柱前衍生-高效液相色谱法测定巴戟天中氨基酸含量及营养价值评价

建立柱前衍生-高效液相色谱法测定巴戟天中氨基酸含量,采用氨基酸比值系数法评价其营养价值。采用盐酸水解法制得巴戟天氨基酸供试品溶液,以异硫氰酸苯酯和三乙胺为柱前衍生化试剂,采用高效液相色谱法,使用Ultimate Amino Acid色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)以0.1 mol/L无水乙酸钠-乙腈为流动相,梯度洗脱,柱温40℃,检测波长为254 nm,测定氨基酸含量;通过氨基酸比值、氨基酸比值系数、氨基酸比值系数分等评价其营养价值,并采用系统聚类和主成分分析对其进行分类分析。结果表明,15种氨基酸线性关系良好,相关系数r≥0.9996。16份巴戟天氨基酸总含量为17.87~102.15 mg/g,均检测到15种氨基酸,其中包含6种必需氨基酸,占总氨基酸含量的14.15%~32.06%;8种药用氨基酸,占总氨基酸含量的45.20%~56.31%。限制氨基酸为苏氨酸和亮氨酸,氨基酸比值系数分为33.87~61.31。不同巴戟天样品氨基酸组成相关性显著;主成分分析提取2个主成分,累计方差贡献率为97.085%,可将16批巴戟天分为三类。该实验测定方法简单有效,可同时分离测定15种氨基酸,精密度与重复性良好,有较高的药用价值,可为巴戟天的品质分析和资源开发利用提供参考。

基于表型和分子标记分析24份巴戟天遗传多样性

【目的】广东省德庆县是道地药材巴戟天的产地,该文对广东德庆不同地区的24份巴戟天进行了种质资源的遗传多样性分析。【方法】以德庆县各地收集来的24份巴戟天资源为研究对象,使用主成分分析和SRAP、CDDP两种分子标记方法对24份巴戟天材料进行遗传多样性分析。【结果】在表型分析中,基于主成分分析的聚类图发现,官圩镇和高良镇、凤村镇和高良镇分别聚类至4个类群中。此外,18对SRAP引物组合和16条CDDP引物扩增后分别获得100条和98条总条带,其中SRAP多态性条带为50条,多态性比率达50%,平均遗传相似系数(GS)为0.87,遗传相似系数变化范围为0.71~0.97;CDDP多态性条带为80条,条带之间多态性比率达79.0%,各种质间遗传系数范围为0.71~0.96,平均遗传相似系数为0.86,且当系数为0.82时,两种分子标记结果均表明高良镇、官圩镇和凤村镇的种质之间具有一定的相似性。【结论】结合表型和分子标记聚类结果,高良镇和官圩镇、高良镇和凤村镇的亲缘关系最近,SRAP和CDDP两种分子标记方法对巴戟天遗传多样性的结果具有一定的差异,而联合分析可以更好地反映巴戟天遗传多样性研究及其资源的系统发育关系。

巴戟天多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

本文采用超声辅助水提醇沉法制备了3种巴戟天多糖,通过紫外光谱仪、傅里叶红外光谱(FT-IR光谱)和扫描电镜对巴戟天多糖的化学结构进行表征,并以此来研究巴戟天多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制动力学及抑制作用。结果表明,3种多糖是蛋白质/多糖或蛋白质/多聚糖/核酸偶联物;多糖沉淀溶剂极性越小,其结构均一性越差;巴戟天多糖BJ-90具有更好的α-葡萄糖苷酶抑制效果,属于混合型抑制剂。

巴戟天多糖的分级纯化及结构分析

对巴戟天多糖的柱层析分级纯化和一级结构进行了研究.采取热水浸提、乙醇沉淀的工艺获得巴戟天粗多糖MOHP,经离子交换和凝胶柱层析得到了MOHP-Ⅰ,MOHP-Ⅱ,MOHP-Ⅲ和MOHP-Ⅳ4个组分,通过红外光谱、液相和气相色谱等分析手段对分级后的MOHP-Ⅰ和MOHP-Ⅲ进行了初步的结构分析.结果表明:MOHP-Ⅰ的单糖组成为葡萄糖和果糖,分子质量约为2 ku,呋喃糖环结构;MOHP-Ⅲ是一种均一的糖蛋白物质,其组成单糖为阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、果糖以及半乳糖,分子质量约为35ku;高效凝胶渗透色谱显示两组分均达到了较高的纯度.

