C-反应蛋白的构象变化和动脉粥样硬化关系的研究进展

炎症在动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)的发展中具有重要作用。C-反应蛋白(C-reactive protein, CRP)是典型的急性期蛋白质和炎症标志因子,大量的研究表明, CRP不仅是心血管疾病(cardiovascular disease, CVD)的风险预测因子,而且还有可能是CVD的调控因子。CRP主要存在两种异构体,即五聚体CRP (pentameric C-reactive protein, pCRP)和单体CRP (monomeric C-reactive protein, mCRP)。本文对已有的研究成果进行了总结与分析,发现CRP的功能活性与其构象相关,并阐述了在AS和局部炎症中CRP的变构以及其发挥作用的机制,可为全面深入了解CRP在AS中的作用及其后续相关研究提供建议与参考。

C反应蛋白单体的制备,鉴定及其初步应用研究

C反应蛋白单体参与了机体的炎性反应,在多种无菌性炎症及动脉粥样硬化形成过程中起着重要作用,因此获得高纯度具有免疫原性的C反应蛋白单体(Monomeric CRP,mCRP)对于mCRP的诊断及指导靶向mCRP的治疗具有重要的临床应用价值。研究将CRP五聚体(Pentameric CRP,pCRP)在解离缓冲液(40 mmol/L Tris+500 mmol/L NaCl+2 mmol/L EDTA+8 mol/L脲)中解离60 d后采用Superdex 200 Increase10/300G分子筛分离解离产物,利用SDS-PAGE电泳及免疫印迹(WB)鉴定mCRP蛋白的纯度及免疫原性,化学发光免疫分析法研究急性心肌梗死患者血清样品中mCRP与pCRP交叉反应性;SDS-PAGE及WB结果显示pCRP在解离缓冲液中解离60 d后可部分解离为mCRP,进一步采用分子筛分离后分段收集分离产物,SDS-PAGE及WB显示解离获得的mCRP在相对分子质量约23000位置见单一明显条带,提示采用解离+分子筛方法可获得高纯度具有免疫原性的mCRP,随后作者采用化学发光免疫分析法建立的检测体系提示获得的mCRP抗原与mCRP单克隆抗体具有良好的反应性,交叉反应试验提示mCRP与pCRP不具有交叉反应性。本研究提示采用解离法结合分子筛技术可以获得具有免疫原性高纯度的mCRP蛋白,并可用于临床mCRP的定量检测。