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Interaction between the Wilms tumour factor-1 element in the promoter of Amh and a downstream enhancer is required for a strong expression of the gene in pre-pubertal sertoli cells 被引量:1
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作者 David W. Dresser 《American Journal of Molecular Biology》 2013年第3期165-172,共8页
Amh (anti-Müllerian hormone) is a single copy gene which is expressed strongly in Sertoli cells in the foetal testis and participates in the onset of sexual differentiation. Its promoter driving the expression of... Amh (anti-Müllerian hormone) is a single copy gene which is expressed strongly in Sertoli cells in the foetal testis and participates in the onset of sexual differentiation. Its promoter driving the expression of a reporter gene (d2EGFP) has been used to analyse the role of certain defined putative elements and a downstream enhancer element in gene expression. These experiments were carried out in vitro using a line of pre-pubertal mouse Sertoli cells, transienly transfected with circular DNA constructs with variously mutated promoter elements. A downstream enhancer element, situated immediately 3’ of the polyadenylation (PA) signal for Amh, has been inserted in an equivalent position in the d2EGFP construct. When the Amh promoter is unmodified, the downstream enhancer (DE) is positively associated with a large increase in EGFP expression. This is at least partly the consequence of an increased rate of expression by individual cells. Experiments using variously truncated Amh promoters indicate that an upstream region (-214 to -336) may play a minor role in facilitating enhancement. However mutation of the Wilms tumour factor-1 element, situated between the tata box and the start of translation, results in an almost complete suppression of enhancement. 展开更多
关键词 mouse Cell Lines In Vitro AMH PROMOTER SMAT pre-pubertal sertoli DOWNSTREAM ENHANCER Wilms Tumour Factor ELEMENT
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Construction of Cox7a2 fluorescent vector and its effect on cytochrome C oxidase activity in mouse Sertoli cell line TM4
2
作者 刘保兴 《外科研究与新技术》 2011年第4期260-260,共1页