巴戟天中微量元素的形态分析

目的对巴戟天中微量元素的形态进行分析。方法采用电感耦合等离子体质谱法测定巴戟天中13种元素含量及水煮溶出率,并分析水煎液中9种元素的可溶态与悬浮态、正辛醇-水萃取体系中醇溶态与水溶态。结果巴戟天中含量较多元素依次为Mn,Fe,Zn,Pb和Cu等。元素溶出率大小不取决于药材中元素总量。在水煎液9种元素中,Se,Mn和Co以可溶态为主,其余以悬浮态为主;Se,Fe,Pb以及肠液酸度下的Cu,Cd的醇溶态含量较高,其余醇溶态含量较低,酸度对元素Kwo值有影响。电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)分析法线性好、精密度高、可靠性好。结论巴戟天含有多种生命元素。元素溶出率主要取决于它在药材中存在形态。水煎液中,元素可溶态与悬浮态分布可能与其存在形态及煎出物特性有关;元素醇溶态与水溶态分布应与元素所结合成分及结合的稳定性有关。

巴戟天遗传多样性的RAPD研究

目的应用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)标记技术对广东产5个类群的栽培巴戟天进行遗传多样性研究。方法应用15种引物对64个个体进行检测,应用Popgen32软件分析群体的遗传多样性。结果共得到224条带,其中多态位点112个,多态百分率为50.00%。种群内多态位点百分率在37.05%～53.13%,平均为45.86%。Shannon指数和Nei指数均反映出巴戟天各类群遗传多样性有一定的变化。Shannon指数为0.287 6,各类群的Shannon指数在0.103 3～0.236 2,Nei指数为0.175 6,各类群的Nei指数在0.074 5～0.154 0。结论目前栽培巴戟天居群间有一定的分化,并产生了多种农家类型,其中小叶巴戟天(POP2)遗传多样性明显高于其他类型,这些可能是导致目前栽培巴戟天质量产生变异的主要原因。

巴戟素对急性缺血性脑损伤保护作用的机制研究

巴戟素是从中药巴戟天中提取的一种糖甙类单体物。本实验采用生化检测和放射性核素示踪法 ,探讨巴戟素对缺血 /缺氧性脑损伤保护作用的机制。结果显示 :巴戟素可提高急性脑缺血衰老大鼠脑组织超氧化物歧化酶 (SOD)和谷胱甘肽过氧化酶 (GSH -Px)活性 (P <0 .0 1) ,减少过氧化脂质 (LPO)含量 (P<0 .0 5) ;能增加老龄小鼠脑组织葡萄糖含量 (P <0 .0 1) ;但对急性脑缺血衰老大鼠脑组织一氧化氮 (NO)含量无明显影响 (P >0 .0 5)。提示巴戟素对缺血性脑损伤保护作用的机制与抗脑组织的脂质过氧化作用及改善脑组织葡萄糖代谢有关。

南药巴戟天多糖的研究进展

巴戟天是我国著名的四大南药之一,多糖是南药巴戟天的主要功能因子之一,具有多种生理活性。近年来国内外对巴戟天化学成分和药理活性方面的研究进行了大量工作。对巴戟天化学成分及其药理的研究进展已有文献报道,但对巴戟天多糖这一重要活性物质未见有详尽的报道。为了进一步研究和开发利用该植物,对巴戟天多糖成分的药理活性、分离纯化、结构分析、含量等方面的研究进展进行综述。

