大豆蛋白-葡聚糖共价物酶法凝胶的冻融稳定性研究

研究了冻融循环过程中,谷氨酰胺转氨酶交联的不同质量浓度(30,40,50,60 mg/mL)大豆分离蛋白-葡聚糖共价物(SPI-D)凝胶的持水性、弹性、硬度、可溶性蛋白含量、微观形貌及结构的变化。SDS-PAGE试验证实大豆分离蛋白与葡聚糖发生美拉德反应,生成大豆分离蛋白-葡聚糖共价物。随着SPI质量浓度的升高,SPI-D的接枝度先增大后减小,50 mg/mL时达到最大值12.54%。表面疏水性和内源荧光光谱分析表明,随着美拉德反应的进行,蛋白柔性增大,无序性增加,朝有利于冻融稳定的方向转变。与对照相比,5次冻融循环后,SPI-D、SPI与D混合物(SPI+D)、SPI凝胶持水性分别降低了32.46%,42.81%,44.98%,硬度分别增加了124.66%,271.51%,343.38%,弹性分别升高了4.38%,9.58%,11.76%,可溶性蛋白含量分别降低了2.05%,3.61%,7.17%,SPI-D凝胶的各项指标变化幅度均最小,冻融稳定性最好。扫描电镜图表征了凝胶微观形貌,相比SPI+D和SPI,SPI-D凝胶孔隙更小且组织状态更均匀,说明美拉德反应是提升酶法大豆分离蛋白凝胶冻融稳定性的有效方法。

桑叶提取物对绿头鸭生长性能、屠宰性能、肉品质、血清生化指标及抗氧化能力的影响

本试验旨在研究饲粮中添加桑叶提取物对绿头鸭生长性能、屠宰性能、肉品质、血清生化指标及抗氧化能力的影响。选用30日龄、体重相近的绿头鸭360只,随机分为4组,每组6个重复,每个重复15只。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加100、200、400 mg/kg桑叶提取物。预试期7 d,正试期60 d。结果表明:1)400 mg/kg组平均日增重显著高于对照组(P<0.05)。2)200、400 mg/kg组胸肌率和腿肌率显著高于对照组(P<0.05)。3)200、400 mg/kg组肌肉亮度和红度值比对照组显著提高(P<0.05),肌肉黄度值比对照组显著降低(P<0.05)。4)400 mg/kg组肌肉胆固醇含量显著低于对照组(P<0.05),肌苷酸含量显著高于对照组(P<0.05)。5)与对照组相比,400 mg/kg组血清胆固醇、葡萄糖和低密度脂蛋白胆固醇含量显著降低(P<0.05)。6)与对照组相比,400 mg/kg组血清总抗氧化能力、总超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性显著提高(P<0.05)。综上所述,绿头鸭饲粮中添加桑叶提取物可提高生长性能和屠宰性能,改善肉品质,提高抗氧化能力。本研究推荐绿头鸭饲粮中桑叶提取物适宜添加水平为400 mg/kg。

一株野鸭源H4N6亚型禽流感病毒A/mallard/Yancheng/2005的全基因组克隆和序列分析

应用流感病毒通用引物对盐城珍禽自然保护区野鸭泄殖腔棉拭子分离株禽流感病毒A/mallard/Yancheng/2005(简称Mallard/YC/2005)(H4N6)进行全基因组序列扩增,结合GenBank中的相关序列进行遗传进化分析。结果表明,Mallard/YC/2005(H4N6)HA基因与A/duck/Siberia/1701/1996(H4N6)的核苷酸同源性最高(97.5%),推导的氨基酸剪切位点序列为PEKASR,为典型低致病性禽流感病毒的特征序列;神经氨酸酶(NA)、非结构蛋白(NS)均没有氨基酸缺失;基质蛋白2(M2)与宿主特异性有关的位点及碱性聚合酶2(PB2)的627位都是亲禽类细胞的氨基酸;M基因与家鸭分离株A/duck/Yangzhou/02/2005(H8N4)的核苷酸同源性为99.4%,PA基因与家鸭分离株A/duck/Jiangxi/1286/2005(H5N2)的核苷酸同源性达98.9%,说明这2个基因已经在家鸭体内存在并参与了基因重排。

