IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著降低,鼻黏膜组织及鼻腔灌洗液CD45^(+)细胞数量减少,鼻黏膜组织IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平及TLR4、NF-κB p65、p-IκBα表达水平降低。结论miR-18a能够通过阻断TLR4/NF-κB通路抑制小鼠过敏性鼻炎的发生和发展。

白藜芦醇调控TLR4/NF-κB信号通路对溃疡性结肠炎大鼠炎症反应的影响

目的探讨白藜芦醇调控Toll样受体(TLR)4/核转录因子(NF)-κB信号通路对溃疡性结肠炎大鼠炎症反应的影响。方法选取50只SD大鼠,随机分为对照组、模型组、白藜芦醇低、中、高剂量组。观察大鼠结肠组织病理学变化;观察大鼠结肠黏膜大体评分和病理组织学;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、IL-10表达;采用Western印迹和PCR检测大鼠结肠组织TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白及基因表达,并利用分子对接技术对白藜芦醇与TLR4/NF-κB信号通路的结合进行验证。结果与空白组相比,模型组病理评分、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、TLR4和NF-κB蛋白及mRNA水平较高,IL-10水平较低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,白藜芦醇各剂量组TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4和NF-κB蛋白及mRNA水平较低,IL-10水平较高,差异有统计学意义(P<0.05);分子对接验证白藜芦醇与TLR4、NF-κB分子的结合能分别为-6.37、-5.31。结论白藜芦醇可以减轻溃疡性结肠炎大鼠的炎症反应,其机制可能是通过调控TLR4/NF-κB信号通路实现的。

肠黏膜TLR4/NF-κB通路激活与伪无菌IgA肾病小鼠肾损害有关

目的探讨肠黏膜Toll样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)信号通路对伪无菌IgA肾病(IgAN)小鼠肾脏损害的影响。方法C57BL/6小鼠随机分为实验组(伪无菌小鼠造模组)、对照组(正常小鼠造模组)、伪无菌小鼠空白组、正常小鼠空白组。采用四联抗生素灌胃,每天1次,连续14 d,构建伪无菌小鼠。在伪无菌小鼠的基础上,采用牛血清白蛋白(BSA)联合葡萄球菌肠毒素(SEB)建立IgAN模型,通过免疫荧光染色及过碘酸希夫(PAS)染色观察肾组织病理形态学变化,ELISA分析肠黏膜屏障损伤指标脂多糖(LPS)、可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)和右旋乳酸(D-LAC)的含量,生化分析检测24 h尿蛋白、血肌酐及尿素氮,反转录PCR及Western blot法检测Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子κB(NF-κB)mRNA及蛋白水平。结果伪无菌IgAN小鼠的肾脏损伤程度较IgAN小鼠更严重,并且伪无菌IgAN小鼠的肠道黏膜LPS、sICAM-1和D-LAC表达显著升高。此外,在IgAN伪无菌小鼠的肠组织中,TLR4、MyD88、NF-κB水平的表达均上调。结论肠道菌群紊乱导致肠黏膜屏障损伤诱导TLR4信号通路的激活介导IgAN的肾脏损伤。