从辣木籽中制备4-α-L-鼠李糖基-异硫氰酸苄酯的工艺优化研究

【目的】探索从辣木籽中酶解提取4-α-L-鼠李糖基-异硫氰酸苄酯(4-[(α-L-rhamnosyloxy) benzyl] isothiocyanate,GMG-ITC)的工艺条件及纯化方法。【方法】通过单因素和正交试验的方法,优化了对脱油辣木籽中硫代葡萄糖苷进行酶解提取,进而以二氯甲烷为溶剂进行萃取及重结晶可获得高纯度的GMG-ITC。【结果】通过高效液相色谱法测定酶解提取液中GMG-ITC含量,筛选出制备辣木籽GMG-ITC的最佳酶解提取工艺为:时间9 h,料液比1∶60 (g∶mL),pH值为5.0,温度30℃。【结论】建立了简化且高效的辣木籽脱油、酶解提取、萃取、重结晶4步新工艺组合,制备得到产率为4.70%、纯度达98%的GMG-ITC。

辣木籽异硫氰酸酯抑制皮肤鳞状癌A431细胞的生长

研究辣木籽异硫氰酸酯(MITC)对皮肤鳞状细胞癌A431细胞生长的影响。通过MTT法、克隆形成实验及流式细胞术检测经不同浓度MITC处理后的A431细胞增殖、凋亡和细胞周期的变化情况;采用异种移植瘤模型检测MITC对A431细胞体内生长的影响。研究结果表明,随着MITC浓度和处理时间增加,A431细胞活力逐渐降低,在12μM的MITC刺激72 h后,细胞存活率降低为10%(p<0.001);克隆形成实验表明,MITC(5和10μM)显著抑制A431细胞克隆形成,24 h的细胞克隆形成率分别从100%降低到63.22%(p<0.001)和26.07%(p<0.001);细胞凋亡和周期检测结果表明,当MITC处理细胞48 h后,细胞凋亡率分别从17.22%增加到31.73%(p<0.001)和44.77%(p<0.001),S期细胞从7.43%显著增加到14.44%(p<0.001)和17.43%(p<0.001)。体内实验结果表明,用MITC干预异种移植瘤小鼠20天后,小鼠肿瘤体积从1549.02 mm3降低到857.77 mm3(p<0.05);肿瘤重量从1.30 g降低到0.91 g(p<0.05)。以上结果表明,MITC在体外和体内均能够抑制A431细胞的生长。

辣木籽异硫氰酸酯衍生物抑制结肠癌HCT-116细胞的生长和迁移

该研究旨在探讨辣木籽异硫氰酸酯衍生物(MITC-21)抑制结肠癌HCT-116细胞生长和迁移的作用。采用MTT实验、克隆形成实验、流式细胞术、细胞划痕实验和蛋白印迹法,检测经不同浓度MITC-21处理的HCT-116细胞增殖、凋亡、迁移和相关蛋白表达水平的变化情况。结果表明,MITC-21呈剂量依赖性和时间依赖性的方式显著降低HCT-116细胞的存活率,半致死剂量分别为6.79μmol/L(24 h)、3.71μmol/L(48 h)和1.13μmol/L(72 h);克隆形成实验表明,MITC-21(2和4μmol/L)显著抑制HCT-116细胞克隆形成,处理48 h后克隆形成率从100%降低到68.36%(p<0.05)和49.51%(p<0.01);当MITC-21浓度为4μmol/L时HCT-116发生明显的细胞形态变化;流式细胞术分析得出,HCT-116细胞的凋亡率随着MITC-21浓度和处理时间的增加而上升,处理48 h后,细胞凋亡率从14.97%增加到21.60%(p<0.001)和22.78%(p<0.001);细胞划痕实验表明,MITC-21显著降低细胞迁移率,迁移率从61.53%降低到32.89%(p<0.01)和24.30%(p<0.001);蛋白表达水平检测表明,MITC-21(4μmol/L)显著增加凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比率(p<0.01),降低迁移相关蛋白MMP2表达水平(p<0.05)。MITC-21能够抑制HCT-116细胞增殖、诱导细胞凋亡和抑制细胞迁移。

辣木籽异硫氰酸酯柔性脂质体的制备工艺研究

为提高辣木籽异硫氰酸酯的稳定性及生物利用率,使用薄膜分散法,以卵磷脂和胆固醇的质量比、卵磷脂和胆酸钠的质量比、超声时间为影响因素,以包封率为评判标准,采用单因素和响应曲面法进行辣木籽异硫氰酸酯柔性脂质体的工艺优化。使用低温超速离心法分离柔性脂质体中游离的辣木籽异硫氰酸酯以计算其包封率;通过紫外分光光度计法测定异硫氰酸酯含量。结果表明,辣木籽异硫氰酸酯柔性脂质体优化后的工艺为卵磷脂与胆固醇质量比9.95∶1、卵磷脂与胆酸钠质量比10.32∶1、超声时间7.78 min,在此条件下制备的辣木籽异硫氰酸酯柔性脂质体包封率为64.17%。通过表征,辣木籽异硫氰酸酯柔性脂质体的粒径为348 nm,多分散系数为0.251,Zeta电位为-24.7mV。透射电镜显示该柔性脂质体分散比较均匀,呈较规则圆形。经过24 h体外释放率检测后,发现该柔性脂质体体外释放率最后保持在80.105%,具有缓释的效果。