浙江省主要野鸭品种(系)生产性能及肉质性状比较分析

对70日龄斑嘴野鸭(Ⅰ组)、野生绿头野鸭×绍兴鸭(Ⅱ组)、西湖野鸭(Ⅲ组)以及野生绿头野鸭×西湖野鸭(Ⅳ组)进行屠宰试验,并测定各组的若干肉质指标。结果表明:鸭种是影响产肉力的主要因素,胸肉和腿肉的物理特性决定鸭肉的食用价值;4组野鸭相比,Ⅱ组全净膛重最轻,胸腿肉比例高,胸肉最大,肉色最深,肉嫩度最好;Ⅰ组、Ⅲ组肉用性能和肉质次之,Ⅳ组最差。

HA基因322位和329位氨基酸对H5N1亚型禽流感病毒毒力的影响

A/mallard/Huadong/S/2005(S,IVPI=2.65)和A/mallard/Huadong/Y/2003(Y,IVPI=0),是对麻鸭具有不同致病力的病毒。两病毒的HA裂解位点区有2个氨基酸差异,S病毒在HA裂解位点区322是Leu(L322),329位缺失(-329),而Y病毒322位是Gln(Q322),329位是Lys(K329)。根据这两个位点的差异,利用反向遗传系统,以S和Y病毒各自为骨架,拯救HA基因突变病毒,检测获救的突变病毒对麻鸭的毒力。可以得知,以S病毒为骨架,将S病毒HA基因322位Leu替换为Gln和(或)在329位添加Lys,以及用Y病毒的HA(Q322L,K329-)替换S病毒HA,获救的重组病毒对麻鸭亦完全无致病力;但以Y病毒为骨架,将Y病毒HA基因322位Gln替换为Leu和(或)在329位缺失Lys后,Y重组病毒对麻鸭的毒力上升。结果提示,S和Y病毒HA基因裂解位点区322和329氨基酸残基突变或缺失均影响病毒对麻鸭的致病力,且HA基因与其它基因的匹配性显著影响病毒对麻鸭的致病力。

10%溴虫腈悬浮剂对野鸭繁殖性能的影响

试验测定了10%溴虫腈悬浮剂对野鸭(Mallardduck)慢性繁殖的影响。溴虫腈试验浓度(有效成分)分别设计为0(对照)、0.5、1.0、2.0mg/kg饲料。结果表明:溴虫腈对野鸭蛋产起始时间有一定影响,随着处理剂量的提高,初产蛋的时间略向后移;溴虫腈对野鸭蛋的蛋壳厚度、受精率及孵化率均没有影响;雏鸭14d的成活率(以孵化出鸭数计),对照组、0.5mg/kg饲料组、1.0mg/kg饲料组、2.0mg/kg饲料组分别为31.6%、29.2%、16.7%和17.0%。

绿头野鸭与我国主要地方鸭品种遗传多样性研究

利用17个微卫星标记,采用PCR扩增,8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染,对绿头野鸭种群和我国9个主要地方鸭品种的遗传多样性进行了检测,统计了各群体的平均有效等位基因（Ne）、平均遗传杂合度（H）、多态信息含量（PIC）、群体间的遗传距离（Ds）和相似系数（I）。采用UPGMA和NJ法构建系统发生树。结果表明：17个微卫星座位在绿头野鸭种群和我国9个主要地方鸭品种中的多态信息含量均为高度多态,所有鸭种的平均PIC、H、Ne分别为0.6506、0.6896、4.1±1.5,基因多态性和遗传多样性相对较高;家鸭各品种间的遗传距离在0.1631-0.6844范围内,绿头野鸭与家鸭品种间的遗传距离分别在0.3096-0.8219之间。根据系统发育树推断中国主要地方鸭品种不是单一起源于绿头野鸭。中国主要地方鸭品种大致可以分为5支。一支为北京鸭、荆江鸭,一支为中山鸭、建昌鸭及高邮鸭,一支为靖西大麻鸭和金定鸭,连城鸭为一支,绍兴鸭为另一支。