Objective To construct Cox7a2 fluorescent vector and study its effect on cytochrome C oxidase ( COX) activity in mouse Sertoli cell line TM4. Methods The coding region of CoxTa2 was amplified from mouse Sertoli cell l... Objective To construct Cox7a2 fluorescent vector and study its effect on cytochrome C oxidase ( COX) activity in mouse Sertoli cell line TM4. Methods The coding region of CoxTa2 was amplified from mouse Sertoli cell line TM4 by RT-PCR. PCR product was 展开更多
关键词 line cell Construction of Cox7a2 fluorescent vector and its effect on cytochrome C oxidase activity in mouse sertoli cell line TM4 TM
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敲低锌转运蛋白ZIP7抑制小鼠睾丸支持细胞增殖的研究
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作者 特力格尔 刘璇 +3 位作者 李媛静 李欢欢 王树松 马婧 《生殖医学杂志》 CAS 2024年第2期201-207,共7页
目的探讨敲低锌转运蛋白ZIP7对小鼠睾丸支持细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法使用小鼠睾丸支持细胞系(TM4细胞)进行实验,TM4细胞培养后采用细胞免疫荧光染色法观察ZIP7在TM4细胞中的亚细胞定位;将TM4细胞分为对照组和ZIP7 siRNA... 目的探讨敲低锌转运蛋白ZIP7对小鼠睾丸支持细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法使用小鼠睾丸支持细胞系(TM4细胞)进行实验,TM4细胞培养后采用细胞免疫荧光染色法观察ZIP7在TM4细胞中的亚细胞定位;将TM4细胞分为对照组和ZIP7 siRNA组(采用siRNA转染敲低TM4细胞中ZIP7表达),采用CCK8法检测两组细胞的增殖能力,使用DHE荧光探针检测两组细胞内活性氧(ROS)的水平,实时荧光定量PCR(qPCR)检测两组细胞内ZIP7 mRNA的相对表达量,Western blot法检测两组细胞内ZIP7、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)及磷酸化ERK(p-ERK)蛋白表达水平。结果细胞免疫荧光染色法结果显示ZIP7定位于TM4细胞的内质网上。siRNA干扰使得ZIP7 siRNA组细胞中ZIP7的mRNA和蛋白表达显著低于对照组(P<0.05);siRNA转染敲低TM4细胞内ZIP7的表达后,ZIP7 siRNA组细胞增殖能力显著低于对照组(P<0.001),细胞内ROS水平显著高于对照组(P<0.001)。与对照组比较,ZIP7 siRNA组细胞的p-ERK/ERK蛋白表达无显著差异(P>0.05),而p-JNK/JNK蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论敲低ZIP7可以明显抑制TM4细胞增殖,该过程可能通过细胞内ROS水平的升高及JNK磷酸化的激活介导。 展开更多
关键词 锌转运蛋白 小鼠睾丸支持细胞 活性氧 C-JUN氨基末端激酶 细胞增殖
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Sertoli细胞饲养层对小鼠精原干细胞增殖的影响 被引量:1
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作者 刘慧莲 赵光强 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期95-98,共4页
用无血清StemPro-34 SFM培养基培养2~5日龄小鼠精原干细胞,以小鼠睾丸支持细胞(Sertoli)为饲养层,小鼠胚胎成纤维细胞(STO)饲养层做对照,分别用相差显微镜观察,免疫组化法研究Sertoli饲养层对精原干细胞生物学行为的影响。结果发现精... 用无血清StemPro-34 SFM培养基培养2~5日龄小鼠精原干细胞,以小鼠睾丸支持细胞(Sertoli)为饲养层,小鼠胚胎成纤维细胞(STO)饲养层做对照,分别用相差显微镜观察,免疫组化法研究Sertoli饲养层对精原干细胞生物学行为的影响。结果发现精原干细胞在Sertoli及STO两种饲养层上的一周内的生物学行为非常相似,但培养1周后,Sertoli细胞作饲养层的培养体系中保留的精原干细胞要比对照组明显增多,约有30%的精原干细胞能存活下来并能维持存活到60d以上。由此得出结论是Sertoli细胞作饲养层明显促进精原干细胞的更新增殖。 展开更多
关键词 精原干细胞 sertoli饲养层 体外培养 小鼠
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N-乙酰-半胱氨酸干预壬基酚对小鼠Sertoli TM4细胞的损伤作用 被引量:2
5
