右美托咪定通过脊髓MrgC受体参与调控小鼠骨癌痛吗啡耐受

目的:通过骨癌痛(bone cancer pain,BCP)小鼠模型明确右美托咪定是否参与吗啡耐受并探索其机制。方法:使用Lewis肺癌细胞系制备C57BL/6小鼠股骨癌痛动物模型。对BCP小鼠进行鞘内置管,连续7天注射吗啡诱导耐受产生。von Frey纤维丝评估小鼠左后足50%机械刺激缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)、热板法评估热缩足潜伏期阈值(thermal withdrawal threshold,TWL)。给药第7天后取L3~L5节段脊髓,使用免疫组化实验和Western Blotting(WB)方法检测小鼠脊髓Mas相关基因C受体(Mas-related gene C receptor,MrgC)的表达。通过对吗啡耐受的BCP小鼠鞘内注射右美托咪定,探索其可能的机制。结果:自建模后第7天起,BCP小鼠左后足50%MWT显著下降,TWL明显缩短(P<0.05)。建模后第14天起鞘内给予吗啡,给药的第1~4天,BCP小鼠左后足50%MWT明显上升,TWL明显增加(P<0.05),给药的第5天开始50%MWT逐渐下降,TWL明显缩短。但预先鞘内给予右美托咪定后,给药的第1~7天BCP小鼠左后足50%MWT持续增高,TWL持续延长(P<0.05),且免疫组化和WB结果显示MrgC表达明显增加。结论:右美托咪定可缓解BCP小鼠吗啡耐受的形成,这一作用可能与右美托咪定促进BCP小鼠脊髓MrgC表达和活化有关。

鞘内注射MrgC抗体对电针干预CFA大鼠慢性炎性痛及脊髓背角NR1表达的影响

[目的]观察鞘内注射Mas-related G Protein-coupled C(MrgC)抗体对电针(Electroacupuncture,EA)干预完全福氏佐剂(Complete?Freund's?Adjuvant,CFA)所致大鼠慢性炎性痛及脊髓背角(Spinal dorsal horn,SDH)N-甲基-D-天门冬氨酸受体亚基1(N-methyl-d-aspartate receptors1,NR1)表达的影响。[方法]SD雄性大鼠28只,脊髓鞘内插管成功后建立CFA模型,造模后随机分为生理盐水(Saline)组、MrgC抗体(MrgC Ab)组、MrgC Ab+EA组和Saline+EA组,每组7只。两EA干预组从造模24h后在患侧"足三里"和"昆仑"穴开始电针刺激,参数为2/100Hz、30min,1次/d,连续7d,其余各组均做相应固定处理。造模后7d,各组大鼠鞘内注射相应试剂。在造模前和造模后24h、6d、7d检测大鼠患足热缩退潜伏期(Thermal Paw Withdrawal Latency,T-PWL)。免疫组织化学法检测各组大鼠患侧SDH NR1的表达。[结果](1)各组大鼠在CFA造模前和造模后24h时,T-PWL均无明显差异。第6d时,与Saline组相比,MrgC Ab+EA组和Saline+EA组大鼠患足T-PWL显著延长(P<0.01),MrgC Ab组大鼠患足T-PWL无统计学差异。第7d时,与Saline组相比,MrgC Ab组大鼠T-PWL明显缩短(P<0.05),而Saline+EA组显著延长(P<0.01);与Saline+EA组比较,MrgC Ab+EA组大鼠T-PWL显著缩短(P<0.05)。(2)与Saline组比较,MrgC Ab组SDH NR1表达量显著提高(P<0.01);EA干预后大鼠SDH NR1表达量显著降低(P<0.01),MrgC Ab+EA组大鼠SDHNR1表达量也显著高于Saline+EA组大鼠(P<0.05)。[结论]鞘内注射MrgC抗体能显著拮抗电针对CFA诱导性慢性炎性痛的镇痛作用,电针镇痛效应可能与下调大鼠患侧脊髓背角NR1受体表达有关。

MrgC受体激活翻转慢性应用吗啡诱发的谷氨酸转运体和nNOS改变

本研究旨在探讨激活MrgC受体(Mas-related gene C receptors)调制吗啡耐受的细胞学机制。对大鼠连续6天鞘内注射10μL生理盐水、吗啡(20μg)、吗啡+牛肾上腺髓质8-22(bovine adrenal medulla 8-22,BAM8-22,1 nmol,隔天注射)或(Tyr6)-2-MSH-6-12(MSH,5 nmol,隔天注射);用Western blot、免疫组织化学和实时荧光定量PCR的方法检测脊髓和背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)中与吗啡耐受相关分子的表达。结果显示:鞘内给予选择性MrgC受体激动剂BAM8-22或MSH,能抑制慢性应用吗啡所诱发的脊髓背角和/或DRG中谷氨酸转运体(GLAST、GLT-1、EAAC1)的减少和神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)的增加。此外,检测到MrgC受体样免疫活性表达于脊髓背角浅层;慢性应用吗啡使脊髓背角MrgC受体样免疫活性和DRG中MrgC受体mRNA水平都增加。这些结果提示,MrgC受体通过抑制慢性应用吗啡所诱发的脊髓和DRG中的痛介质增加,而抑制吗啡耐受。