H5N1亚型禽流感病毒基因重排后毒力的变化

【目的】为了探讨高致病性禽流感病毒对水禽致病性差异的分子致病机理。【方法】我们对从野鸭分离到的H5N1亚型禽流感病毒的生物学特性进行鉴定,其中A/mallard/Huadong/Y/2003(Y)是对麻鸭无致病性病毒,而A/mallard/Huadong/S/2005(S)是对麻鸭高致病性病毒。利用反向遗传技术构建一系列单个和多个基因组合替换基因重排病毒,并验证重排病毒在麻鸭上的致病力。【结果】研究表明,PB2,PB1,PA(3P),HA单基因以及3P基因组合替换的使S病毒对麻鸭的毒力完全致弱,但相应的基因替换后仅使Y病毒对麻鸭的毒力略有上升。两病毒的其它基因对毒力影响较小。【结论】H5N1亚型禽流感病毒对麻鸭的致病力受多基因调控,且这种调控作用在不同病毒骨架上的影响不一致,强毒受影响程度远比弱毒的大。

野鸭不同孵化阶段蛋壳内钙·磷·钾含量的变化研究

对不同孵化时期野鸭蛋壳内钙、磷、钾含量进行测定,结果表明:随着孵化时间不断延长,蛋壳内钙、磷、钾含量呈现一定的规律性。0～16胚龄,蛋壳内钙、磷变化相对较小,从16胚龄,钙含量突然降低,并持续至28胚龄,磷含量变化从8胚龄开始,16胚龄达最大,随后降低,22～28胚龄基本保持不变,同时各胚龄蛋壳中钙、磷比例也呈规律性变化;钾含量变化呈逐渐下降趋势。

野鸭源H3N8亚型禽流感病毒NS基因的分子克隆及序列分析

根据GeneBank上已发表的H3N8亚型禽流感的非结构蛋白基因(NS)序列,设计了一对特异性引物,成功地从A/mallard/SanJiang/167/2006(H3N8)中克隆到NS基因序列,该克隆基因全长860bp,编码NS1和NS2两种非结构蛋白。与其他H3N8亚型的NS基因进行了同源性比较,核苷酸同源性为65.5%～98.3%,推导的氨基酸序列同源性为65.4%～97.8%。NS基因遗传进化树形成两个分支,该分离株处于等位基因B组。另外,此毒株NS基因在263～277位没有发生15个碱基的缺失。A/mallard/SanJiang/167/2006(H3N8)株149位为丙氨酸,其不能感染哺乳动物。

临武鸭生产性能与肉质特性的研究

将临武鸭屠宰后测定产肉性能和肌肉品质。结果表明,临武鸭的屠宰率为88.1%,半净膛率为82.07%,全净膛率为72.20%,胸肌率、腿肌率、皮脂率、腹脂率分别为9.23%、10.24%、26.53%、0.94%。公母临武鸭之间除腹脂率差异显著外(P<0.05),其余指标差异均不显著。临武鸭屠宰后1h、24h胸肌pH分别为5.50、5.87。腿肌肌纤维直径为133.91um。胸肌失水率和熟肉率分别为24.17%、60.74%,腿肌失水率和熟肉率分别为23.90%、61.88%。

Maillard反应制备虾味香精的工艺技术研究

本文以虾下脚料为原抖,利用Mallard反应制备虾味香精,文章系统地研究了Mailard反应过程中温度、pH值、时间以及酶解液浓度对虾味香精感官品质的影响。通过试验得出:反应温度、pH值、时间以及酶解液浓度均显著地影响虾味香精的感官品质,其最佳反应条件为:温度110℃,pH值7.0,时间30min,酶解液浓度40%,在此条件下生产的虾味香精风味物质含量最佳。

