梯棱羊肚菌Morchella importuna对重金属离子的耐受性研究

以加入6种不同浓度的重金属离子的培养基对梯棱羊肚菌Morchella importuna进行培养的方法,研究其对重金属离子的耐受性。以平板进行培养,测量和计算菌丝平均生长速率和生长促进率,绘制生长曲线获取菌丝生长最佳耐受浓度;采用定性方法对气生菌丝浓密、菌核大小和数量进行描述,获得菌核生成最佳耐受浓度。结果显示:在试验浓度内梯棱羊肚菌对Cr^(6+)、Mn^(2+)、Pb^(2+)、Mo^(6+)、Cu^(2+)具有较强的耐受性,这些重金属离子促进了羊肚菌菌丝生长,而对Cd^(2+)耐受性差,低浓度抑制菌丝生长。促进菌丝生长最适浓度分别为Cr^(6+)100.0mg/L、Mn^(2+)100.0mg/L、Cd^(2+)5.0mg/L、Pb^(2+)50.0mg/L、Mo^(6+)20.0mg/L、Cu^(2+)100.0mg/L,促进菌核生成最适浓度分别为Cr^(6+)50.0mg/L、Mn^(2+)100.0mg/L、Cd^(2+)5.0mg/L、Pb^(2+)20.0mg/L、Mo^(6+)10.0mg/L、Cu^(2+)100.0mg/L。Cd^(2+)抑制菌丝生长临界浓度为介于20.0mg/L与50.0mg/L之间。

赖氨酸修饰对梯棱羊肚菌黑色素结构和理化特性的影响

为了进一步提高梯棱羊肚菌黑色素的提取率及溶解性,该研究采用单因素、Plackett-Burman试验、响应面试验对纤维素酶-超声波协同提取梯棱羊肚菌黑色素的提取工艺进行优化。通过赖氨酸修饰,并对修饰前后的梯棱羊肚菌黑色素进行结构表征、理化性质及稳定性分析。结果表明,在NaOH浓度为1.54 mol/L,纤维素酶添加量为20 mg/g,纤维素酶酶解时间为78.6 min,料液比为1:30,酶解温度为40℃,超声时间为80 min条件下提取的梯棱羊肚菌黑色素最优。未修饰的梯棱羊肚菌黑色素不溶于水,色价值为480.24,修饰后的黑色素溶解度为1 016 g/L,色价值为1 771.18,比未修饰的黑色素在溶解性、色价值方面均有所提高。此外,在不同的温度、光照、pH条件下,修饰前后的梯棱羊肚菌黑色素均比较稳定。以上研究结果为梯棱羊肚菌黑色素的高效提取及其产品的开发利用奠定了理论基础。

梯棱羊肚菌种质资源数量性状变异及概率分级

对49株梯棱羊肚菌(Morchella importuna)子实体数量性状进行统计分析和概率分级,结果表明:6个子实体数量性状(菌盖的长度、宽度、长度/宽度、厚度以及菌柄的长度、直径)的变异系数范围为18.12%~29.96%;对数量性状分别采用S-W法和S系数与K系数的Z检验进行正态性检验,6个数量性状基本符合正态分布;对符合正态性分布的数量性状进行概率分级,获得数量性状的分级标准,作为羊肚菌子实体数量性状的评价指标。

栽培梯棱羊肚菌对上海设施蔬菜大棚土壤理化性质和酶活力的影响

为了探讨设施蔬菜大棚中羊肚菌(Morchella)-蔬菜轮作的可行性,测定在羊肚菌生长过程中的菌丝生长期(M-1)、子实体生长期(M-2)和采收结束期(M-3)表层和浅层土壤pH、养分含量和酶活力。结果表明:与对照组相比,实验组不同时期表层土壤的pH均上升,浅层土壤中pH在M-1和M-2时期无显著变化,在M-3时期pH显著低于对照组;与对照组相比,实验组不同时期均提高了土壤表层和浅层的有机质含量,在M-1时期表层和浅层土壤分别增加了25.30%和51.33%;栽培羊肚菌对土壤速效氮和全磷含量影响较大,其中除浅层土壤的M-3时期外,实验组速效氮含量都显著高于对照组,全磷含量在不同时期都显著高于对照组;在羊肚菌生长的过程中,不同时期土壤蔗糖酶和脲酶活力都显著高于对照组,而过氧化氢酶和多酚氧化酶活力在M-1时期都显著高于对照组。

