边缘无形体MSP2的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

为建立可检测边缘无形体(Anaplasma marginale)的血清学检测方法,该研究根据GenBank收录的边缘无形体MSP2基因序列(登录号:EU526889),构建重组质粒pET28a-MSP2,原核表达获得pET28a-MSP2重组蛋白,将纯化后的蛋白作为抗原,建立间接ELISA检测方法。结果显示,该研究建立的间接ELISA方法,抗原最佳包被浓度、血清最佳稀释度和酶标二抗最佳工作浓度分别为8μg/mL、1∶400和1∶2 000,特异性、灵敏性和重复性良好。本试验成功表达并纯化了边缘无形体的MSP2蛋白,并建立了边缘无形体抗体间接ELISA方法,为边缘无形体的监测和诊断提供参考。

海南省恶性疟原虫MSP1和MSP2等位基因分型研究

目的 对海南省恶性疟原虫分离株的裂殖子表面蛋白质 1(MSP1)和裂殖子表面蛋白质2 (MSP2 )基因进行分型研究。方法 从海南省恶性疟流行区采集的恶性疟患者血样 ,用套式PCR方法分别扩增PfMSP1和PfMSP2基因中具有型特异性的片段 ,进行等位基因分型。结果 (1)MSP1基因分型 :94份恶性疟患者血样中有 82份扩增出MAD2 0型基因片段 (占 87 2 % ) ,2 7份扩增出K1型基因片段 (占 2 8 7% ) ,15份同时扩增出MAD2 0型和K1型基因片段 (占 16 0 % ) ,未扩增出RO33型基因片段。 (2 )MSP2基因分型 :94份血样中有 75份扩增得到 3D7型基因片段 (79 8% ) ,2 8份扩增得到FC2 7型基因片段 (2 9 8% ) ,10份同时扩增得到 3D7型和FC2 7型基因片段 (占 10 6 % )。结论 海南省恶性疟原虫的MSP1等位基因和MSP2等位基因分别以MAD2 0型和 3D7型为优势基因型 ;

奶牛边缘无浆体MSP2的原核表达及抗原性鉴定

为克隆和原核表达牛边缘无浆体(A.marginale)膜表面蛋白2(MSP2),并分析其免疫原性,本研究通过PCR方法扩增A.marginale的MSP2基因,将其连接到pGEX 6p-1载体中,转化感受态细胞BL21(DE3),经IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE分析,将纯化的MSP2重组蛋白免疫小鼠。结果表明表达并纯化了A.marginaleMSP2,其免疫原性良好,为制备单克隆抗体及亚单位疫苗的研制奠定了基础。

中国脑型疟患者恶性疟原虫分离株裂殖子表面蛋白MSP1第16-17区基因和MSP2基因的分子克隆与鉴定

目的 :为设计研制安全有效的人脑型疟疫苗提供理论依据。方法 :根据 MAD2 0株裂殖子表面蛋白 1( MSP1)和 FC2 7株裂殖子表面蛋白 2 ( MSP2 )基因编码区高度保守碱基设计并合成两对引物 ,应用多聚酶链反应 ( PCR)技术对 5例脑型疟患者恶性疟原虫云南省勐腊县勐罕分离株 CMH/ YN和云南省盈江县农场 CYJ/ YN分离株基因组 DNA MSP1第 13- 17区基因和MSP2基因进行扩增 ,并将扩增产物分别经 Eco RI和 Kpn I,Bam HI和 Hind III双酶切后 ,分子定向克隆 M13mp18和 M13mp19载体 ,转染大肠杆菌 ( E.coli) TG1,从含 X- gal和 IPTG的 LB平板上 ,将随机筛选得到的单个无色噬菌斑经 E.coli JM10 3扩增 ,用碱裂解法抽提重组子复制型DNA ( RFDNA)后 ,再分别经 Eco RI和 Kpn I,Bam HI和 Hind III双酶切鉴定。结果 :证实重组子为编码脑型疟患者恶性疟原虫 CMH/ YN和 CYJ/ YN分离株 MSP1第 16- 17区基因和 MSP2基因分子克隆 M13载体。结论 :首次报道确证脑型疟患者恶性疟原虫 CMH/ YN和 CYJ/ YN分离株MSP1第 16- 17区基因和 MSP2基因分别与 MAD2 0株 MSP1和 FC2 7株 MSP2相应基因完全一致。这些发现对研究预防人脑型疟疫苗和建立一种新型脑型疟恶性疟原虫检测方法具有重要意义。