基于国家药品评价性抽检的巴戟天饮片质量分析与研究

目的:通过国家药品评价性抽检工作,了解市场上的巴戟天饮片质量及存在的问题,为巴戟天的质量标准提高和市场监管提供数据支持。方法:从全国24个省级行政区抽取巴戟天饮片,按照《中华人民共和国药典》2015年版(一部)巴戟天性状项和薄层鉴别项方法开展检验工作,并进行DNA条形码技术、指纹图谱、环烯醚萜含量测定、真菌毒素残留量共4项探索性研究,分析检验结果以评价巴戟天饮片的市场情况。结果:本次抽检的88家企业的巴戟天饮片共计108批,按照国家法定标准检验的合格率为100%。DNA条形码技术可以有效区分巴戟天及其混伪品。指纹图谱研究结果显示,正品巴戟天指纹图谱相似度均超过95%,混伪品相似度均低于70%。含量测定结果显示,不同巴戟天炮制品中环烯醚萜从种类和含量上具有显著性差别。真菌毒素筛查试验结果显示,有1批样品的黄曲霉毒素G1超出药典限度。结论:按标检验结果显示,市场上巴戟天饮片质量基本合格。根据探索性研究结果,建议标准增加环烯醚萜含量测定和黄曲霉毒素限量检查。

不同因素对巴戟天无机元素含量的影响

作者以等离子发射光谱法分别研究了受茎基腐病、生长年龄、不同地段,稀土等因素影响的巴戟天根中二十四种元素含量、结果表明:(1)巴戟天患茎基腐病后呈现的某些症状,可能与其根中硼、锰等微量元素含量显著下降有关。(2)二年生巴戟天根中多种微量元素含量较一年生者下降,可能是土壤元素含量下降而总生物量迅速增加所致;应适时补施微肥。(3)同村不同地段生长的巴戟天根中微量元素含量也有较大差异,故自然因素可显著影响巴戟天微量元素含量。(4)叶面喷施稀土后,巴戟天根铜、锰、锌等微量元素含量均有增加;氮、磷肥也可能影响巴戟天根铜、锰、锌含量。合理使用氮、磷、钾、稀土以及他微量元素肥料,应是巴戟天高产优质途径之一。

我院引种栽培“南药”及其部分品种的药材质量评价

“南药”是中药的重要组成部分,过去大部分依靠从东南亚、非洲等国家进口,为了保证中医用药的需要,减少依赖进口,我院根据中央六部指定发展的南药品种,进行了引种和北移试验研究,共引种有丁香等25个品种。根据生物学特性观察资料,按其在广州地区的适应低温能力分为耐寒、较耐寒和耐寒力较弱三类型,这为扩大引种试种范围,安排生产布局提供了科学依据。在引种和北移过程中,通过试验,掌握了不同品种的特性,使槟榔、瓜哇白豆蔻首次在广州开花结果。为了能迅速和大量提供优良品种的苗木,采用了先进的生物技术,成功地培育出巴戟天试管苗,为“南药,的优良品种选育开辟了新的途经。在总结各品种栽培经验的基础上,编著了《热带药用植物栽培》一书,为发展“南药”提供了参考资料。引种“南药”能开花结果,繁衍后代,从生物学的观点来看,视为引种成功是无可非议的,但作为防病治病的药材,还需看其药用部分是否符合中医药用的质量要求,为此我们对槟榔、爪哇白豆蔻、益智、巴戴天分别进行了有机成分、微量元素的比较测定,对其药材质量作了初步的评价。

巴戟天中25个无机元素量变规律研究

目的:测定巴戟天中25个无机元素的含量,并探索其元素量变规律。方法:采用微波消解-电感耦合等离子体质谱法对巴戟天中25个无机元素进行测定,并进行直观分析、非参数秩和检验分析、相关性分析、元素图谱分析、主成分分析、聚类分析。结果:25个无机元素在一定的浓度范围内与峰面积的线性关系良好(r>0.9990),平均加样回收率为99.00%~100.80%。30批巴戟天样品中检测出24个无机元素,Se均未检出。绘制了巴戟天25个无机元素的图谱,该谱图具有一定的规律性,Fe、K、和Mn的含量较高,有害元素Cu含量超标率达46.67%。结论:巴戟天中无机元素的组成及其量变规律的研究可为其质量控制及安全性评价提供依据。