一种羊肚菌源多肽MIP-16的分离纯化及其神经保护活性

分离纯化人工栽培的梯棱羊肚菌子实体多肽(MIP-16),对其结构和神经保护活性进行研究。采用磷酸盐缓冲液提取,分子排阻色谱分离,反相高效液相色谱纯化获得梯棱羊肚菌子实体多肽,通过液相色谱-质谱连用技术完成氨基酸序列鉴定。构建6-羟基多巴胺处理后引起凋亡的PC12细胞模型,验证MIP-16对PC12细胞的保护作用。结果显示:MIP-16由16个氨基酸组成,相对分子质量为1762 Da,氨基酸组成序列为Thr-Ile-Thr-Leu-Glu-Val-Glu-Ser-Ser-Asn-Ile-Thr-Asn-Asp-Val-Lys。细胞实验发现,MIP-16能够抑制PC12细胞丙二醛(MDA)产生,降低活性氧(ROS)水平,调节Bcl-2和Bax的比例,并降低Caspase蛋白的表达。MIP-16通过细胞线粒体途径抑制PC12细胞凋亡,具有神经保护活性,可作为一种辅助治疗帕金森综合症的药物开发。

人工栽培羊肚菌的鉴定

羊肚菌人工栽培已成功,但栽培的羊肚菌分类地位不明确。本文对人工栽培的羊肚菌进行了形态特征描述和ITS rDNA序列分析。结果表明,人工栽培羊肚菌为梯纹羊肚菌Morchella importuna,运用分子生物学技术进行鉴定,并与GenBank中下载的羊肚菌属种建立了系统发育树。

不同生态环境对羊肚菌非挥发性呈味物质的影响

本文对不同生态环境下(包括平原、高原、丘陵、山区)羊肚菌样品的非挥发性呈味物质(5′-核苷酸、呈味氨基酸、可溶性糖、糖醇、有机酸)进行了分析,并通过主成分和聚类分析对其进行区分和聚类。结果表明,不同生态环境羊肚菌样品中检测到8种可溶性糖、1种糖醇及8种有机酸,种类丰富,含量不同,不存在一定规律性;5′-核苷酸种类齐全,鲜味氨基酸含量丰富,等鲜浓度处于第二水平(100 g MSG/100 g<EUC<1000 g MSG/100 g),鲜味明显;通过主成分和聚类分析将样品分为2种类群,相似生境驯化栽培样品聚为1类。川西高原样品CX1、CX2、CX3和丘陵地区样品QL10、QL11、QL12分别聚为1类,成都平原和川东山区样品PY7、PY8、CD4、CD5、CD6、PY9较为相似,聚为1类。该研究结果可为不同产区样品驯化栽培、样品采集提供理论依据,从而指导后期生产加工。

5株梯棱羊肚菌菌丝生长特性研究

以5株梯陵羊肚菌(Morchella importuna)菌株为材料,研究温度、pH、碳源和氮源对菌丝生长速度和菌核形态特征的影响,筛选适宜培养各菌株菌丝体的条件.试验结果表明,各菌株间的菌丝最适生长温度、pH,碳源和氮源存在不同程度的差异.菌丝生长适宜温度为20℃~25℃;最适起始pH方面,菌株F011、85和W16H2为6~7,菌株Q为8~9,菌株301为7~8;菌丝生长能利用多种碳源和氮源,葡萄糖适合所有菌株生长,菌株F011、Q、301和W16H2的最适氮源为蛋白胨和酵母膏,菌株85为酵母膏.

梯棱羊肚菌多糖的理化性质及神经保护活性研究

分离纯化人工栽培的梯棱羊肚菌子实体多糖,对其结构和神经保护作用进行研究。采用水提醇沉法提取梯棱羊肚菌子实体多糖(MIP),采用DE-52纤维素柱和Sephadex G-100进行多糖的分离纯化,借助高效凝胶渗透色谱(HPGPC)和高效液相色谱(HPLC)测定多糖分子量及单糖组成。通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基的清除作用,评价MIP自由基清除能力。构建H2O2介导的氧化压力损伤的PC12细胞模型,评估其基于抗氧化的神经保护作用并探索作用通路。结果表明:MIP得率1.15%,平均分子量为1.35×10^6 u,平均粒径为432.20 nm,异头碳为β-构型,由木糖、葡萄糖、半乳糖和少量岩藻糖组成。MIP具有优良的自由基清除活性,对DPPH自由基的IC50值为(1.18±0.04)mg/mL。MIP能够重塑PC12细胞内源性抗氧化酶系,将受损的SOD活性提高62.15%,通过调节凋亡分子开关Bax/Bcl的比例和Caspase蛋白家族的活化,抑制细胞凋亡。MIP可作为一种预防及辅助治疗神经退行性疾病的功效成分加以开发利用。

羊肚菌挥发性物质综合评价和品质差异分析

以20个羊肚菌样品为研究对象,采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱法对供试的20个羊肚菌样品挥发性物质进行定性定量分析,并通过主成分分析和聚类分析对挥发性物质进行判定、区分和聚集。结果表明:气相色谱-质谱检测得到羊肚菌样品富含81种挥发性物质,包含8类挥发性物质,其中醇类、醛类和酮类占总含量的60%~80%,含有24种共有物质;对共有物质进行主成分分析可简化为6个主成分,累计方差贡献率达90.081%,可反映样品的大部分信息;通过主成分分析和聚类分析将羊肚菌样品分为2类:样品4归为1个集群,其余样品归为1个集群,聚集在一起的样品香味相似,可为品种选育和后期的生产加工提供参考。

