IgA肾病患者血清IgA_1的测定和分析

目的 测定IgA肾病血清IgA1 、多聚体IgA1 和单体IgA1 水平 ,探讨IgA肾病发病机制。方法 通过Jacalin亲和层析对IgA肾病患者 (43例 )血清分离 ,得到Jacalin结合蛋白 ,测定总IgA1 浓度 ;将Jacalin结合蛋白用排阻层析法进一步分离 ,测定多聚体IgA1 和单体IgA1 水平及其比值。结果 IgA肾病组血清总IgA1 [(0 .72± 0 .2 0 )mg/ml]、多聚体IgA1 [(0 .0 97± 0 .0 4 2 )mg/ml]和单体IgA1 [(0 .42 4± 0 .1 50 )mg/ml]水平均高于健康对照 (P <0 .0 0 1 ) ;多聚体IgA1 与单体IgA1 的比值对照组无差异 (P >0 .0 5)。结论 IgA肾病患者血清中IgA1 的两种形式均有所增加 。

重组抗SARS-CoV-2 IgA单克隆抗体的优化表达及其初步鉴定

目的制备针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)IgA单克隆抗体,对其表达条件进行优化以提高表达量,并初步探讨IgA抗体在抗SARS-CoV-2中的效应。方法将编码IgA1-F61抗体序列的质粒与聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)转染试剂混合后转染EXPi293F^(TM)细胞,瞬时表达抗体蛋白;通过优化重链(heavy chain,Hc)、轻链(light chain,Lc)、J链(joining chain,Jc)比例、质粒与PEI比例、转染后收获时间确定单体IgA1(monomeric IgA1,mIgA1)-F61及二聚体IgA1(dimeric IgA1,dIgA1)-F61在EXPi293F^(TM)细胞中的最佳培养条件以及最佳表达量。将转染后上清经亲和层析纯化后,BCA法测定浓度,SDS-PAGE及体积排阻高效液相色谱(size exclusion chromatography-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)法分析抗体表达完整性及纯度,假病毒中和试验检测抗体中和活性。结果当He与Lc比例为1:2、质粒与PEI比例为1:3、转染后5d收获上清时,mIgA1-F61最高表达量为123.45μg/mL,纯化后抗体纯度达95%以上;Hc:Lc:Jc为1:2:1时,可获得最大纯度的dIgA1-F61,达90%以上。针对OmicronBA.4/5的假病毒中和试验结果显示,dIgA1-F61呈现优于IgG-F61的中和活性,其最大半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))降低了4倍左右。结论成功表达了重组抗SARS-CoV-2单克隆抗体mIgA1-F61和dIgA1-F61,纯度较高,且dIgA1在体外展现出优于IgG的中和活性。