绿头野鸭蛋品质研究及蛋壳强度相关基因的筛选

本试验选取体重、周龄一致的100只绿头野鸭,对其蛋品质进行测定并进行相关分析,测定指标包括蛋壳颜色、蛋壳强度、蛋壳厚度、蛋形指数、蛋白高度、哈氏单位和蛋黄颜色,同时通过转录组测序筛选了与蛋壳强度相关的候选基因。结果表明:不同蛋壳颜色的鸭蛋之间蛋形指数、蛋壳强度、蛋壳厚度、蛋白高度和哈氏单位有显著差异(P<0.05);绿头鸭大部分蛋品质性状之间相关性显著,其中蛋壳厚度与蛋壳强度呈显著正相关,相关系数为0.8742,而蛋壳颜色作为蛋壳强度的衡量指标时,白壳组强度最大,绿壳组次之,黄绿壳组最小(P<0.01);通过转录组测序对蛋壳强度进行差异表达模式对比分析,共找到差异表达基因325个,其中149个基因表达量上调,176个基因表达量下调,与蛋壳强度相关的基因有CACNA1I、CACNB4、CALN、CACNA1S、LOC101801793等17个基因,这些基因主要参与了钙离子跨膜转运、钙离子结合、钙离子释放等生物学过程,本研究结果为进一步研究蛋壳强度差异的分子机理提供了基础。

一株野鸭源基因Ⅲ型新城疫病毒主要生物学特性及基因组序列测定分析

为研究分离自黑龙江三江自然保护区的野生绿头鸭粪拭子中的一株新城疫病毒(命名为Mallard/CH/HLJ383/06)主要生物学特性及基因组序列,本实验对病毒F基因序列进行测定,结果表明该病毒分离株属于NDV基因Ⅲ型,病毒的1日龄雏鸡脑内致病指数(ICPI)为1.81,高于NDV中等毒力病毒株ICPI值,预示该病毒分离株毒力有增强趋势。15日龄SPF鸡致病性试验表明,该病毒分离株可导致雏鸡发病但不死亡,致病性仍低于与其ICPI值相近的基因Ⅶ型毒株。对该病毒分离株进行全基因组序列分析表明:该病毒分离株与Ⅰ系疫苗病毒Mukteswar、江苏2株基因Ⅲ型分离株(JS/7/05/Ch,JS/9/05/Go)结构蛋白氨基酸同源性高达99.0%～99.7%;与疫苗株Mukteswar相比,3株基因Ⅲ型病毒分离株在F蛋白中只有1个共同的氨基酸位点变异(A203T);HN蛋白中存在15个变异氨基酸,但位置各不相同;L蛋白中变异位点最多,为28个,其中有4个变异位点为3个分离株所共有。以上结果初步表明,Mallard/CH/HLJ383/06株可能是由疫苗株Mukteswar在野禽、家禽生态系统中传播进化而来,并由于宿主或免疫压力而发生毒力变异;分离株L蛋白氨基酸位点的变异,可能是导致病毒株毒力返强主要因素之一。

野鸭鸭疫里默氏杆菌的分离与鉴定

从两个野鸭场送检的病死野鸭体内分离到 AFb1、 AFb5和 JYb10共 3株细菌，经菌落形态观察、染色镜检、生化特性测定以及血清学试验，鉴定为 2型鸭疫里默氏杆菌。

4株野鸭源H5N1亚型禽流感病毒的全基因组鉴定

目的为了解H5N1病毒对基因进化情况,方法对4株野鸭源的H5N1禽流感病毒(A/mallard/Huadong/S/2005(S),A/mallard/Huadong/lk/2005(lk),A/mallard/Huadong/Y/2003(Y),A/mallard/Huadong/hn/2005(hn))进行全基因组测序分析,并鉴定对非免疫麻鸭的毒力。结果4株病毒全基因组序列及其氨基酸序列无明显差异,仅在HA裂解位点区,S和lk病毒的322位是Leu,329位缺失,而Y和hn在此两处分别是Gln和Lys。在遗传距离上,Y和hn比较接近,S与lk比较接近。结论根据H5亚型病毒最新分类规则,S和lk的与clade 2.3.4一致,而Y属于clade 2,hn位于clade 3。对麻鸭致病性试验表明,Y和hn是低致病性病毒,而S及lk是高致病性病毒。HA的322位的Leu和329位缺失可能是clade 2.3.4这类病毒的一个遗传进化标志。

