运动训练对创伤后应激障碍小鼠焦虑和抑郁样行为的影响

目的:探讨运动缓解创伤后应激障碍(PTSD)焦虑抑郁样行为的作用及促进海马神经再生的中枢调控机制。方法:将雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组(Control)、PTSD建模组(PTSD)、建模后低强度运动组(PTSD+LE)和建模后高强度运动组(PTSD+HE)。采用条件性足部电击(CF)和单次-持续应激(SPS)相结合的方法,构建PTSD复合应激模型。利用旷场实验和悬尾实验分别评估小鼠的焦虑和抑郁样行为。通过免疫荧光双标实验观察小鼠海马DG区新生成熟神经元和增殖细胞。采用Western Blot检测小鼠海马脂联素受体1(AdipoR1)的表达情况。结果:旷场实验结果表明PTSD+HE组小鼠在中央区域的活动距离以及逗留时间明显长于PTSD组及PTSD+LE组(P<0.05);悬尾实验结果显示与PTSD组小鼠相比,不同程度运动训练组小鼠的不动时间明显减少(P<0.05),而且PTSD+HE组更显著(P<0.05)。此外,PTSD+HE组小鼠海马DG区的BrdU+、BrdU+/NeuN+与MCM2+细胞密度明显升高(P<0.05)。PTSD+HE组小鼠海马AdipoR1蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论:PTSD小鼠焦虑和抑郁样行为与海马神经再生水平下降有关。运动可改善其焦虑和抑郁样行为,作用机制可能与促进AdipoR1表达、促进海马神经再生有关。

脂联素对小鼠葡萄糖刺激下胰岛素分泌的影响

目的观察脂联素干预后小鼠葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)的变化。方法分离获得原代小鼠胰岛,使用胶原酶Ⅴ消化小鼠胰腺,反复过滤离心后体式显微镜下手工挑取胰岛;胰岛的纯度采用双硫棕(DTZ)染色法鉴定;采用RTPCR的方法检验小鼠胰岛细胞表面脂联素受体(AdipoR)的表达;分为溶剂对照组(Con组)和脂联素组(Ad组),观察脂联素干预后小鼠胰岛在低糖(LG)和高糖(HG)刺激下胰岛素分泌的变化。结果该方法获得的胰岛外形饱满,状态良好;胰岛细胞表面AdipoR1及AdipoR2的表达分别为0.56±0.08、0.32±0.03,P<0.05;使用脂联素干预后,体外刺激胰岛素分泌实验,测得胰岛素含量使用胰岛素总量标化后分析得到:低糖时Ad组胰岛素总量(0.01410±0.00088)低于低糖时Con组(0.01470±0.00110),差异无统计学意义;高糖时Ad组胰岛素总量(0.04420±0.00408)显著高于高糖时Con组(0.03150±0.00274)及低糖时Ad组,P<0.05;高糖时Con组胰岛素总量显著高于低糖时Con组,P<0.01。结论使用胶原酶Ⅴ消化获得的小鼠原代胰岛纯度高、活性好;小鼠胰岛细胞表面有AdipoR的表达;低糖情况下,脂联素对胰岛素分泌无明显影响,高糖刺激下,脂联素对胰岛素分泌有促进作用。

小鼠脂联素受体-1的生物信息学分析及其抗体制备

本文旨在根据小鼠脂联素受体-1(adiponectin receptor-1,AdipoR-1)的分子结构,制备抗AdipoR-1的多克隆抗体,为AdipoR-1的进一步研究创造条件。利用生物信息学分析预测小鼠AdipoR-1的理化特性、跨膜结构和抗原表位,结合AdipoR-1和AdipoR-2氨基酸序列相似性比对结果,设计出一段由16个氨基酸组成的多肽,用此肽段免疫大鼠得到多克隆抗体,利用ELISA、Westernblot等方法鉴定其特异性和滴度,并将该抗体用于正常及高胆固醇血症小鼠肌肉组织AdipoR-1的表达检测。结果表明,此抗体效价较高、特异性强。以上结果提示,生物信息学分析能较好地预测小鼠AdipoR-1的抗原表位,并成功制备高特异性的多克隆抗体。