作者 刘晓珍 聂少平 +2 位作者 余强 黄丹菲 谢明勇 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第13期130-136,共7页
目的:研究N-乙酰-半胱氨酸(N-acetyl-cysteine,NAC)对壬基酚(nonylphenol,NP)诱导的小鼠SertoliTM4细胞氧化损伤及凋亡的干预作用。方法:以Sertoli TM4细胞为对象,实验分为对照组、NP组(20 μmol/L NP处理)、NP+NAC组(5 mmol/L NAC预处... 目的:研究N-乙酰-半胱氨酸(N-acetyl-cysteine,NAC)对壬基酚(nonylphenol,NP)诱导的小鼠SertoliTM4细胞氧化损伤及凋亡的干预作用。方法:以Sertoli TM4细胞为对象,实验分为对照组、NP组(20 μmol/L NP处理)、NP+NAC组(5 mmol/L NAC预处理4 h后20 μmol/L NP处理24 h)、NAC组(5 mmol/L NAC处理4 h后换正常培养基培养),采用噻唑蓝法检测细胞存活率;流式细胞术检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量和细胞凋亡情况;试剂盒法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、过氧化氢酶(catalase,CAT)活力、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及Caspase-3相对活力;Western blot法检测细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)磷酸化情况。结果:与对照组相比,20 μmol/L NP处理24 h能显著降低细胞存活率(P<0.05),同时诱导细胞内ROS生成,下调SOD和CAT活力,增加MDA含量,诱导Sertoli TM4细胞凋亡,增加Caspase-3相对活力,促进ERK、JNK蛋白磷酸化激活;与NP组相比,NAC预处理能够明显削弱NP引起的细胞内ROS生成,使SOD、CAT活力下调,MDA含量增加,Sertoli TM4细胞凋亡,Caspase-3相对活力增强,激活ERK、JNK信号通路。结论:NAC具有干预NP对小鼠Sertoli TM4细胞损伤的作用,这可能与NAC抑制NP诱导的细胞氧化应激和凋亡以及阻断ERK、JNK信号通路的激活相关。 展开更多
关键词 壬基酚 小鼠sertoli TM4细胞 N-乙酰-半胱氨酸 细胞凋亡 氧化应激
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转基因小鼠高表达的FasL对Sertoli细胞免疫调节功能的影响 被引量:1
6
作者 刘照平 李伟毅 +7 位作者 林波 马映华 胡佳华 陈广洁 席晔斌 王保国 包士三 郭礼和 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期456-460,共5页
目的 :研究转基因小鼠高表达的FasL对Sertoli细胞在睾丸局部感染时的免疫调节作用的影响。方法 :将溶脲脲原体 (UU)分别注入FasL转基因及野生型小鼠膀胱 ,模拟上行性感染的途径。分别在感染后 1、2和 3wk处死小鼠 ,分离睾丸组织观察其... 目的 :研究转基因小鼠高表达的FasL对Sertoli细胞在睾丸局部感染时的免疫调节作用的影响。方法 :将溶脲脲原体 (UU)分别注入FasL转基因及野生型小鼠膀胱 ,模拟上行性感染的途径。分别在感染后 1、2和 3wk处死小鼠 ,分离睾丸组织观察其病理变化 ,并用免疫组化染色法比较UU感染前后 ,Ser toli细胞上FasL和TGF β、IL 1α、IL 6的表达及分泌格局的差异。从野生型小鼠睾丸组织中分离高纯度的Sertoli细胞 ,与未感染UU的对照组相比 ,观察UU感染后FasL+ Sertoli细胞介导Fas+ Jurkat细胞的凋亡能力的变化。结果 :UU感染组的转基因小鼠 ,睾丸组织发生的病理改变比野生型更为明显 ;两种小鼠感染后Sertoli细胞分泌的调节因子变化格局不同 ;感染后Sertoli细胞对Jurkat细胞的杀伤能力增强。结论 :在抗感染免疫中 ,转基因表达的FasL可影响Sertoli细胞分泌细胞因子的格局 ,进而影响睾丸局部的免疫平衡。过高表达的FasL对机体的抗感染应答并非一定有利。 展开更多
关键词 FASL 转基因小鼠 sertoli细胞 免疫调节
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探索Sertoli细胞对去除精原细胞的动态反应
7
作者 安娜 袁丽芳 +3 位作者 王善林 李宗悦 王峰 朱宝长 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2014年第5期7-12,I0001-I0002,共8页