不同预处理方法对巴戟中砷限量检查的影响

采用5种不同预处理方法对巴戟药材进行处理，并用古蔡氏砷斑法检测其含量，发现不同处理方法的检测结果相差甚大，为中药砷限量检查中正确选择作品预处理方法提供了参考。

1989—2006年南药巴戟天的文献研究

利用文献计量法对1989—2006年的巴戟天文献变化趋势、文献源、作者、内容等方面进行了统计。

基于psbA-trnH和rDNA ITS序列的不同地理居群巴戟天聚类分析

【目的】基于psbA-trnH和rDNA ITS序列进行不同地理居群巴戟天聚类分析,探讨不同地理居群巴戟天遗传变异与地理分布之间的相关性,为其道地性研究提供理论参考。【方法】以13个来自广东、广西和福建的不同地理居群巴戟天为研究对象,采用改良CTAB法提取其新鲜叶片DNA,以其为模板分别扩增psbA-trnH和rDNA ITS序列。采用ClustalX 1.81进行多重对位排列,应用MEGA 6.06中K2P(Kimura 2-parameter)模型计算遗传距离,并运用邻近法构建系统发育进化树。【结果】不同地理居群巴戟天的psbA-trnH序列长度为306 bp,GC含量为27.2%,保守率83.33%,变异率16.67%,简约信息率26.14%;不同地理居群巴戟天的rDNA ITS序列长度为571 bp,GC含量为64.1%,保守率91.42%,变异率8.58%,简约信息率14.19%。不同地理居群巴戟天的psbA-trnH序列遗传距离为0～0.128,其中广东省的5个样品间遗传距离整体较小;福建省的4个样品与广西和广东的样品间遗传距离整体较大。不同地理居群巴戟天的rDNA ITS序列遗传距离为0～0.102,其中福建省的永定2号与其他样品遗传距离均较大。基于psbA-trnH和rDNA ITS序列构建的系统发育进化树均将广东省的5个巴戟天样品聚为一支,但rDNA ITS序列构建的系统发育进化树还将广西区的4个巴戟天样品聚为一支,说明其可较好地区分广东省和广西区不同地理居群的巴戟天。【结论】巴戟天遗传结构与地理分布存在一定的相关性,深入研究巴戟天遗传变异与地理分布间的相关性时应以rDNA ITS序列为主、psbA-trnH序列为辅。

一测多评法测定不同产地巴戟天中4种环烯醚萜含量

建立同时测定不同产地巴戟天中4种环烯醚萜类成分(水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷酸和车叶草苷)的一测多评法。实验以去乙酰基车叶草苷酸为内参物,基于HPLC法建立去乙酰基车叶草苷酸与其它成分的相对校正因子,并用校正因子计算4种成分的含量;使用外标法和一测多评法同时测定11批不同产地的巴戟天样品中这4种成分的含量,结果表明外标法与一测多评法结果之间无明显差异,说明了一测多评法的准确性和可行性。因此在缺乏对照品的情况下,以去乙酰基车叶草苷酸为内参物同时测定水晶兰苷、车叶草苷酸和车叶草苷的含量是可行的。该方法可用于巴戟天的质量控制。

基于巴戟天RNA-seq的bHLH转录因子的鉴定与分析

为探究巴戟天中参与生长发育及次生代谢产物合成的bHLH转录因子,本研究基于巴戟天的转录组数据,对巴戟天的bHLH转录因子进行筛选鉴定、亚细胞定位、保守结构域、GO功能注释、系统进化树及组织特异性表达差异分析。结果显示,鉴定出的90个巴戟天bHLH转录因子的保守结构域大约有60个氨基酸组成,包含2个不同的功能结构区,其中83个bHLH转录因子具有识别并结合E-box的能力。63个bHLH转录因子定位于细胞核中,27个位于细胞外基质。GO功能注释分类结果显示与生物过程、分子功能和细胞成分有关的GO terms数量分别为39、109和61个。系统进化树分析结果可知,除S2、S4、S12、S14、S17和S20亚家族外,90个巴戟天bHLH转录因子在其他亚家族均有分布。RT-qPCR结果验证了部分MobHLH转录因子在巴戟天不同组织中的表达模式。鉴定的90个巴戟天bHLH转录因子为后续进一步研究巴戟天bHLH转录因子家族提供了一定的理论基础。

巴戟天中微量元素与土壤中矿质元素的相关性分析

目的探讨巴戟天中微量元素与土壤中矿质元素的相关性,为巴戟天质量提供实验依据。方法分别测定广东德庆、广西上思、福建南靖和海南尖峰岭四地巴戟天样品中的多种微量元素,并分析相应土壤中的矿质元素及其相关性。结果与结论结果表明土壤中矿质元素与巴戟天中微量元素有较好的相关性,其中铅相关性最高,其次为锌、砷,而巴戟天对土壤中锰、镉的富集能力较强。

