人白细胞介素6逆转录病毒表达载体的构建

实验以ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔｌｌｋｓ质粒为载体，构建了人白细胞介素６次级克隆ｐＢＩＬ－６。用限制性内切ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＶ消化ｐＢＩＬ－６，分离并回收了ＩＬ－６ｃＤＮＡ片段，并在其平未端加入了ＢａｍＨＩ接头。实验将带有ＢａｍＨＩ粘性末端的ＩＬ－６全基因片段插入到了逆转录病毒载体ｐＺＬＰＮｅｏＳＶ（Ｘ）１的ＢａｍＨＩ位点上，构建了重组质粒ｐＺＬＰＩＬ－６。经对重组予ＤＮＡ的琼脂糖凝胶电泳、限制住内切酶分析和核酸杂交鉴定，筛选出了含有ＩＬ－６ｃＤＮＡ片段及插入方向正确的ｐＺＬＰＩＬ－６。

构建鼠IL－6反义RNA的逆转录病毒重组体

用限制性内切酶消化、提取鼠白细胞介素６ｃＤＮＡ全基因，并克隆至逆转录病毒穿梭质粒ｐＺＩＰ－ｎｅｏＳＶ（ｘ）ＢａｍＨⅠ位点，经斑点杂交，限制性内切酶消化，电泳鉴定，证实成功地构建了表达鼠ＩＬ－６反义ＲＮＡ的逆转录病毒重组体，从而为研究白细胞介素６基因转移与治疗提供了物质基础。