目的探索Sertoli细胞对去除小鼠精原细胞后睾丸的动态反应。方法采用15、30和44 mg/kg的白消安腹腔注射法建立不同程度去除精原细胞的动物模型,处理后5 d和28 d时对睾丸进行组织学检测,评价精子发生状态,并运用实时定量荧光PCR技术检测... 目的探索Sertoli细胞对去除小鼠精原细胞后睾丸的动态反应。方法采用15、30和44 mg/kg的白消安腹腔注射法建立不同程度去除精原细胞的动物模型,处理后5 d和28 d时对睾丸进行组织学检测,评价精子发生状态,并运用实时定量荧光PCR技术检测这两个时期睾丸GDNF、PLZF、Nanog和GFRα1基因mRNA的表达量。结果在白消安处理后第5天,GDNF出现显著升高,且呈剂量依赖趋势,而PLZF与GFRɑ1并无显著变化,睾丸组织学观察亦无明显变化。在白消安处理后28 d时,GDNF、PLZF、Nanog、GFRɑ1基因mRNA相对表达量均出现大幅度的升高,睾丸组织学切片观察显示随着给药剂量的增加,精子发生受到的损伤愈加严重。结论 Sertoli细胞早在白消安处理后第5天就对精原细胞的变化发生了反应,Sertoli细胞分泌GDNF的能力发生代偿性增加,进而刺激精原干细胞自我更新速度加快,体现在Nanog和PLZF水平提高,从而实现精子发生的重建。 展开更多
关键词 白消安 精原干细胞 sertoli细胞 睾丸 小鼠
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杀菌剂三氯卡班对小鼠Sertoli细胞生长状态的影响研究
8
作者 黄媛婷 张德勇 许晓路 《云南化工》 CAS 2018年第12期40-41,共2页
为分析杀菌剂三氯卡班TCC对哺乳动物生殖毒性的产生机制,体外培养小鼠睾丸Sertoli细胞TM4细胞系并给予TCC染毒,然后分析其增殖能力及抗氧化状态。结果显示,TCC可抑制TM4细胞的增殖,其72 h-IC50值为517.82μm/L。染毒剂量达500μm/L后,... 为分析杀菌剂三氯卡班TCC对哺乳动物生殖毒性的产生机制,体外培养小鼠睾丸Sertoli细胞TM4细胞系并给予TCC染毒,然后分析其增殖能力及抗氧化状态。结果显示,TCC可抑制TM4细胞的增殖,其72 h-IC50值为517.82μm/L。染毒剂量达500μm/L后,细胞普遍出现圆缩、死亡等形态学变化,并检测到总抗氧化能力下降及MDA和H2O_2蓄积。这显示TCC能直接损伤小鼠睾丸支持细胞,影响其增殖能力以及抗氧化状态。 展开更多
关键词 TCC 小鼠 sertoli细胞
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以支持细胞为饲养层培养小鼠精原干细胞 被引量:17
9
作者 李恩中 李德雪 +5 位作者 张世庆 王常勇 张学明 王海滨 鲁景艳 王静 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第4期774-779,共6页
为探索精原干细胞(Spermatogonialstemcells,SSCs)体外自增殖的条件以及SSCs体外快速扩增的方法,以6-8日龄昆明乳鼠为材料,分离小鼠睾丸细胞,采用Percoll梯度离心法富集SSCs;以经丝裂霉素C处理的Sertoli细胞作饲养层,以DMEM为基本培养基... 为探索精原干细胞(Spermatogonialstemcells,SSCs)体外自增殖的条件以及SSCs体外快速扩增的方法,以6-8日龄昆明乳鼠为材料,分离小鼠睾丸细胞,采用Percoll梯度离心法富集SSCs;以经丝裂霉素C处理的Sertoli细胞作饲养层,以DMEM为基本培养基,加入5%胎牛血清和103u/ml的白血病抑制因子(Leukemiainhibitoryfactor,LIF),体外培养SSCs;运用免疫荧光技术,以SSCs特异性表面分子Thy1为标志,对原代培养20d和传代培养14d的细胞进行鉴定。该培养体系下,SSCs贴壁时间为6h-9h,48h后可见细胞分裂,迅速增殖出现在接种12d以后。接种后第20d形成数十至上百个细胞的细胞团,细胞总数比接种时增加了45-245倍,100倍显微镜下观察可见,单位视野内细胞团数为26±4个。传代后细胞增殖较快。原代培养20d和传代培养14d的细胞均为Thy1阳性;而传代20d后,细胞周缘不整,有伪足出现,呈现出死亡迹象。该培养条比较适合SSCs短期快速增殖。 展开更多
关键词 小鼠 精原干细胞 sertoli细胞 饲养层
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小鼠睾丸支持细胞分离培养及生物学特性鉴定 被引量:6
10
作者 杨润军 李青旺 +2 位作者 许尚忠 高雪 姬爱国 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2008年第9期17-20,共4页
为了揭示睾丸支持细胞在精子发生及睾丸免疫豁免中的生物学作用,采用胰蛋白酶、胶原酶分步消化法和1/3浓度的Hank′s低渗液、50mmol/L Tris-HC(l pH7.1)液分别低渗处理及油红O脂质染色法对16~22d的幼鼠睾丸进行分离、纯化和生物学特性... 为了揭示睾丸支持细胞在精子发生及睾丸免疫豁免中的生物学作用,采用胰蛋白酶、胶原酶分步消化法和1/3浓度的Hank′s低渗液、50mmol/L Tris-HC(l pH7.1)液分别低渗处理及油红O脂质染色法对16~22d的幼鼠睾丸进行分离、纯化和生物学特性鉴定。结果表明:分离、纯化后的睾丸支持细胞损伤少、活率高、睾丸支持细胞占培养细胞总数的90%以上;根据形态学观察及油红O脂质染色法鉴定,睾丸支持细胞的生长状态良好,细胞突起很多,核仁清晰,胞质中可见大小不等的红色空泡状脂质小滴。 展开更多
关键词 睾丸支持细胞 分离 纯化 培养 小鼠
