人源转录调控因子MRG15(MORF4related gene on chromosome 15)是在胚胎发育,细胞增殖和衰老过程中具有重要作用的蛋白质.在分子水平上,MRG15的chromo结构域能够与组蛋白H3甲基化的肽段H3K36me3相互作用.为了确定二者的作用位点和方式,...人源转录调控因子MRG15(MORF4related gene on chromosome 15)是在胚胎发育,细胞增殖和衰老过程中具有重要作用的蛋白质.在分子水平上,MRG15的chromo结构域能够与组蛋白H3甲基化的肽段H3K36me3相互作用.为了确定二者的作用位点和方式,利用液体核磁共振的方法对MRG15 chromo结构域和H3K36me3多肽进行了研究.对MRG15chromo结构域进行归属,用化学位移扰动的方法研究了其与H3K36me3肽段的相互作用,确定了相互作用位点的关键氨基酸为H21,Y46,W49和W53,并计算了解离常数约为1mmol/L.研究结果对于阐明MRG15与组蛋白H3的结合和相互作用机制提供了重要的线索.展开更多
目的克隆人MRG15(MORF4-related-gene on chromosome15)的编码基因,构建荧光表达载体,并检测其在培养人晶状体上皮细胞中的表达,为研究MRG15与年龄相关性白内障(age related cataract,ARC)的相关性奠定基础。方法用RT-PCR的方法从人ARC...目的克隆人MRG15(MORF4-related-gene on chromosome15)的编码基因,构建荧光表达载体,并检测其在培养人晶状体上皮细胞中的表达,为研究MRG15与年龄相关性白内障(age related cataract,ARC)的相关性奠定基础。方法用RT-PCR的方法从人ARC的晶状体前囊膜中扩增MRG15的编码基因,克隆至pMD18-T载体并测序,结果正确后亚克隆至荧光真核表达载体pEGP-N2中,酶切鉴定正确后采用脂质体法,瞬时转染培养人晶状体上皮细胞,荧光显微镜下检测MRG15-pEGP-N2的定位。结果测序证实,从人ARC晶状体前囊膜中扩增出的MRG15编码基因的序列及读框全部正确。重组质粒MRG15-pEGP-N2经酶切后产生与理论预期长度相符的片段。脂质体法转染后24h,观察到其主要在培养人晶状体上皮细胞的细胞核中表达。结论克隆了人MRG15的编码基因,成功构建了荧光真核表达载体MRG15-pEGP-N2,并可在培养人晶状体上皮细胞中表达。展开更多
目的研究细胞周期调控蛋白(MRG15)在哺乳动物细胞中的表达与定位。方法以含人MRG15全长cDNA序列的质粒为模板,PCR扩增,构建MRG15真核表达载体,分别利用Western blot法和免疫荧光法检测其在哺乳动物细胞株中的表达与定位。结果 Western b...目的研究细胞周期调控蛋白(MRG15)在哺乳动物细胞中的表达与定位。方法以含人MRG15全长cDNA序列的质粒为模板,PCR扩增,构建MRG15真核表达载体,分别利用Western blot法和免疫荧光法检测其在哺乳动物细胞株中的表达与定位。结果 Western blot法检测结果表明MRG15在哺乳动物细胞中能有效地表达,免疫荧光法结果显示MRG15主要分布在细胞核。结论 MRG15蛋白主要在细胞核中表达,为进一步了解MRG15的功能奠定了一定基础。展开更多
文摘目的克隆人MRG15(MORF4-related-gene on chromosome15)的编码基因,构建荧光表达载体,并检测其在培养人晶状体上皮细胞中的表达,为研究MRG15与年龄相关性白内障(age related cataract,ARC)的相关性奠定基础。方法用RT-PCR的方法从人ARC的晶状体前囊膜中扩增MRG15的编码基因,克隆至pMD18-T载体并测序,结果正确后亚克隆至荧光真核表达载体pEGP-N2中,酶切鉴定正确后采用脂质体法,瞬时转染培养人晶状体上皮细胞,荧光显微镜下检测MRG15-pEGP-N2的定位。结果测序证实,从人ARC晶状体前囊膜中扩增出的MRG15编码基因的序列及读框全部正确。重组质粒MRG15-pEGP-N2经酶切后产生与理论预期长度相符的片段。脂质体法转染后24h,观察到其主要在培养人晶状体上皮细胞的细胞核中表达。结论克隆了人MRG15的编码基因,成功构建了荧光真核表达载体MRG15-pEGP-N2,并可在培养人晶状体上皮细胞中表达。
文摘目的研究细胞周期调控蛋白(MRG15)在哺乳动物细胞中的表达与定位。方法以含人MRG15全长cDNA序列的质粒为模板,PCR扩增,构建MRG15真核表达载体,分别利用Western blot法和免疫荧光法检测其在哺乳动物细胞株中的表达与定位。结果 Western blot法检测结果表明MRG15在哺乳动物细胞中能有效地表达,免疫荧光法结果显示MRG15主要分布在细胞核。结论 MRG15蛋白主要在细胞核中表达,为进一步了解MRG15的功能奠定了一定基础。