嗜吞噬无形体Msp2蛋白与宿主互作靶蛋白筛选及生物信息分析

目的:筛选与嗜吞噬无形体Msp2蛋白互作的THP-1细胞靶蛋白,有助于理解病原体侵袭宿主的分子机理。方法:PCR获得无形体msp2基因克隆到pGBKT7载体上构建诱饵质粒并转化酵母菌株Y2HGold,营养缺陷培养基及蓝白斑实验验证诱饵质粒是否有自激活、毒性;抽提THP-1总RNA,经反转录、Long-distance PCR、同源重组等构建到pGADT7-Rec载体上并转化酵母菌株Y187,鉴定cDNA文库质量;酵母双杂交筛选与无形体Msp2互作的宿主细胞靶蛋白,生物信息学分析蛋白互作可能导致的信号通路变化。结果:成功构建诱饵质粒;cDNA文库容量达4×106克隆,插入片段大小100-3000 bp,且无污染;酵母双杂交获得宿主靶蛋白7个,分别是NADH脱氢酶(泛醌)1α亚体13(NDUFA13)、锌指蛋白36, C3H样2(ZFP36L2)、核糖体蛋白11(RPL11)、前胸腺素α(PTMA)、C19orf10、组织蛋白酶G(CTSG)、核糖体蛋白S25(RPS25);生物信息学分析,互作的宿主靶蛋白主要参与细胞增殖、细胞凋亡、溶酶体成熟及其它一些信号通路等生物学过程。结论:应用酵母双杂交系统初步筛选出与嗜吞噬细胞无形体表面蛋白Msp2互作的宿主细胞靶蛋白,并利用生物信息学初步分析了其参与的生物学过程,为进一步研究病原菌胞内生存分子机制奠定了基础。

恶性疟原虫海南分离株裂殖子表面蛋白2真核表达重组质粒的构建(英文)

目的 构建恶性疟原虫海南分离株 ( FCC1/ HN)裂殖子表面蛋白 2 ( MSP2 )融合 HBs Ag基因片断真核表达质粒 p VX-ORF1- Pf MSP2 - HBS及重组真核表达质粒 p VXORF1- Pf MSP2 ,为疟疾核酸疫苗及蛋白疫苗的研制奠定基础。 方法 ( 1)采用 PCR技术对恶性疟原虫 FCC1/ HN株 MSP2 原核表达质粒 PET2 8α- MSP2 的 MSP2 基因进行扩增 ,扩增产物经纯化后用 Bam H 酶切 ;质粒 p VXORF1- Pv MSP1 .1 9- HBS用相同的酶酶切 ,经纯化后用 T4DNA连接酶将其与酶切后纯化的 MSP2 基因连接 ;( 2 )分别用Bam H +Xho 双酶切 PET2 8α- MSP2 质粒 DNA和 p VXORF1质粒 DNA,纯化后将目的基因片断用 T4DNA连接酶连接 ;将 ( 1)、( 2 )连接产物分别转化大肠杆菌 DH5α。于氨苄青霉素阳性 L B培养平板上筛选阳性克隆 ,酶切电泳鉴定。 结果 筛选出的重组子为编码 FCC1/ HN MSP2 基因片断的重组质粒 p VXORF1- Pf MSP2 - HBS及 p VXORF1- Pf MSP2 。 结论 编码 FCC1/ HN MSP2 基因片断真核表达质粒 p VXORF1- Pf MSP2 - HBS和 p VXORF1- Pf MSP2 的构建为疟疾核酸疫苗及蛋白疫苗的研制奠定了基础。

嗜吞噬细胞无形体表面蛋白P44研究进展

P44是嗜吞噬细胞无形体p44/msp2基因家族编码的膜表面含量最多、研究最广泛的蛋白。其作为一个穿孔蛋白广泛参与病原体感染早期的黏附、入侵、免疫逃逸及新陈代谢等多种复杂生理活动,与嗜吞噬细胞无形体的致病机制密切相关,已成为当下研究的热点分子。本文就该蛋白分子的主要生理功能、分子生物学特性等方面对其进行全面阐述。