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草甘膦对小鼠睾丸支持细胞凋亡及雄激素结合蛋白、波形蛋白mRNA表达的影响 被引量:8
11
作者 赵文红 俞慧 +1 位作者 张建国 束莉 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1709-1712,F0003,共5页
目的探讨不同剂量草甘膦(GLY)对小鼠睾丸支持细胞(sertoli细胞)凋亡及细胞存活率的影响,同时观察雄激素结合蛋白(ABP)及波形蛋白mRNA表达的变化。方法体外原代培养小鼠sertoli细胞,收集细胞并分为正常对照组和不同剂量草甘膦组,草甘膦... 目的探讨不同剂量草甘膦(GLY)对小鼠睾丸支持细胞(sertoli细胞)凋亡及细胞存活率的影响,同时观察雄激素结合蛋白(ABP)及波形蛋白mRNA表达的变化。方法体外原代培养小鼠sertoli细胞,收集细胞并分为正常对照组和不同剂量草甘膦组,草甘膦的浓度分别为60、90、120、150和180 mg/L;各组细胞培养24 h后,倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态改变;MTT法检测细胞存活率;Hoechst 33342检测细胞凋亡情况;RT-PCR检测草甘膦对ABP及波形蛋白mRNA表达情况。结果在不同浓度草甘膦作用下,sertoli细胞出现不同程度缩小、脱落、甚至破碎;细胞的增值率明显低于对照组(P<0.01);细胞凋亡指数明显高于对照组(P<0.05);细胞ABP mRNA和波形蛋白mRNA表达与对照组相比均减弱(P<0.05)。结论草甘膦对小鼠sertoli细胞有一定的毒性,能诱导细胞凋亡及抑制细胞增殖,且随草甘膦剂量的增加,有害作用有增加的趋势;同时能抑制ABP和波形蛋白mRNA的表达。 展开更多
关键词 草甘膦 小鼠睾丸支持细胞 雄激素结合蛋白 波形蛋白
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白消安致小鼠精子再生模型的精子发生量化评价 被引量:4
12
作者 罗小敏 张茨 +1 位作者 杨嗣星 王玲珑 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期395-399,共5页
目的:量化评价白消安二次腹腔注射制备的小鼠精子再生模型。方法:54只8~10周龄雄性昆明白小鼠随机分为对照组和两个模型组,每组18只。模型组小鼠分别以10mg/kg和15mg/kg白消安间隔24d二次腹腔注射建立精子再生模型,对照组小鼠以50%二... 目的:量化评价白消安二次腹腔注射制备的小鼠精子再生模型。方法:54只8~10周龄雄性昆明白小鼠随机分为对照组和两个模型组,每组18只。模型组小鼠分别以10mg/kg和15mg/kg白消安间隔24d二次腹腔注射建立精子再生模型,对照组小鼠以50%二甲基亚砜溶液10ml/kg间隔24d二次腹腔注射。采用Johns-en评分量化给药后3、4和8周时生精上皮精子发生,运用实时定量PCR技术检测这3个时期支持细胞GATA结合蛋白4(GATA-4)mRNA和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)mRNA表达水平。结果:对照组Johnsen评分在各时期无显著差异(P>0.05)。给药后3周和4周,两模型组Johnsen评分均显著低于对照组(P<0.01);给药后4周和8周,15mg/kg组Johnsen评分均低于10mg/kg组(P<0.05);给药后8周,15mg/kg组Johnsen评分仍显著低于对照组(P<0.05),而10mg/kg组和对照组间无显著差异(P>0.05)。各组各时期支持细胞GATA-4mRNA表达均无显著差异(P>0.05)。对照组各时期支持细胞GDNF mRNA表达无显著差异(P>0.05)。两模型组支持细胞GDNF mRNA表达在给药后3周均高于对照组,而在给药后4周均低于对照组(P<0.01);给药后8周,15mg/kg组支持细胞GDNF mRNA表达低于对照组(P<0.01),而10mg/kg组与对照组无显著差异(P>0.05)。在以上3个时期,15mg/kg组GDNF mRNA表达均低于10mg/kg组(P<0.01)。结论:10mg/kg白消安间隔24d二次腹腔注射是建立小鼠精子再生模型的适宜剂量,增大剂量可使支持细胞GDNF mRNA表达不足,导致精子发生不能完全恢复。 展开更多
关键词 白消安 精子再生 量化评价 支持细胞 小鼠
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六味地黄丸提取物对小鼠支持细胞体外增殖的影响 被引量:4
13
作者 王庆忠 王东方 +3 位作者 刘慧莲 冯道俊 王汉海 郭祖宝 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1363-1365,共3页