激活脊髓MrgC受体抑制大鼠痛觉过敏

研究旨在探讨激活脊髓MrgC （Mas-related gene C）受体对痛觉过敏的作用及细胞学机制。在大鼠足底皮下注射（Tyr6）-γ2-MSH-6–12 （MSH）或完全弗氏佐剂（complete Freund’s adjuvant, CFA）形成痛觉过敏或炎性痛模型，通过缩足反射和免疫组织化学等方法观察鞘内给予MrgC受体特异性激动剂MSH或牛肾上腺髓质8-22肽（bovine adrenal medulla 8-22, BAM8-22）对痛觉过敏的影响。结果显示，鞘内给予MSH不影响正常大鼠对热伤害性刺激引起的缩足潜伏期变化，但能抑制足底注射MSH引起的急性痛觉敏感反应，还能降低CFA引起的痛觉过敏，鞘内给予μ阿片受体（μ-opioid receptor, MOR）拮抗剂CTAP （D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Arg-Thr-Pen-Thr-NH2）能阻止鞘内给予MSH的延迟抗痛觉过敏作用。鞘内给予BAM8-22能显著降低CFA引起的脊髓背角L3～L5节段一氧化氮合酶（nitric oxide synthase, NOS）阳性神经元数量和降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide, CGRP）样免疫活性物质的表达。以上结果提示，鞘内激活MrgC受体通过抑制NOS阳性神经元活性和下调CGRP阳性产物表达来降低痛觉过敏，并能通过间接机制调制MOR起到延时持续抗痛觉过敏作用。因此，MrgC受体激动剂有望成为一类新型抗炎症痛觉过敏的药物。

干扰大鼠背根神经节MrgC受体mRNA的实验研究

大鼠MrgC受体与人的MrgX1受体有相似特性,但至今尚无MrgC受体的拮抗剂,阻碍了对其功能的研究.将大鼠的背根神经节(DRG)进行体外培养,加入小分子片段RNA(siRNA)对MrgC受体进行干扰.干扰时间为4 h,24 h之后再重复干扰1次.结果显示干扰后DRG中MrgC受体的mRNA表达减少84%,表明该分子片段RNA能有效使MrgC受体基因"沉默".

慢性激活MrgC受体上调CGRP表达的nNOS机制

目的:检查持续应用BAM8-22对体外组织培养感觉神经节合成钙调素基因相关肽(CGRP)的影响。方法:将体外培养的大鼠三叉神经节和背根神经节经BAM8-22和L-NAME处理后,用酶联免疫法测定CGRP的表达含量变化。结果:与对照组相比,连续4天给予SNSR的选择性激动剂BAM8-22,CGRP的合成会增加。联合给予BAM8-22和NOS的非选择性抑制剂L-NAME,CGRP的表达随不同剂量的L-NAME引起不同程度的上调。结论:持续激活SNSR能使感觉神经节合成CGRP增多,是在体动物慢性激活SNSR后吗啡镇痛作用降低的细胞学机制。

Gi蛋白介导MrgC受体对CFA炎症痛的抗痛觉过敏作用

通过观察完全弗氏佐剂(complete Freund's adjuvant,CFA)炎症痛大鼠对伤害性热刺激的缩足反射潜伏期(paw withdrawal latency,PWL)变化,探讨Gi蛋白是否介导MrgC受体(Mas-related gene C receptors,MrgC)对炎症痛的抗痛觉过敏作用.结果显示,椎管内给予MrgC受体激动剂BAM8-22(bovine adrenal medulla 8-22,BAM8-22)能明显延长CFA炎症鼠在24 h和48 h时的缩足反射潜伏期基础值,并显著增强24h时的抗伤害作用.椎管内预先给予百日咳毒素(pertussis toxin,PTX)能抑制Gi蛋白的功能.在给予PTX7 d后,初次给予BAM8-22并不能延长CFA炎症鼠24 h时的缩足潜伏期基础值,但在24 h时再次注射BAM8-22时,能显著增强其抗伤害作用和48 h时的缩足潜伏期基础值.以上结果说明在CFA炎症痛模型中,预先给予PTX能抑制BAM8-22的抗痛觉过敏作用,但重复再次给予BAM8-22能恢复Gi蛋白的功能.表明Gi蛋白及其相关信号通路介导MrgC受体在炎症痛中的抗痛觉过敏作用.

鞘内激活MrgC受体在病理性疼痛和吗啡耐受中的作用

啮齿类动物的MrgC受体(Mas-related G-protein-coupled receptor subtype C)与人类Mas相关基因X受体1 (human Masrelated gene X receptor 1, hMrgX1)享有65%的同源序列和相似的表达模式以及结合谱,因此学者一般通过研究MrgC受体的功能来探索hMrgX1的作用。MrgC受体属于G蛋白耦联受体家族的一员,特异性地表达在背根神经节(dorsal root ganglion, DRG)和三叉神经节(trigeminal ganglion, TG)的小直径神经元上,与痛觉的传递过程密切相关。本文综述了鞘内激活MrgC受体在病理性疼痛和吗啡耐受中的镇痛作用。

BAM22及其功能的研究进展

BAM22(Bovine adrenal medulla 22)是脑啡肽原(proenkephalin A,内源性Met-和Leu-enkephalins的前体)的一种降解产物。BAM22神经肽能够与μ、-δ-和κ-阿片受体特异性地结合,具有阿片样生物活性。近来发现,BAM22还能与感觉神经元特异性受体(sensory neuron-specific receptor,简称SNSR受体)─一种最新的G蛋白偶联的孤儿受体─结合,发挥非阿片样生物活性。SNSR只独特地分布在背根神经节中管理痛觉的神经元中,而BAM22又是体内自然存在的、对SNSR有很高活性的物质,因而重新引起人们的兴趣。本文就目前BAM22生理活性、生物作用的特点及其功能的研究状况作一综述。