肺癌组织中YAP、Lats 1、Mst 1蛋白的表达及其临床意义

目的:分析肺癌组织中转录共激活因子相关蛋白(YAP)、大肿瘤抑制基因1蛋白(Lats 1)、哺乳动物不育系20样激酶1(Mst 1)水平与血清肿瘤标志物的相关性,探讨其对肺癌复发转移的预测价值。方法:取50例新鲜肺癌标本和癌旁组织标本以及同期50例肺部良性病变患者经皮肺穿刺活检获得的正常组织标本,采用免疫组化SP法检测标本中YAP、Lats1、Mst1蛋白的表达情况。同时收集患者的性别、年龄、术前血清学、肿瘤的临床病理特征及随访预后结果等。结果:①YAP在肺癌组织中强阳性表达,含量明显高于癌旁组织与正常组织(均P<0.05)。②YAP的表达与血清细胞角蛋白19片断(CYFRA21-1)、糖类抗原(CA125)水平呈正相关(均P<0.05),与血清神经元特异性烯醇化(NSE)无关(P>0.05);Lats 1的表达与血清CYFRA21-1、NSE、CA125水平呈负相关(均P<0.05);Mst 1的表达与血清CYFRA21-1、CA125水平呈负相关(均P<0.05),与NSE无关(P>0.05)。③截至随访末期,41例(82.0%)发生复发转移。Kaplan-Merier生存分析示:YAP及Mst 1高表达组的无病生存期(DFS)与其低表达组比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。Lats 1高表达组的DFS明显高于低表达组(P<0.05)。④COX比例风险模型分析示:TNM分期、淋巴结转移、Lats 1蛋白的表达是肺癌患者DFS的独立预后因子。结论:Hippo通路失调对肺癌复发转移的预测价值有限。

SO_(2)对2型糖尿病大鼠心肌纤维化的影响及与MST1/LATS1的关系

目的 探讨外源性气体信号分子二氧化硫(SO_(2))在2型糖尿病(T2DM)大鼠心肌纤维化中的作用,并观察其对促凋亡蛋白及MST1/LATS1通路蛋白表达的影响。方法 40只雄性SD大鼠被随机分为对照组、糖尿病组、糖尿病+SO_(2)组、SO_(2)组,其中糖尿病组和糖尿病+SO_(2)组使用链脲佐菌素(STZ)腹腔内注射复制糖尿病大鼠模型,当血糖≥16.7 mmol/L时表示糖尿病模型复制成功,随后以高糖高脂饲料进行喂养。对照组和SO_(2)组注射等量柠檬酸-柠檬酸钠溶液,之后糖尿病+SO_(2)组和SO_(2)组以外源性SO_(2)供体腹腔内注射持续4周。对大鼠心肌组织进行Masson染色,观察心肌胶原纤维形成情况;透射电镜观察心肌超微结构;TUNEL染色观察心肌组织细胞凋亡情况;Western blotting检测心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ、MST1、LATS1、Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9蛋白表达。结果 糖尿病组Masson染色阳性面积较对照组大(P <0.05),糖尿病+SO_(2)组较糖尿病组小(P <0.05),对照组与SO_(2)组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。糖尿病组心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白相对表达量较对照组高(P <0.05),糖尿病+SO_(2)组较糖尿病组低(P <0.05),对照组与SO_(2)组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。糖尿病组心肌组织细胞凋亡率较对照组高(P <0.05),糖尿病+SO_(2)组较糖尿病组低(P <0.05),对照组与SO_(2)组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。糖尿病+SO_(2)组心肌组织CleavedCaspase-3、Cleaved-Caspase-9、MST1和LATS1蛋白相对表达量较糖尿病组低(P <0.05),对照组与SO_(2)组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 SO_(2)调节了2型糖尿病大鼠心肌组织中促凋亡蛋白及MST1/LATS1通路蛋白的表达,并与心肌纤维化的改善呈相关性。

基于Mst1通路探讨通络熄风汤治疗糖尿病心肌损伤的机制研究

目的 明确通络熄风汤改善糖尿病心肌损伤大鼠的治疗效果及机制。方法 本实验将大鼠分为正常组、模型组以及治疗组,利用STZ注射法将大鼠统一构建为糖尿病模型。治疗组予以中药配方颗粒通络熄风汤悬浮液灌胃治疗。采用Western blotting方法检测心肌细胞中P62、Mst1、Sirt3蛋白的含量,运用HE染色观察大鼠心肌组织结构变化,以评价通络熄风汤对糖尿病心肌损伤改善效果及机制。结果 与模型组相比,治疗组显著改善糖尿病大鼠的体重及血糖指标,差异有统计学意义(P<0.01)。同时与模型组相比,通络熄风汤治疗后大鼠心肌细胞的排列情况与坏死状态均有明显改善。与模型组相比,治疗组大鼠心肌组织中的Mst1、P62蛋白含量明显减少,Sirt3蛋白含量明显提高,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 通络熄风汤可以对心肌组织细胞自噬水平进行调整,并保护心脏功能,上述机制通过Mst1通路发挥作用。