巴戟天MoDXR基因及其启动子的克隆与分析

从巴戟天中克隆MEP途径中的1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸还原异构酶基因MoDXR及其启动子序列,并进行生物信息学分析、启动子区顺式作用元件分析,以及进行原核表达分析。根据巴戟天转录组中DXR基因原始序列和NCBI-ORFfinder分析,设计特异性引物,并进行RT-PCR扩增和生物信息学分析;采用染色体步移克隆MoDXR基因的5′端启动子序列;通过亚细胞定位分析MoDXR基因在细胞中的位置;构建原核表达载体pET-28a-MoDXR,导入BL21(DE3)表达感受态细胞后,在IPTG诱导下表达。从巴戟天中克隆的MoDXR基因,其cDNA全长2015 bp,预测的阅读框大小为1425 bp,编码474个氨基酸,分子质量为51.27 kDa;BlastP序列比对分析表明MoDXR基因与其他植物的DXR基因具有高度同源性,如:咖啡树DXR(CaDXR)、萝芙木DXR(RvDXR);系统进化发育树分析显示,巴戟天MoDXR蛋白与小粒咖啡和栀子的DXR蛋白聚为一类,其亲缘关系最近;由亚细胞定位可知MoDXR基因所编码的蛋白定位于叶绿体上;MoDXR基因5'端启动子序列长度为1493 bp,包含了与光响应、胁迫响应和激素响应有关的多种调控元件;SDS-PAGE结果表明pET-28a-MoDXR重组蛋白的大小与预期相符,但是以不容性的包涵体的形式表达。成功克隆了MoDXR基因及其启动子序列并对其进行了生物信息学分析和启动子区顺式作用元件分析;后期需要优化MoDXR原核表达体系,为进一步纯化MoDXR蛋白,研究其结构和功能奠定基础。

饮片巴戟天、巴戟肉和盐巴戟天主要化学成分的含量差异分析

目的:考察目前市场上的饮片巴戟天、巴戟肉和盐巴戟天中主要化学成分的含量差异。方法:在主要产区和国内主流药材市场上,收集饮片巴戟天41批、巴戟肉32批、盐巴戟天10批;在前期对巴戟天药材中糖类成分研究的基础上,利用超高液相色谱飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术鉴别饮片巴戟天、巴戟肉和盐巴戟天中的主要的差异成分,利用UPLC对主要成分含量进行测定,并结合热图对三者的主要化学成分的含量进行差异分析。结果:饮片巴戟天、巴戟肉和盐巴戟天三者的主要成分有显著差别,表现在果糖、葡萄糖、蔗糖以及低聚糖GFn的含量及种类两方面。巴戟肉和盐巴戟天中10种低聚糖GFn(n=2~11)的含量均分别低于饮片巴戟天中相应成分的含量(P<0.01),巴戟肉中果糖、葡萄糖、蔗糖的含量均高于巴戟天和盐巴戟天中相应成分的含量,差异极显著(P<0.01)。饮片巴戟天、巴戟肉和盐巴戟天中水晶兰苷的质量分数分别为42.6,39.8,32.3 mg·g^(-1),其中巴戟天与盐巴戟天中的含量差异显著(P=0.031);各批次的巴戟天和盐巴戟天中耐斯糖的质量分数均高于4.0%,高于2015年版《中国药典》(简称"药典")标准的要求;而巴戟肉中耐斯糖的平均质量分数为14.7 mg·g^(-1),只有少数批次的巴戟肉符合药典要求。结论:蒸制使巴戟天中大部分的低聚糖转化成了果糖、葡萄糖、蔗糖;盐制使巴戟天中的各低聚糖和水晶兰苷的含量均显著降低,但是,各低聚糖含量降低的程度远小于巴戟肉。巴戟天和盐巴戟天的耐斯糖含量符合药典质量要求,巴戟肉中耐斯糖含量低于药典中限量要求。建议开展巴戟天药典标准的提升和修订,以保持药典的科学性、先进性和适用性,增强药典对巴戟天药材质量控制的导向作用。该研究结果为饮片巴戟天、巴戟肉、盐巴戟天的质量标准修订及其功效物质基础研究提供了参考依据。