梯棱羊肚菌子实体多糖提取优化及结构初探

采用酶辅助法提取梯棱羊肚菌(Morchella importuna)子实体多糖,以粗多糖得率和多糖含量为指标,通过单因素、Plackett-Burman、最陡爬坡和Box-Behnken实验优化出梯棱羊肚菌子实体多糖的提取工艺:料液比为1∶20(W∶V),中性蛋白酶添加量8 mg·g^(-1),49.7℃酶解1 h后,80℃浸提4.1 h,提取液脱蛋白后用体积浓度82%乙醇沉淀,在此条件下,粗多糖得率为7.47%,多糖含量为62.18%。优化条件下提取的粗多糖重均分子量为1.51×10^(6) g·mol^(-1),单糖组成为葡萄糖、甘露糖和半乳糖,其摩尔比为0.64∶0.55∶0.27。

羊肚菌的培养基和营养袋配方优化

研究通过筛选羊肚菌G4母种、栽培种的培养基配方,以期提高羊肚菌的产量。适合羊肚菌G4母种生长的培养基为马铃薯200 g、葡萄糖20 g、琼脂粉20 g、磷酸二氢钾2 g、无水硫酸镁2 g、VB110 mg,在18℃~24℃均有较好的生长趋势。适合羊肚菌栽培种的培养基为麦粒38%、木屑45%、谷壳10%、腐殖土5%、石膏1.8%、磷酸二氢钾0.2%,含水量60%,最适培养温度为18℃~21℃。通过外加营养袋的方式可增加羊肚菌的产量,通过营养袋的优化,发现最适营养袋的配方为木屑30%、麦粒40%、谷壳20%、腐殖土6%、石膏2%、葡萄糖2%,最佳营养袋装料量为500 g。

梯棱羊肚菌M83和M101菌株培养特性差异

以可正常出菇的梯棱羊肚菌M83和不能正常出菇的梯棱羊肚菌M101作为供试菌株，对2种菌株在不同的温度、pH、光照、碳源、氮源上的菌丝生长速度、长势及菌核生长情况等进行分析和比较。结果表明，2种菌株菌丝的最适生长温度为15℃～25℃，但M83菌丝在5℃～30℃能正常生长，而M101菌丝在30℃不能正常生长；2种供试菌株菌丝生长最适pH为7～8，M83的生长速度明显快于M101；2种菌株菌丝在黑暗条件下的生长速度、长势均优于光暗交替条件；2种菌株可利用多种碳源和氮源，但M83对麦芽糖和可溶性淀粉的利用能力显著强于M101；2种菌株菌丝生长最适氮源为蛋白胨，对硝态氮的利用能力均强于对铵态氮的利用。

外源营养及添加方式对羊肚菌栽培的影响

羊肚菌栽培随着外源营养袋技术的推广应用,规模逐渐扩大,但产量高低不一,难以实现稳产,严重制约了产业的可持续发展。发掘最佳的外源营养袋配方及放置方式,将为羊肚菌产业的健康发展提供技术支持。以梯棱羊肚菌(Morchella im⁃portuna)栽培为基础,开展外源营养袋基质配方、替代和开口方式等对羊肚菌出菇影响的研究。结果表明,外源营养袋对羊肚菌出菇具有决定性作用,自然生长和其他营养物质替代的对照组几乎不出菇;外源营养袋的基质组分与羊肚菌的出菇周期、产量呈正相关性,梯棱羊肚菌外源营养袋优质配方为:小麦58%、阔叶树木屑30%、腐质土10%、石膏1%、石灰1%;外源营养袋采用刀形口划口,有利于降低污染率、提高出菇产量。

梯棱羊肚菌富硒条件优化工艺研究

为得到梯棱羊肚菌最佳富硒条件,在硒浓度、装液量、发酵时间及pH值单因素试验的基础上,以菌丝生物量及富硒率为指标,通过L9(34)正交试验筛选出梯棱羊肚菌最佳液体富硒条件。结果表明:梯棱羊肚菌最佳液体富硒培养条件为:硒浓度20.0 mg/L、装液量125.0 mL/250.0 mL、发酵时间8 d、pH值为7.0,在此条件下菌丝生物量达到11.304 g/L,硒含量为0.683 mg/g,富硒率为37.15%。结果可为富硒羊肚菌液体菌种制备及羊肚菌富硒液体深层发酵提供参考。

覆膜对羊肚菌原基诱导与产量的影响

以梯棱羊肚菌(Morchella importuna)为研究对象,设计了覆盖黑地膜(A)、覆盖白地膜(B)与不覆地膜(C)等三种处理方式,对其与梯棱羊肚菌原基诱导、催菇育菇、产量的相关性进行研究.结果表明:1)覆盖黑地膜、白地膜与不覆地膜三种处理方式,梯棱羊肚菌地畦培养10~30 d,其分生孢子层(菌霜)的浓密度分别为A<B<C;2)覆盖地膜有助于诱发菌丝体分化原基、菇蕾多、出菇多、成菇率和产量都高于不覆地膜的地畦块.为中原地区羊肚菌的规模化人工栽培提供理论和实践依据.

