小菜蛾moricin在毕赤酵母中的表达及抑菌活性分析

抗生素的过度使用给自然生态带来诸多不利影响,寻找合适的抗生素的替代物,从而减少抗生素的使用正成为当下的研究热点。以来自于小菜蛾的特异性抗菌肽moricin为研究对象,研究其酵母异源表达水平和抑菌性能及生化特性,为进一步的开发利用提供理论支持。根据已有的小菜蛾抗菌肽moricin特异性基因信息,采用聚合酶链式反应扩增其成熟肽基因mor-3,并克隆至pGAPZαA质粒中,构建组成型分泌表达载体pGAPZαA-mor3,线性化片段电转化导入毕赤酵母SMD1168菌株,高质量浓度Zeocin筛选获得高拷贝重组转化子。以YPD为培养基进行摇瓶发酵,重组蛋白获得高效表达,分子质量约为5kD,与理论预测的基本一致;发酵60 h,上清液中重组蛋白表达量达248.98 mg/L,而且耐热性能良好,同时具备较强的耐强酸及强碱的能力,特别在强酸环境中活性保持稳定,体现了较好的机体内环境的适应性潜力;对部分革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均具有抑菌作用,特别是对革兰氏阴性菌具备特异性较强的抑制作用,对大肠杆菌的最低抑菌浓度为6.25μg/mL,而对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度仅为124.49μg/mL。独特的抑菌性能和理化特点,使其具备广阔的开发应用前景及良好的社会与环保效益。

柞蚕抗菌肽Moricin的抑菌活性研究

本研究在对柞蚕抗菌肽Moricin基因成功进行克隆及毕赤酵母表达的基础上,对其生物活性进行了研究。结果表明,抗菌肽Moricin对大肠杆菌、肠炎沙门氏菌、副猪嗜血杆菌、猪链球菌和金黄色葡萄球菌临床分离菌株的抑菌圈直径为12~21 mm,表明Moricin对这些菌株均具有较强的抑菌活性,对临床耐药菌株的抑菌作用尤其明显。Moricin对上述菌株的最低抑菌浓度为3.9~15.6μg/m L。Moricin对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的广谱抑菌活性使其在畜禽疫病防治和生产中具有潜在的重要价值。

家蚕(Bombyx mori)中的一种新型抗菌肽-Moricin

家蚕（Ｂｏｍｂｙｘｍｏｒｉ）中的一种新型抗菌肽－Ｍｏｒｉｃｉｎ＠周永富＠吴晓萍＠饶军华￥广东省昆虫研究所家蚕（Ｂｏｍｂｙｘｍｏｒｉ）中的一种新型抗菌肽－Ｍｏｒｉｃｉｎ周永富吴晓萍饶军华（广东省昆虫研究所，广州５１０２６０）昆虫是自然界中数量最多、分布最广的...

柞蚕新型抗菌肽moricin基因的克隆与分析

根据已知的抗菌肽moricin核苷酸和氨基酸序列设计兼并引物,利用PCR方法克隆得到柞蚕新型抗菌肽moricin.该序列长度为126bp,将该序列克隆到pUCm-T载体.通过测序鉴定了柞蚕moricin的核苷酸序列,其核苷酸序列与家蚕moricin II的相似性为99.21%.根据核苷酸序列推算的柞蚕氨基酸序列与家蚕moricin II和mori-cin I的相似性分别为97.62%和95.24%.无论柞蚕moricin的核苷酸还是氨基酸序列都与家蚕moricin相似,说明它们属于同一抗菌肽家族,柞蚕核苷酸序列已在美国国立生物技术信息中心登录,登录号为DQ519400.

斜纹夜蛾抗菌肽基因Moricin和Cecropin时空表达模式及微生物敏感性的分析

抗菌肽是一类具有广谱抗菌活性的小分子多肽,包括抗细菌、病毒和真菌。本研究以斜纹夜蛾Spodoptera litura(Fabricius)为研究对象,利用Real-timePCR和半定量RT-PCR检测了其体内两个重要抗菌肽基因Cecropin和Moricin的时空表达模式及其对微生物的敏感性。Real-timePCR检测结果表明,抗菌肽基因Cecropin和Moricin在斜纹夜蛾各个龄期(1,2,3,4,5和6龄幼虫、蛹、成虫)都有表达,随着龄期的增长,表达量逐渐增加,6龄幼虫中表达量达到最高。半定量RT-PCR检测表明,抗菌肽基因Cecropin和Moricin在7个不同组织(气管、卵巢、马氏管、体壁、中肠、脂肪体和血细胞)中都有表达,Cecropin在脂肪体中表达量最高,而Moricin在血细胞中表达量相对较高;RT-PCR检测表明,Cecropin和Moricin的表达在大肠杆菌Escherichia coli诱导后迅速上升,其中诱导后8h达到高峰期,一直持续到48h。不同病原微生物(大肠杆菌E.coli、金黄色葡萄球菌Staphyloccocus aureus和白僵菌Beauveria bassiana)分别诱导后,Real-timePCR检测表明,斜纹夜蛾抗菌肽基因Cecropin和Moricin对大肠杆菌的刺激最为敏感。本研究结果为进一步研究斜纹夜蛾抗菌肽基因Cecropin和Moricin的功能奠定基础。