目的探讨六味地黄丸提取物对小鼠支持细胞体外增殖的影响。方法通过形态学观察、MTT法检测细胞活力、TUNNEL法检测细胞凋亡指数和Brdu标记法检测细胞增殖活性等研究5个不同浓度的六味地黄丸提取物对小鼠支持细胞体外生长和增殖的作用。... 目的探讨六味地黄丸提取物对小鼠支持细胞体外增殖的影响。方法通过形态学观察、MTT法检测细胞活力、TUNNEL法检测细胞凋亡指数和Brdu标记法检测细胞增殖活性等研究5个不同浓度的六味地黄丸提取物对小鼠支持细胞体外生长和增殖的作用。结果当用20 mg/L以上的六味地黄丸提取物处理培养的小鼠支持细胞时,TENNEL法获得的细胞凋亡指数、MTT法测得的细胞生长抑制率和Brdu标记法测得的细胞增殖率与对照组相比有显著差异,并呈剂量依赖效应;细胞形态观察结果也证实这一现象。结论六味地黄丸提取物以剂量依赖方式促进体外培养的小鼠支持细胞的增殖,抑制细胞凋亡,可能通过促进支持细胞的增殖与活性促进精子发生。 展开更多
关键词 六味地黄丸 提取物 支持细胞 增殖 小鼠
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铁过载损伤小鼠睾丸支持细胞 被引量:4
14
作者 李莉 赵昱 +2 位作者 龚淼 王慧娟 高福禄 《基础医学与临床》 CSCD 2016年第3期321-326,共6页
目的探讨铁过载对体外原代培养的小鼠睾丸支持细胞(SC)的影响。方法取原代分离培养小鼠睾丸SC纯化并鉴定,加入不同浓度(50、100、200μmol/L)右旋糖酐铁注射液,培养至24、48和72 h后收集细胞,光学显微镜与流式细胞术鉴定铁过载,流式细... 目的探讨铁过载对体外原代培养的小鼠睾丸支持细胞(SC)的影响。方法取原代分离培养小鼠睾丸SC纯化并鉴定,加入不同浓度(50、100、200μmol/L)右旋糖酐铁注射液,培养至24、48和72 h后收集细胞,光学显微镜与流式细胞术鉴定铁过载,流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)水平,试剂盒检测丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和一氧化氮(NO)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,Western blot与免疫细胞化学检测闭锁蛋白(occludin)、雄激素结合蛋白(ABP)、转铁蛋白(TRF)、抑制素(INH)和波形蛋白(VIM)的表达。结果与对照组相比,铁过载组细胞内ROS、MDA、NO与NOS的含量显著增高(P<0.01),GSH含量、SOD和GSH-Px的活性显著降低(P<0.01),occludin、ABP、TRF、INH和VIM蛋白的表达明显降低(P<0.05)。结论铁过载可导致体外培养的睾丸支持细胞氧化性损伤并降低其功能。 展开更多
关键词 铁过载 支持细胞 小鼠 ROS 氧化损伤
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小鼠睾丸gdnf基因的克隆及其在支持细胞中的表达 被引量:2
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作者 段翠密 李恩中 +2 位作者 张世庆 王常勇 李德雪 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2007年第11期975-978,共4页
目的:从小鼠睾丸中克隆胶质细胞源神经营养因子基因gdnf,构建真核表达载体,并转染支持细胞,以便用作培养精原干细胞(SSCs)的滋养层。方法:以正常成年昆明鼠为材料,提取小鼠睾丸组织中总RNA后,以RT-PCR技术克隆小鼠睾丸gdnf基因,构建真... 目的:从小鼠睾丸中克隆胶质细胞源神经营养因子基因gdnf,构建真核表达载体,并转染支持细胞,以便用作培养精原干细胞(SSCs)的滋养层。方法:以正常成年昆明鼠为材料,提取小鼠睾丸组织中总RNA后,以RT-PCR技术克隆小鼠睾丸gdnf基因,构建真核表达载体,并转染TM4细胞(睾丸支持细胞株),在转染后40h进行免疫荧光鉴定。结果:成功克隆小鼠睾丸gdnf基因的cDNA,测序正确,免疫荧光细胞染色显示转染后的支持细胞中有GDNF蛋白表达。结论:本研究为以转染了gdnf基因的支持细胞作饲养层培养SSCs奠定了基础。 展开更多
关键词 睾丸 GDNF基因 转染 支持细胞 小鼠
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茶多酚对草甘膦致小鼠睾丸支持细胞氧化损伤及凋亡的保护作用 被引量:3
16
作者 赵文红 俞慧 +1 位作者 张建国 江城梅 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第19期2037-2040,共4页
目的探讨不同剂量的茶多酚(tea polyphenol,TP)对草甘膦(glyphosate,GLY)诱导小鼠睾丸支持细胞(sertoli细胞)氧化损伤及凋亡的拮抗作用。方法体外原代培养小鼠sertoli细胞,90 mg/L GLY培养液处理细胞形成sertoli细胞损伤模型,加入不同剂... 目的探讨不同剂量的茶多酚(tea polyphenol,TP)对草甘膦(glyphosate,GLY)诱导小鼠睾丸支持细胞(sertoli细胞)氧化损伤及凋亡的拮抗作用。方法体外原代培养小鼠sertoli细胞,90 mg/L GLY培养液处理细胞形成sertoli细胞损伤模型,加入不同剂量TP(浓度分别为10、20、40、80 mg/L),形成4个拮抗组,另设由正常培养基形成的对照组;各组细胞培养24 h后,倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态改变;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法检测细胞毒性;TUNEL法检测细胞凋亡情况;检测细胞中超氧化物歧化酶(super oxidase dimutase,SOD)活性、谷胱甘肽(glutathione,GSH)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。