套式PCR用于海南省恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1和2的分型研究

目的 了解海南省恶性疟原虫裂殖子表面蛋白 1(pfMSP1)和表面蛋白 2 (pfMSP2 )等位基因型的分型特征。方法 采用套式PCR法分别扩增pfMSP1基因第 2区与第 3区部分片段和pfMSP2基因的中间可变区 (第 3区 ) ,对海南省恶性疟原虫分离株进行基因分型。结果 5 5份血样中有 5 2份恶性疟疾患者扩增出pfMSP1基因片段 ,以MAD2 0型为主导型 (84 6 % ) ,K1型为次要型 ,未检出RO33型 ,两种不同等位基因混合感染率为 15 4 %。同时 ,5 5份血样中有 5 3份恶性疟疾患者扩增出pfMSP2基因片段 ,以 3D7型为主导型 (83% ) ,FC2 7型为次要型 ,混合感染率为 17%。结论 海南省恶性疟原虫的MSP1存在MAD2 0型和K1型两种等位基因型 ,以MAD2 0型为优势虫株 ;其MSP2存在 3D7型和FC2 7型两种等位基因型 ,以 3D7等位基因家族为主。

基于科大讯飞MSP的粤语自助学习系统的设计

本文分析了基于科大讯飞MSP的粤语自助学习系统的工作原理,选择MSP2.0开发包作为构建系统的核心技术.QISR接口完成语音识别,实现将说话人的语音信息转换为相应文本信息。此外通过QTTS接口调用相关函数完成文本语音转换,实现将识别结果以粤语发音输出。最后,在vc++6.0环境下实现粤语自助学习软件系统,该软件可提供简单的粤语学习功能。

基于改进m序列的压缩采样观测矩阵设计

为了降低对嵌入式系统数据采集的硬件要求,提出了一种适用于模拟信号采集系统的压缩采样方法,为压缩感知观测矩阵提供了一种低功耗硬件实现方法。介绍了观测矩阵设计的相关要求,并提出了带压缩采样矩阵的高斯随机观测矩阵及基于改进的m序列的压缩采样矩阵硬件实现方法。考虑系统功耗及外围电路复杂度问题,提出利用MSP430微处理器完成压缩采样系统设计,并利用滚珠丝杠动态测试中的振动信号完成对系统的验证。实验结果表明,该系统能以低于亚乃奎斯特采样频率的采样率对振动信号进行压缩采样,能较为精确地重构出原始信号。

基于MSP430多功能电子钟的设计

本文设计了一款基于MSP430G2系列单片机的电子钟,这款电子钟除了有基本的时间显示功能,还具有LED显示秒数、闹钟、整点报时的功能。时间是在G2扩展板上的LCD上显示,闹钟和时间提示采用了蜂鸣器来实现,时间校准既可以通过单片机上的按键实现,也可以采用硬件UART通过PC调制来实现。

中国脑型疟患者恶性疟原虫分离株裂殖子表面蛋白2基因的分子克隆及序列分析

目的为设计研制安全有效的人脑型疟疫苗提供科学依据。方法应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）对５例中国脑型疟患者恶性疟原虫云南省勐腊县勐罕（ＣＭＨ／ＹＮ）分离株和云南省盈江县农场（ＣＹＪ／ＹＮ）分离株基因组裂殖子表面蛋白２（ＭＳＰ２）基因进行扩增，将扩增产物分别经ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄⅢ双酶切后，回收的ＭＳＰ２基因分子定向克隆Ｍ１３ｍｐ１８和Ｍ１３ｍｐ１９载体，按Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法进行ＤＮＡ序列测定，并与恶性疟原虫株ＦＣ２７、Ｋ１、ＩＣ１和ＣＡＭＰ株进行同源性分析比较。结果５例中国脑型疟患者恶性疟原虫ＣＭＨ／ＹＮ和ＣＹＪ／ＹＮ分离株ＭＳＰ２基因之间序列完全相同，全长为８００ｂｐ，编码２６４个氨基酸，中央的串联重复序列含２×３２肽序列，与ＦＣ２７、Ｋ１株之间核苷酸同源性为９８８％，而与ＩＣ１、ＣＡＭＰ株之间核苷酸同源性为２８２％。

基于AD7266的多路2Ms/s同步采样A/D模块的设计

AD公司的AD7266提供了先进的功能和特性。AD7266是一款差分/单端输入、双核2 MSPS、12位、3通道SAR A/D转换器,为业界遥遥领先的同步采样ADC。AD7266共有6个模拟输入通道,能够直接与光电编码器连接,无需外部元器件,减化了设计并且降低了成本。这里主要对AD7266和基于AD7266的模块设计进行介绍。