紫花苜蓿转录因子MsDREB1基因表达产物的亚细胞定位

利用生物信息学方法对紫花苜蓿MsDREB1进行了生物信息学分析.结果表明,该序列含有AP2典型结构域,在N端存在核定位信号.为进一步验证该基因功能,构建MsDREB1与绿色荧光蛋白(Green FluorescentProtein,GFP)基因融合的植物表达载体pCAMBIA1302-MsDREB1,再利用基因枪将其转入洋葱表皮细胞,在共聚焦扫描显微镜下观察MsDREB1基因表达产物在洋葱表皮细胞中的亚细胞定位.结果表明,MsDREB1基因表达产物定位于细胞核中,符合DREB家族转录因子特性.

紫花苜蓿DREB1基因的原核表达与蛋白纯化

构建MsDREB1基因的原核表达载体,对表达产物进行鉴定和纯化,为研究DREB1基因在植株中功能奠定基础。用冷酚法从紫花苜蓿提取RNA,并转化成cDNA,然后将其克隆至pET32a原核表达载体,构建重组载体pET32aDREB1。用重组质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE分析,用Ni-NTA亲和层析柱对重组蛋白进行纯化。结果表明,原核表达载体构建正确;SDS-PAGE分析,出现了与DNAMAN预测的43.2 kd大小一致的蛋白条带;经分析重组蛋白纯化率达到90%以上。