结果 GLY处理组细胞出现收缩变小、脱落、甚至破碎,细胞的存活率明显低于对照组(P<0.05),为对照组的47.03%;细胞内LDH活性明显高于对照组;细胞凋亡指数为(37.0±4.0)%,明显高于对照组(P<0.05);细胞内SOD活性、GSH含量与对照组相比明显降低,而MDA含量明显升高(P<0.05)。各拮抗组与GLY处理组相比,细胞形态有不同程度改善,尤其是拮抗组4(TP 80 mg/L)细胞生长状况明显好转,碎片明显减少;细胞的存活率、SOD活性及GSH含量明显升高(P<0.05,P<0.01);细胞凋亡指数、LDH活及MDA含量明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论 GLY对小鼠sertoli细胞具有诱导细胞凋亡及抑制细胞增殖,降低细胞抗氧化能力的影响,TP对GLY造成的这些损伤有一定的保护作用。 展开更多
关键词 茶多酚 草甘膦 小鼠睾丸支持细胞 氧化损伤 凋亡
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红景天提取物对顺铂诱导小鼠睾丸支持细胞损伤的保护作用 被引量:4
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作者 郭卓雨 高丽萍 李文文 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2013年第11期1027-1033,共7页
目的:体外研究红景天提取物对顺铂(cDDP)诱导小鼠睾丸支持细胞(TM4)损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法:体外培养正常TM4细胞,将细胞分组,MTr法测定红景天提取物、cDDP分别对TM4细胞生长的影响以及红景天提取物对cDD... 目的:体外研究红景天提取物对顺铂(cDDP)诱导小鼠睾丸支持细胞(TM4)损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法:体外培养正常TM4细胞,将细胞分组,MTr法测定红景天提取物、cDDP分别对TM4细胞生长的影响以及红景天提取物对cDDP诱导TM4细胞损伤的保护作用,同时观察细胞形态学变化。硫代巴比妥酸法测定细胞丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定总超氧化物歧化酶(T—SOD)含量,二硫代二硝基苯甲酸法测定谷胱甘肽(GSH)含量。结果:MTT结果显示,红景天提取物在0.0125~2.5mg/L终质量浓度范围内可拮抗cDDP诱导TM4细胞增殖率的降低(P〈0.01),改善cDDP诱导下TM4细胞形态学变化,减少胞体减小、变圆,细胞脱壁等现象。抗氧化实验结果表明,0.0147g/L的cDDP诱导下的TM4细胞内MDA含量[(3.63±0.02)nmol/mgprot]较正常对照组[(2.15±0.02)nmoL/mgprot]显著升高(P〈0.01),T—SOD、GSH含量[(6.57±0.05)U/mgprot、(1.42±0.06)mg/gprot]较正常对照组[(10.86±0.02U/mgprot、(2.59±0.05)mg/gprot]显著降低(P〈0.01);0.1mg/L红景天提取物可显著降低(P〈0.01)cDDP诱导TM4细胞内MDA含量[(1.94±0.00)nmo]./mgprot]、减缓T—SOD[(8.50±0.02)U/mgprot]和GSH[(2.41±0.04)mg/gprot]耗竭。结论:红景天提取物能有效抑制eDDP诱导TM4细胞损伤,其机制可能与红景天的抗氧化能力有关。 展开更多
关键词 红景天提取物 顺铂 睾丸支持细胞 生殖毒性 小鼠
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啶虫脒通过氧化应激损害小鼠睾丸的超微结构 被引量:2
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作者 张姣姣 王怡 +2 位作者 向海洋 王鲜忠 张家骅 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1457-1462,共6页
旨在研究啶虫脒对雄性小鼠睾丸支持细胞和生精细胞的损害作用是否与氧化应激有关。将50只成年昆明雄鼠(25~30g)随机分成5组,灌喂方式给药,所有实验动物连续灌喂35d,通过电镜观察睾丸超微结构的变化,并检测一氧化氮合酶(NOS)、羟自由基... 旨在研究啶虫脒对雄性小鼠睾丸支持细胞和生精细胞的损害作用是否与氧化应激有关。将50只成年昆明雄鼠(25~30g)随机分成5组,灌喂方式给药,所有实验动物连续灌喂35d,通过电镜观察睾丸超微结构的变化,并检测一氧化氮合酶(NOS)、羟自由基、谷胱甘肽(GSH)和总抗氧化能力(T-AOC)的变化确定抗氧化能力的变化。观察睾丸的超微结构发现,啶虫脒组小鼠睾丸的支持细胞胞质中内质网扩张,溶酶体数量减少;初级精母细胞的细胞核溶解,染色质异常聚集,线粒体固缩,细胞器较少;精子细胞的核染色质异常聚集,精子细胞内出现明显染色质样小体,线粒体固缩明显。此外,啶虫脒能引起睾丸中总一氧化氮合酶(TNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iN-OS)的活性及产生羟自由基的能力升高(P<0.05),GSH和T-AOC活性降低(P<0.05)。维生素E能够明显降低啶虫脒对睾丸超微结构的损害作用。研究结果表明啶虫脒通过诱导氧化应激对小鼠睾丸的超微结构产生损害作用。 展开更多