Hippo/MST1对老龄围术期小鼠认知功能的影响及机制

目的探讨MST1激活对老龄围术期神经认知障碍(PND)小鼠学习记忆功能的影响及可能机制。方法将48只老年雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(Sham组)和手术组(PND组),每组24只,胫骨骨折髓内钉固定术制备PND模型,术前6 d连续对小鼠行水迷宫定位航行训练,术后1、5、7、14 d行空间探索实验检测小鼠逃避潜伏期、目标象限停留时间百分比、穿台次数,评估小鼠的记忆能力。水迷宫实验结束后立即将动物处死,Western blot检测脑海马组织P-MST1、MST1的表达。另将40只小鼠随机分为4组(n=10):Sham组、PND组、PND+Vehicle组、PND+XMU-MP-1组。麻醉前半小时和术后每天于相同时间点腹腔注射XMU-MP-12 mg·kg^(-1),连续7 d,PDN+Vehicle组于相同时间点腹腔注射等量溶剂。术后第7天对各组小鼠行水迷宫空间探索实验后立即处死取材,Western blot法检测小鼠海马组织P-MST1、MST1表达,ELISA法检测小鼠海马组织匀浆液TNF-α、IL-1β水平。结果造模结果(水迷宫空间探索实验)显示,与Sham组相比,PND组小鼠在术后1、5、7 d的潜伏期延长,目标象限停留时间百分比缩短,穿台次数减少(P均<0.01);术后14 d基本恢复正常水平(P>0.05),老龄小鼠的游泳速度无变化。Western blot结果显示,与Sham组比较,术后1、5、7、14 d老年PND小鼠海马区P-MST1表达均升高(P均<0.01),术后第7天P-MST1达峰值,术后第14天P-MST1表达较第7天下降。与Sham组比较,MST1总蛋白的表达无变化(P>0.05)。使用XMU-MP-1阻止P-MST1蛋白表达后,水迷宫空间探索结果显示,与PND组比较,PND+XMU-MP-1组小鼠逃避潜伏期缩短,目标象限停留时间百分比延长,穿台次数增加(P均<0.05)。Western blot检测结果显示,与PND组比较,PND+XMU-MP-1组P-MST1的蛋白表达降低(P<0.05)。ELISA实验结果显示,与Sham组相比,PND组小鼠术后第7天海马组织匀浆液中TNF-α、IL-1β水平升高(P均<0.05)。与PND组相比,PND+XMU-MP-1组老龄PND小鼠海马组织TNF-α、IL-1β的表达水平降低(P均<0.05)。结论抑制老年PND小鼠海马中MST1异常活化,可改善其认知障碍,其机制可能与下调海马区炎性因子表达有关。Hippo/MST1激活可能是PND发病的重要机制之一。

哺乳动物不育系20样激酶1基因多态性与结直肠癌的关联分析

目的通过病例-对照关联研究的方法,在包头地区汉族人群中探讨哺乳动物不育系20样激酶1(Mammalian sterile 20-like kinase 1,MST1)基因多态性及其单体型与结直肠癌、直肠癌和结肠癌发病风险的关联性。方法收集经病理学确诊的结直肠癌患者390例和正常体检人群413例,留取2 ml外周血用于后续基因分型;根据美国国家生物技术信息中心-人类单体型图数据库提供的中国汉族人群遗传多态性数据筛选MST1基因的单核苷酸多态性(SNP);采用Taqman探针法进行基因分型;Logistic回归计算各SNP在共显性、显性、超显性、隐性四种遗传模型下与结直肠癌、直肠癌和结肠癌发病风险之间的关联性。结果共筛选出4个MST1基因SNP,即rs8000、rs2234197、rs2267853、rs6073629,其中SNP rs2234197与直肠癌发病风险有关,相对于GG+AA基因型,AG基因型可降低直肠癌发病风险,OR[95%置信区间(CI)]=0.657(0.442~0.976);SNP rs8000与结肠癌发病风险有关,相对于TT+GT基因型,GG基因型可降低结肠癌发病风险[OR(95%CI)=0.425(0.182~0.992)]。结论MST1基因SNP rs2234197 AG基因型和SNP rs8000 GG基因型可能分别是直肠癌和结肠癌的保护性因素。