NR4A1对小鼠卵巢颗粒细胞脂肪代谢相关调控因子的调节作用

目的观察NR4A1对小鼠卵巢颗粒细胞中脂肪代谢相关调控因子脂联素受体2(Adipo-R2)、解偶联蛋白2(UCP2)、B类清道夫受体(CD36)的调节作用。方法分别构建NR4A1超表达腺病毒载体(AdCMV-NR4A1)及干涉腺病毒载体(AdH1-siRNA/NR4A1)。体外培养小鼠卵巢颗粒细胞,贴壁生长至90%时,分为病毒感染组、胰岛素(100nmol/L)与胰岛素增敏剂(10μmol/L)组和病毒十胰岛素组。Trizol裂解细胞提取总RNA,实时荧光定量PCR法检测颗粒细胞中Adipo-R2,UCP2,CD36的mRNA表达水平。结果在小鼠卵巢颗粒细胞中超表达NR4A1能够促进Adipo-R2,UCP2,CD36基因的转录(P<0.05),RNA干扰NR4A1后则可以抑制以上基因的表达(P<0.05);胰岛素可以促进UCP2,CD36基因的表达(P<0.05),而对Adipo-R2的作用不明显;另外胰岛素增敏剂曲格列酮也能够促进Adipo-R2,UCP2,CD36的表达(P<0.05);RNA干扰NR4A1 24h后,再向细胞中加入生理剂量(100nmol/L)胰岛素30min后Adipo-R2,UCP2,CD36的表达水平与单独干涉组比均可逆转升高(P<0.05),其中UCP2的表达水平可升高到胰岛素组同样的水平,但Adipo-R2,CD36的逆转升高水平并没有达到仅加入胰岛素时的升高水平(P<0.05)。结论 NR4A1对Adipo-R2,UCP2,CD36具有正向调节作用,同时与胰岛素或胰岛素增敏剂可能有协同调节作用,进而发挥对脂肪代谢的调控。

脂联素受体在胰岛细胞表达,脂联素促进胰岛素的分泌

目的检测脂联素受体(AR)在大鼠胰岛细胞的表达和脂联素对体外胰岛细胞分泌胰岛素的影响.方法 RT-PCR和免疫细胞化学方法检测AR1、AR2的mRNA和蛋白表达;并在体外用脂联素(100 μg/L)和不同浓度葡萄糖(3.3,5.6,16.7 mmol/L)处理胰岛细胞,放免法测定上清液的胰岛素浓度.结果 RT-PCR扩增出胰岛AR1和AR2基因,并经直接和亚克隆测序证实;胰岛免疫细胞化学荧光染色AR1和AR2呈阳性;经脂联素处理后的胰岛细胞,在高糖(16.7 mmol/)培养6～24 h,其胰岛素分泌持续增加(均P＜0.05).结论胰岛细胞上存在AR1和AR2,以前者为主.在高糖情况下,一定浓度的脂联素可在体外促进胰岛细胞的胰岛素分泌和释放.

黄连人参对药对自发性2型糖尿病大鼠脂联素及其受体表达的影响

目的观察清热益气中药黄连人参对药对自发性2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛纤维化、脂联素(ADPN)水平及其受体(ADPNR)表达的影响。方法采用高热量高脂饲料喂养诱导GK大鼠,建立自发性T2DM大鼠模型。造模成功大鼠随机分为2组:模型组、黄连人参组,每组10只;另取雄性Wistar大鼠10只为正常对照组。黄连人参组以3.8 g/(kg·d)黄连人参水溶液(1.9 g生药/m L)灌胃,正常对照组和模型组灌服等量蒸馏水,持续给药4周。治疗前后进行OGTT试验,治疗后观察胰岛纤维化、ADPN及ADPNR在胰岛的表达情况。结果治疗前与正常对照组比较,模型组FPG与2h PG均升高(P<0.01)。治疗后与正常对照组比较,模型组大鼠体重、FPG与2h PG均升高(P<0.01),黄连人参组体重及2h PG较模型组降低(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组胰岛内ADPNR1表达水平降低,胰岛内纤维结缔组织含量升高(P<0.01);与模型组比较,黄连人参组胰岛内ADPNR1表达水平升高(P<0.01),胰岛内纤维结缔组织含量降低(P<0.05)。3组间ADPN水平及ADPNR2表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论清热益气中药黄连人参可能通过上调ADPNR1表达,提高ADPN生物利用率,改善胰岛纤维化,促进胰岛损伤修复。