家蚕抗菌肽moricin基因的串联表达与切割产物的活性检测

家蚕抗菌肽是蚕体内具有免疫功能的碱性多肽,具有抑制病菌生长和杀伤癌变细胞的作用。以家蚕抗菌肽moricin为研究对象,经密码子优化,设计合成了家蚕抗菌肽moricin基因多拷贝的串联体6×moricin基因,并将其克隆到大肠杆菌原核表达载体pET-28a(+),转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,串联表达了融合抗菌肽6×moricin,且表达量较高。进一步通过盐酸羟胺专一性切割串联表达的融合抗菌肽6×moricin,获得相应的抗菌肽单体。体外抑菌试验验证,切割的抗菌肽moricin单体对革兰阴性菌和革兰阳性菌均有较强的抑制效果,且抑菌圈大小随抗菌肽单体浓度增加而增加。采用基因串联表达技术有望解决抗菌肽对宿主大肠杆菌的抑制作用,为利用生物反应器规模化生产家蚕抗菌肽开辟了新的技术途径。

家蚕抗菌肽moricin在大肠杆菌中的融合表达及抗菌活性测定

Moricin是家蚕中发现的一种抗菌肽,对革兰氏阴性和阳性菌都有较强的抗菌活性,具有良好的开发应用前景。为了建立一种大量表达和快速分离moricin的方法,采用PCR拼接法获得moricin基因后重组到表达载体pET-32M上,并在大肠杆菌(E.coli)中融合表达。表达产物存在于上清中为可溶状态,经Ni-NTA柱纯化获得融合蛋白,再经凝血酶(thrombin)酶切后过2次Ni-NTA柱获得纯度为90%以上的moricin,液相测定法表明纯化获得的moricin对大肠杆菌具有抗菌活性。

一种从桑蚕分离得到的抗菌肽moricin的溶液结构

是一种从桑蚕分离得到的新型抗菌肽,它由42个氨基酸组成.它非常基本,而且它的氨基酸序列与一些别的抗菌肽没有显著的相似性.根据双向1H-核磁共振分光数据分析得出moricin的甲醇溶液有20种结构.这些溶液结构显示了一种由长α-螺旋构成的独特结构.除了4个氨基末端残基和6个羧基末端残基之外,α-螺旋整条肽长包含八个转角.静电表层图显示了α-螺旋氨基末端5～22个残基部分是一种两亲性α-螺旋,其疏水性和亲水性界面有一个很明显的间隔;除了Asp30(天冬氨酸)位点是负电荷表层外,羧基末端23～36个残基部分是一种疏水性α-螺旋.结果表明,α-螺旋的两亲性的氨基末端片段的主要作用是增强膜的渗透性而杀死细菌.

基于网络药理学及分子对接探讨三黄珍珠膏促进糖尿病足溃疡愈合的作用机制

目的利用网络药理学和分子对接技术对三黄珍珠膏治疗糖尿病足溃疡的主要活性成分和潜在作用机制进行探讨。方法基于BATMAN-TCM数据库筛选三黄珍珠膏主要活性成分和作用靶点,从GeneCards、OMIM、TTD、数据库中查找糖尿病足溃疡相关靶点,使用STRING 12.0数据库构建蛋白相互作用(PPI)网络筛选核心靶点,在Cytoscape 3.7.1软件中制作“药物–活性成分–靶点–疾病”网络图筛选核心活性成分,使用R语言软件进行基因本体(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,最后应用分子对接对筛选结果进行验证。结果筛选出三黄珍珠膏12个主要活性成分映射315个作用靶点,通过拓扑分析得出主要活性成分麝香酮、尿囊素、桑色素、二氢异丹参酮Ⅰ等治疗糖尿病溃疡可能与丝氨酸/苏氨酸激酶1(Akt1)、β-肌动蛋白(ACTB)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(APDH)、肿瘤坏死因子(TNF)和TP53等蛋白密切相关,并通过促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt信号通路、晚期糖基化终末产物(AGEs)-晚期糖基化终末产物受体(RAGE)等信号通路发挥主要作用。分子对接表明其主要活性成分与关键靶点具有良好的稳定性。结论三黄珍珠膏可能通过调节细胞凋亡和增殖以及介导炎症反应、免疫调节等过程在糖尿病溃疡中发挥治疗作用。为三黄珍珠膏的临床应用和糖尿病溃疡治疗的研究提供一定的理论依据。