稻—野鸭复合生态种养技术水稻产量及经济效益分析

在总结前人研究的基础上,提出了将经济效益更好的野鸭品种"绿头野鸭"代替普通家鸭的一种新型种养技术,即稻-野鸭复合生态种养技术。与单一水稻种植对比,采用该技术能促进分蘖早发和根系生长发育,提高了9.04%的水稻产量,增加了近6倍的单位面积利润,提高了36%的产投比。通过稻-野鸭复合生态种养技术,可在保证水稻生产的前提下显著提高稻田经济效益,调动稻农积极性。

绿头鸭IFN-α的可溶性表达及其活性分析

为了利用原核表达系统研制有生物活性的鸭IFN-α。以pMD18T-Ma IFN-α为模板扩增绿头鸭IFN-α成熟肽基因,将其克隆至原核表达载体pET-32 a中,在大肠杆菌BL21中进行变温诱导表达。SDS-PAGE分析表达结果,并用Western blotting进行验证。Ni2+树脂柱纯化目的蛋白后,测定其生物活性。结果表明,重组pET-32a(+)-Ma IFN-α在大肠杆菌BL21成功表达,主要以可溶性形式存在,Western blotting分析显示目的蛋白具有良好的抗原性。细胞病变抑制法测定重组鸭IFN-α的抗病毒活性约为8×104U/m L;荧光定量PCR方法检测显示表达的重组鸭IFN-α使NDV在DEF上的复制受到了明显的抑制,48 h时间点相对抑制率高达91%。这些都表明表达的重组鸭IFN-α具有良好抗病毒活性。

一株野鸟源H1N1亚型禽流感病毒的遗传进化特征及其系统学分析

从2007年秋季在黑龙江省三江国家级自然保护区采集的绿头鸭(Anas platyrhynchos)泄殖腔样品中,分离到一株A型禽流感病毒,亚型鉴定结果为H1N1,命名A/Mallard/Sanjiang/390/2007(H1N1),简称为MD/San-jiang/390/2007(H1N1)。对8个基因片段(PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M、NS)进行了扩增与序列测定,其中HA基因序列的氨基酸裂解位点序列为PSIQSR↓GLFGAI,符合低致病性禽流感病毒(LPAIV)的序列特征。从该病毒基因组的系统进化分析看出:除PA基因属于北美群系禽流感病毒外,其余基因均属于欧亚群系禽流感病毒;与猪流感病毒、季节性人流感病毒、2009年新型H1N1流感病毒的比较来看,亲缘性较远,均处于不同分支,HA亚型分类属于h1.1.2。NP基因与家鸭分离株A/duck/Hokkaido/Vac-3/2007(H5N1)的核苷酸同源性为99.4%,M基因与家鸭分离株A/duck/Hokkaido/W90/2007(H10N7)的核苷酸同源性达99.6%,PB1基因与NP基因和猪分离株A/swine/Korea/C12/2008(H5N2)的核苷酸同源性分别达99.2%、99.1%,提示该病株可能是一个整合了来源于家鸭和猪的多个亚型AIV基因片段的重组病毒。

绿头鸭卵黄硒含量与禽流感新城疫病毒抗体滴度关系探讨

绿头鸭(Anas platyrhynchos)是大庆龙凤湿地的优势物种,为研究绿头鸭卵黄硒含量与病毒抗体之间的相关关系,采用血凝抑制试验及原子荧光光谱法(AFS)检测105枚绿头鸭卵黄内硒含量及H1、H5、H9亚型禽流感病毒(AIV)和新城疫病毒(NDV)抗体。结果表明,卵黄硒含量为0.48μg/g±0.15μg/g;卵黄内H1、H5、H9亚型AIV和NDV抗体阳性率分别为:100%、59.05%、71.43%、68.57%;其评价抗体滴度分别为:6.17log2、2.89log2、3.34log2、4.22log2。经相关分析结果表明,卵黄内H1、H5、H9亚型AIV和NDV抗体滴度与卵黄硒含量的相关系数分别为:0.077、0.714、0.690、0.611。由此可见,龙凤湿地绿头鸭种群卵黄硒含量与相关病毒抗体之间呈明显的正相关,说明硒元素对动物机体抗病毒能力起到一定的增强作用。