羊肚菌霉菌性枯萎病病原真菌的分离鉴定及其生物学特性

为明确羊肚菌霉菌性枯萎病的病原菌种类及其生物学特性,通过组织分离法获得羊肚菌霉菌性枯萎病病原菌纯培养物,进行菌落形态、孢子特征及致病性分析,结合ITS序列比对和构建系统发育树对病原菌进行鉴定,并明确该病原菌的最适培养pH、温度和碳源。结果表明:从羊肚菌病样中共分离出4株病原真菌Y1、Y2、Y3和Y6,该4株病原真菌的菌落形态一致,菌丝呈白色绒毛状、较致密,微凸起,菌体生长较慢,不分泌色素。分生孢子无色透明、长棒状、具1个隔膜,大小(3~5)μm×(19~25)μm,菌丝无色、具分隔、直径约2~4μm。对菌株Y1、Y2、Y3和Y6(登录号分别为MW922714、MW922715、MW922716、MW922717)的ITS序列进行扩增测序,大小分别为550 bp、545 bp、552 bp和556 bp,经BLAST序列比对和系统发育树分析,菌株Y1、Y2、Y3和Y6与Diploospora longispora和Paecilomyces penicillatus在自举值99%水平上聚在同一个进化分支。综合菌体形态和分子鉴定结果,菌株Y1、Y2、Y3和Y6鉴定为长孢卵单隔孢霉(Diploospora longispora)。该菌的最适生长温度为25℃,最佳pH 5.5~6.5,并在碱性条件下具有一定的耐受能力,最佳利用碳源为蔗糖。

不同方法分离的梯棱羊肚菌菌种的交配型检测

采用组织分离法、单孢分离法和多孢分离法3种方法对人工栽培的梯棱羊肚菌子实体进行菌种分离,后采用PCR扩增检测所得菌种的交配型基因。结果显示,组织分离法获得的10个菌株均只有MAT1-1-1交配型。单孢分离法获得的21个菌株只具有MAT1-1-1或MAT1-2-1其中一种交配型,其中14个菌株携带MAT1-1-1基因,7个菌株携带MAT1-2-1基因。多孢分离法获得的6个菌株同时具有MAT1-1-1和MAT1-2-1两种交配型;多孢菌丝体经过继代培养,在转接至第6代时部分菌株开始丢失某一个交配型基因。研究结果对于梯棱羊肚菌的栽培生产具有重要的理论指导意义。

梯棱羊肚菌菌丝培养条件

在温度、营养、酸碱度等不同培养条件下,通过观测羊肚菌M6613菌株的菌丝生长和菌核形成情况,探讨该菌株的生物学特性。试验结果表明:7种复合培养基中梯棱羊肚菌M6613菌株的菌丝均能正常生长且都能形成菌核,最适菌丝生长的复合培养基为PDA综合培养基和PDA土壤培养基,最适菌核形成的复合培养基为PDA麸皮培养基;M6613菌株菌丝生长和菌核形成的最适温度20℃,最适酸碱度为pH值6.5;最适菌丝生长和菌核形成的碳源为蔗糖和葡萄糖,尿素对菌丝的生长有抑制作用,(NH4)2SO4和NaNO4等铵盐存在时,菌丝生长缓慢;最适菌丝生长的氮源为KNO3,最适菌核形成的氮源为KNO3和蛋白胨,氮源为(NH4)2SO4和NaNO3等铵盐时,不形成菌核。

梯棱羊肚菌分子鉴别研究

针对羊肚菌品种,特别是产业化培植品种,建立快速准确的品种鉴定方法。通过对来源确切的梯棱羊肚菌样品及同属5种其他羊肚菌进行ITS测序,并结合网络数据库中的梯棱羊肚菌ITS序列进行分析,获得梯棱羊肚菌的特异性鉴别引物。进一步对分子鉴别实验条件进行考察,以确定最终实验条件。通过对梯棱羊肚菌及羊肚菌近缘品种的分析,发现只有梯棱羊肚菌呈现特征电泳条带。表明该研究设计的特异性引物和优化的实验方法,可用于梯棱羊肚菌菌种的快速鉴定及产品的真伪鉴别。