关键词 啶虫脒 小鼠 睾丸支持细胞 生精细胞 超微结构 氧化应激
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小鼠睾丸支持细胞Attractin基因的抗氧化和抗凋亡作用的初步研究 被引量:2
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作者 李洁 王清 +2 位作者 程丹 杨菁 熊承良 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2014年第9期787-791,共5页
目的:观察Attractin(Atrn)基因不同程度缺失对小鼠睾丸支持细胞抗氧化和抗凋亡的作用,及其对细胞超氧化物歧化酶(SOD)、caspase 6表达的影响。方法:观察Atrn基因正常表达、部分缺失、完全缺失的三组细胞(psiRNA-TM4、psiAtrn-TM4、mu-SC... 目的:观察Attractin(Atrn)基因不同程度缺失对小鼠睾丸支持细胞抗氧化和抗凋亡的作用,及其对细胞超氧化物歧化酶(SOD)、caspase 6表达的影响。方法:观察Atrn基因正常表达、部分缺失、完全缺失的三组细胞(psiRNA-TM4、psiAtrn-TM4、mu-SC)的细胞凋亡指数;采用荧光定量PCR、Western印迹技术检测SOD、caspase 6mRNA及蛋白表达水平;采用化学比色法检测细胞中SOD活性和丙二醛(MDA)含量。结果:与对照组psiRNATM4比较,抑制Atrn基因的表达后,支持细胞的SOD mRNA表达水平下降,psiAtrn-TM4、mu-Sc组细胞SOD mRNA表达量分别下降了70.76%和92.58%,caspase 6 mRNA表达水平上升,分别为对照组的5.28倍和2.97倍;蛋白水平的变化趋势与mRNA结果一致,psiAtrn-TM4及mu-Sc组细胞中SOD蛋白的表达分别下降了65.11%和71.0%,caspase 6蛋白表达分别为对照组的3.4倍和2.5倍,差异均有统计学意义(P<0.05)。抑制Atrn基因表达后,psiAtrn-TM4、mu-SC组细胞凋亡率分别增加16.22%和22.03%,SOD活性分别下降23.00%和39.37%,mu-SC组MDA含量增加155.22%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Atrn基因对睾丸支持细胞功能的影响是通过多途径实现的,抗氧化应激以及调控凋亡途径可能在其中起着重要作用。 展开更多
关键词 ATTRACTIN 凋亡 CASPASE 6 支持细胞 小鼠 超氧化物歧化酶
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新生昆明小鼠睾丸支持细胞和精原细胞的共培养及支持细胞的作用 被引量:2
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作者 张晓丽 高英茂 +1 位作者 赵舒武 邴鲁军 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期240-245,共6页
目的分离、纯化、培养小鼠睾丸支持细胞,通过与精原细胞共培养,研究体外培养的支持细胞对精原细胞的影响。方法用复合酶消化、密度梯度离心和差异贴壁法分离、纯化、培养新生小鼠睾丸支持细胞,以苏丹Ⅳ染色鉴定支持细胞;用丝裂霉素-C处... 目的分离、纯化、培养小鼠睾丸支持细胞,通过与精原细胞共培养,研究体外培养的支持细胞对精原细胞的影响。方法用复合酶消化、密度梯度离心和差异贴壁法分离、纯化、培养新生小鼠睾丸支持细胞,以苏丹Ⅳ染色鉴定支持细胞;用丝裂霉素-C处理支持细胞后作为饲养层,与精原细胞共培养;以直接分离培养的精原细胞作对照。倒置相差显微镜观察,细胞培养第3天,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定精原细胞的增殖率;膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/磷脂酰肌醇(ANNEXIN-Ⅴ-FITC/PI)染色;激光扫描共焦显微镜观察记录精原细胞的凋亡率,比较精原细胞克隆大小、存活时间、增殖率和凋亡率的不同。结果分离、纯化后经苏丹Ⅳ染色鉴定的小鼠支持细胞纯度可达95%以上,与支持细胞共培养的精原细胞的克隆大小、存活时间和细胞增殖率明显高于对照组,而凋亡率则明显低于对照组。结论支持细胞可以促进精原细胞的增殖,抑制其凋亡。 展开更多
关键词 支持细胞 精原细胞 饲养层 共培养 小鼠
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