XMU-MP-1调节M1/M2极化平衡保护氧糖剥夺的BV2小胶质细胞的作用研究

目的:探讨XMU-MP-1(Xiamen University-inhibitor of mammalian sterile 20-like kinase protein 1)对氧糖剥夺(OGD)损伤后小胶质细胞M1/M2极化平衡的调节作用。方法采用OGD法诱导BV2细胞损伤。实验分为6组:对照组、模型组、MST1/2 siRNA组和低、中、高剂量实验组(分别给予1.25、5.0和20.0μg·mL^(-1) XMU-MP-1)。采用MTT法测细胞活力,ELISA测细胞上清液中TNF-α、IL-6和IL-1β表达,qRT-PCR测M1和M2标志物的mRNA表达,流式细胞术测CD206表达,蛋白印迹法测MST1、LATS1和YAP蛋白表达。结果与模型组相比,XMU-MP-1抑制BV2细胞增殖,显著降低TNF-α、IL-6和IL-1β的表达水平,下调MCP-1、IL-6、TNF-α和i NOS mRNA的表达,上调CD206、IL-10、TGF-β、IL-10和YM1 mRNA表达,降低MST1和LAST 1蛋白表达,上调YAP和CD206表达。结论XMU-MP-1通过调控MST1/2的磷酸化,调节OGD损伤后的BV2细胞M1/M2极化平衡,为神经炎症靶点药物研发提供理论基础。

Mst-1多途径调控自噬蛋白Beclin1在心肌缺血再灌注损伤中作用及机制的研究进展

自噬是导致心肌缺血再灌注损伤(Myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI)的主要发病机制之一。自噬蛋白Beclin1在自噬发生过程中具有重要作用。哺乳动物不育系20样激酶1(Mammalian sterile 20 like kinase 1,Mst-1)是调控自噬相关基因表达的关键分子。本文综述Mst-1通过多个途径调控自噬蛋白Beclin1在MIRI中的作用及机制,进一步探索治疗MIRI的靶点。

Mst1对结直肠癌SW480细胞增殖与凋亡的影响

MST1是死亡受体信号通路Hippo通路的核心成员,其基因表达异常多见于结直肠癌、肝癌、胃癌等肿瘤。为了探讨MST1表达对人结直肠癌SW480细胞增殖与凋亡的影响及其发生机制,采用PolyJet TM介导pEGFP-N1-Mst1及LipofectamineTM2000介导Mst1特异性-siRNA转染至SW480细胞,分别建立高低表达Mst1的细胞模型。对不同分组的细胞增殖、凋亡及凋亡相关蛋白的表达进行检测。结果显示,Mst1高表达组细胞增殖抑制、凋亡率及凋亡相关蛋白的表达显著增高,反之,Mst1低表达组细胞增殖加快,细胞凋亡率及凋亡相关蛋白的表达显著降低。结果提示,Mst1的靶向调控能较好地控制结直肠癌细胞的增殖与凋亡,可作为人结直肠癌防治的新研究靶点。

MST1基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖与凋亡的影响

目的:探讨MST1(mammalian sterile 20-like kinase 1)基因对人乳腺癌细胞MCF-7增殖与凋亡的影响。方法:构建含有标签蛋白FLAG的MST1质粒pCMV-FLAG-MST1;将构建好的pCMV-FLAG-MST1质粒在脂质体lipofectamine 2000的介导下转染MCF-7细胞,通过Western印迹法分析MST1在MCF-7中的表达情况;分别在转染后12、24、36和48h通过MTT法观察MST1对细胞增殖的影响;转染后36h加入5-溴-2’脱氧尿嘧啶(bromodeoxy uridine,BrdU),通过其掺入比率显示MST1对细胞增殖的影响;转染后36h加入顺铂,作用14h后通过AnnexinⅤ检测其对细胞凋亡的影响。结果:成功构建pCMV-FLAG-MST1质粒;MTT及BrdU检测显示,转染pCMV-FLAG-MST1质粒后MCF-7细胞增殖明显受到抑制;Annexin Ⅴ检测结果提示,高表达MST1后,细胞的凋亡率相对增高。结论:在乳腺癌细胞MCF-7中高表达MST1,不仅可以抑制细胞增殖,还可以促进细胞凋亡。

