Mineirao柱花草MSRA基因的克隆及其植物表达载体的构建

根据抗病柱花草中的1个AFLP特异片段SG2950-1设计引物,利用RACE技术从Mineirao柱花草中克隆到一个MSRA基因;经测序比对,该序列与细胞色素氧化酶系基因有较高的相似性。构建了植物表达载体,通过冻融法将该载体质粒转入根癌农杆菌LBA4404,为进行该基因的功能分析奠定了基础。

凝固酶阴性葡萄球菌主动外排基因MsrA的检测分析

目的:调查凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase negative staphylococci,CNS)耐药现状,采用PCR分别检测mecA及MsrA基因,探讨主动外排系统在耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(methicillin resistant coagulase negative staphylococci,MRCNS)中的耐药机制,为临床预测MRCNS耐药菌株的发展趋势、合理选用抗菌药物进行治疗及预防MRCNS的爆发流行提供依据。方法:收集临床分离的120株MRCNS,采用K-B法作11种抗菌药物敏感试验,并用聚合酶链反应(PCR)分别检测mecA及MsrA基因,并将3种结果进行对比分析。结果:120株凝固酶阴性葡萄球菌中mecA基因阳性79株,阳性率65.8%,MsrA基因阳性26株,阳性率21.7%,且MsrA基因阳性菌株mecA基因全部呈阳性,对9种抗生素的耐药率也明显高于MsrA基因阴性组。结论:PCR检测mecA及MsrA基因可快速准确判定耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌,一旦发现MsrA基因就应慎用大环内酯类、氟喹诺酮类、克林霉素类、β-内酰胺类药物。

葡萄球菌对克林霉素诱导耐药表型及基因型检测研究

目的了解葡萄球菌对红霉素及克林霉素的耐药性,测定红霉素诱导克林霉素耐药状况和基因型特征。方法收集我院2005～2007年分离到的350株葡萄球菌采用K-B法做药敏试验,对红霉素耐药、克林霉素敏感和中介葡萄球菌临床分离株做D试验检测,PCR检测细菌的ermA、ermB、ermC、msrA、msrB和linA/linA’基因。结果350株葡萄球菌中克林霉素诱导耐药64株,D试验阳性为18.3%。基因型分别是ermA9株、ermB2株、ermC48株、msrA7株、msrB11株、全部阴性的5株、linA/linA’64株、ermC+msrB7株。结论红霉素核糖体甲基化酶基因ermC是诱导耐药的主要基因,检测葡萄球菌中红霉素对克林霉素的诱导耐药性可帮助临床医生正确选用大环内酯类、林可酰胺类和链阳霉素B类抗生素。

葡萄球菌对克林霉素诱导耐药的检测和分析

目的调查临床分离的葡萄球菌对克林霉素诱导耐药状况和基因型特征。方法收集我院2004年分离到的70株红霉素耐药、克林霉素敏感和中介葡萄球菌临床分离株,双纸片法做克林霉素诱导耐药(D试验),PCR检测细菌的ermA、ermB、ermC和msrA基因。结果70株葡萄球菌中克林霉素诱导耐药32株(45.7%)。基因型分别是ermA1株,ermC33株,msrA18株,ermC+msrA5株,全部阴性的13株。结论我院葡萄球菌克林霉素诱导耐药率较高,且存在多种基因型,应提高对诱导耐药葡萄球菌的监测和控制。

住院婴儿呼吸道脲原体生物群和耐药性分析

目的观察住院婴儿呼吸道脲原体的生物群构成和耐药情况,为预防和治疗婴儿脲原体感染提供依据。方法于2012年11月—2015年12月1日采集某综合性三甲儿童医院住院婴儿鼻咽部咽拭子(痰液)标本,采用Mycoplasma IST-2(bio Merieux)试剂盒对标本进行培养鉴定及药敏试验,采用PCR方法进行脲原体生物分群、红霉素甲基化酶(ermA、ermB、ermC)和主动外排泵(mef A/E、msr A/B、mre A)可转移耐药基因检测。比较不同生物群脲原体对9种常见抗生素耐药率和红霉素耐药基因检出率差异。结果 78株脲原体培养阳性,其中48株(61.54%)脲原体分离自早产儿。生物1群51株,占65.38%;生物2群27株,占34.62%。不同生物群在患儿性别、是否早产儿、年龄、出生胎龄、出生体重及住院天数等方面差异均无统计学意义(P>0.05)。78株脲原体对环丙沙星和氧氟沙星的耐药率较高,均为80.77%;对四环素的耐药率为1.28%;对多西环素、交沙霉素和原始霉素高度敏感;对大环内酯类抗生素(红霉素、阿奇霉素和克拉霉素)耐药率较低,均<12%。不同生物群对这9种抗生素的耐药率差异均无统计学意义(P>0.05)。仅有甲基化酶耐药基因(ermB)、主动外排泵可转移耐药基因(msr A/B)阳性扩增,检出率分别为39.74%和12.82%。ermB主要存在于生物2群,检出率为55.56%(P<0.05),msr A/B在脲原体两大生物群中分布较均衡(P>0.05)。78株脲原体分别来自新生儿败血症24例,先天感染性肺炎30例,早产儿视网膜病9例,新生儿颅内出血9例,支气管肺发育不良15例。这些疾病在生物1群和2群的分布差异均无统计学意义(P>0.05)。结论婴儿呼吸道分离的脲原体以生物1群为主,在早产儿中检出率更高;对大环内酯类抗生素耐药率较低,可作为治疗婴儿脲原体感染的首选药物;红霉素耐药基因ermB主要分布在生物2群。