白藜芦醇通过Mst1/Sirt3信号通路介导的细胞自噬改善糖尿病心肌损伤的机制研究

目的:观察白藜芦醇(Resveratrol)对2型糖尿病模型小鼠心肌细胞损伤及其对Mst1/Sirt3信号通路介导的细胞自噬的影响。方法:C57BL/KSJ db/db小鼠随机分为小鼠模型组、Resveratrol组及西药组,C57BL/KSJ db/m为空白对照组,每组10只。Resveratrol组和西药组分别给予白藜芦醇和二甲双胍灌胃治疗,空白组和模型组给予等体积的生理盐水灌胃治疗,连续8周。分别采用H&E染色、透射电镜和免疫荧光法观察心肌组织病理形态、超微结构和细胞凋亡水平,RT-qPCR法检测心肌组织凋亡基因Bax和Bcl-2的表达水平,Western-blot法检测心肌组织中自噬蛋白(LC3和p62)、Mst1和Sirt3蛋白的表达水平。结果:与模型组相比,Resveratrol能够显著降低db/db小鼠体重、血糖和血清CK和LDH的水平,差异均具有统计学意义(P<0.05;P<0.01)。同时,Resveratrol治疗后心肌炎症评分、凋亡率及心肌组织中Bax mRNA的表达水平及Bax/Bcl-2的比值显著降低,Bcl-2 mRNA的表达水平显著增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。此外,与模型组相比,Resveratrol组心肌组织中p62和p-Mst1蛋白的表达水平显著降低,Sirt3蛋白的表达水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值水平显著增加,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论:Resveratrol通过激活Mst1/Sirt3信号通路促进心肌细胞自噬水平,抑制心肌细胞凋亡对糖尿病心肌病发挥保护作用。

基于Caspase-3/MST1通路研究山仙颗粒对H22肝癌细胞凋亡的调控作用

目的:建立雄性昆明小鼠H22肝癌移植瘤动物模型,观察山仙颗粒对H22肝癌移植瘤的抑制作用及对Caspase-3、MST1表达的影响,以探讨山仙颗粒对H22移植瘤细胞凋亡的调控作用。方法:建立雄性昆明小鼠H22肝癌移植瘤动物模型,随机分为5组,即空白组、模型组、山仙颗粒大、中、小剂量组。早晚灌胃给药各一次,连续30天。颈椎脱臼法处死小鼠,剥离瘤组织、称重,计算抑瘤率。SABC免疫组织化学法检测移植瘤组织中Caspase-3及MST1的表达。结果:山仙颗粒大、中、小剂量组对H22肝癌的抑瘤率分别为41. 246%、26. 801%、19. 835%,抑瘤率与用药剂量呈正相关(P <0. 01);山仙颗粒大、中、小剂量组分别与模型组比较Caspase-3、MST1的表达均增强,其表达强度与药物剂量呈正相关(P <0. 01)。结论:山仙颗粒具有抑制小鼠H22肝癌移植瘤生长的作用,其机制可能与其通过调控Caspase-3/MST1通路而诱导肿瘤细胞凋亡相关。

蛋白hSav1和Mst1之间的相互作用

目的探讨hSav1(human salvador1)和Mst1(Mammalian STE20-like 1)存在的相互作用,为进一步研究Mst1的功能及相关机制奠定基础。方法以Mst1cDNA全长构建诱饵蛋白载体pGBKT7-Mst1,并对其自身转录活性进行鉴定,利用酵母双杂交系统筛选人胎肝文库,挑选单克隆,从而初步筛选出与Mst1相互作用的蛋白。然后构建初步筛选出的蛋白hSav1的载体pCMV-HA-hSav1,与蛋白Mst1的载体pcDNA/4TO-Flag-Mst1共转染HEK293T细胞,利用相应抗体做二者的免疫共沉淀,以验证蛋白hSav1和Mst1之间的相互作用。其次构建pEGFP-hSav1质粒转染HEK293T,利用免疫荧光观察二者在细胞内的定位。结果以Mst1为诱饵蛋白在人胎肝文库筛选到包括hSav1在内的与之存在相互作用的蛋白。免疫共沉淀结果显示,hSav1蛋白可以在FLAG抗体的免疫沉淀物中检测出来,同样在hSav1抗体的免疫沉淀物中也能检测到蛋白Mst1。免疫荧光的结果显示二者荧光在细胞内存在共定位,二者的荧光可充分融合。结论蛋白hSav1与Mst1在哺乳细胞内存在某种相互作用,为进一步研究Mst1的功能及相关机制提供了线索。

MST1与YAP1在食管疾病中的表达及意义

目的 探讨哺乳动物绝育20样激酶1（MST 1）、Yes相关蛋白1（Y AP1）在不同类型食管疾病中的表达、临床意义及两者之间的关系。方法 应用免疫组织化学染色方法,检测MST1、YAP1在食管炎、BARRETT食管、食管不典型增生及食管癌组织中的表达。结果 MST1、YAP1在食管炎、BARRETT食管、食管不典型增生及食管癌组织中的表达差异有显著性（V2=41 9.38、60.255,P〈0.05）。MST1、YA P1在食管癌中表达与病人性别、年龄无关（P〉0 0.5）,而与组织分化程度及淋巴结转移有关（V2=5 6.83～9.038,P〈0 0.5）。MS T1与Y AP1在食管癌组织的表达呈负相关（r=-0.451,P〈0 0.5）。结论 MST1、YAP1可能在食管炎到食管癌的发病过程中起关键作用,可为食管癌的预防、治疗和预后判断提供新的靶点。

MST1在同型半胱氨酸促肝细胞凋亡过程中的表达及意义

目的:探讨MST1(mammalian sterile 20-like kinase 1)在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)促肝细胞凋亡中的作用.方法:动物水平:实验分为4组,每组12只小鼠.正常对照组:5周龄♂鼠(SPF级C57BL/6J)饲以普通饮食;Apo E-/-对照组:5周龄♂纯合子Apo E-/-鼠饲以普通饮食;Apo E-/-高蛋氨酸组:5周龄♂纯合子Apo E-/-鼠饲以高蛋氨酸饮食(普通饮食中加入1.7%蛋氨酸);Apo E-/-叶酸和维生素B12干预组:5周龄♂纯合子A p o E-/-鼠饲以高蛋氨酸饮食加0.006%叶酸和0.0004%维生素B12.喂养14 wk后,全自动生化分析仪测定血清Hcy水平;透射电镜、DAPI染色观察肝组织凋亡情况;实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)及Western blot分别检测MST1 m RNA和蛋白表达水平.细胞水平:分为3组:正常对照组(0μmol/L Hcy);高同型半胱氨酸(hyperhomocysteinemia,HHcy)组(100μmol/L Hcy);干预组(100μmol/L Hcy+叶酸+维生素B12);干预肝细胞48 h.Annexin VFITC/PI双标记流式细胞术检测肝细胞凋亡水平的变化;实时定量聚合酶链反应(q RTPCR)及Western blot分别检测MST1 m RNA和蛋白表达水平.结果:动物水平:(1)各组小鼠喂养20 wk后,测定血清Hcy水平,Apo E-/-高蛋氨酸组血清H c y水平分别是正常对照组和A p o E-/-对照组的2.3倍和1.9倍(P<0.01).干预组血清Hcy水平较Apo E-/-高蛋氨酸组降低28%(P<0.01),提示造HHcy模型成功;(2)电镜结果显示,A p o E-/-高蛋氨酸组小鼠肝细胞出现凋亡的倾向,染色质凝聚浓缩或边缘化,线粒体肿胀或浓缩、嵴断裂或变短,粗面内质网和滑面内质网明显肿胀、断裂、连贯性破坏、核糖体脱落,糖原溶解;(3)DAPI染色后观察,正常对照组和Apo E-/-对照组中细胞核大小均一、核圆,核膜光滑;Apo E-/-高蛋氨酸饮食组一些细胞出现核膜皱缩、细胞核呈现出各种不规则形状,提示可能存在凋亡;Apo E-/-干预组较Apo E-/-高蛋氨酸组细胞核损伤有所减轻;(4)与正常对照组和Apo E-/-对照组相比,Apo E-/-高蛋氨酸组肝组织MST1 m RNA及蛋白表达水平增高(P<0.05或P<0.01),A p o E-/-干预组肝细胞MST1 m RNA及蛋白表达水平较A p o E-/-高蛋氨酸组有所降低(P<0.05).细胞水平:(1)与正常对照组相比,HHcy组肝细胞凋亡水平增高(P<0.01),干预组较HHcy组有所减轻(P<0.05);(2)与正常对照组相比,HHcy组肝细胞MST1 m RNA及蛋白表达水平增高(P<0.01),干预组肝细胞MST1 m RNA及蛋白表达水平较HHcy组有所降低(P<0.05).结论:在HHcy促肝细胞凋亡过程中MST1表达上调,且叶酸和维生素B12可以抑制其表达上调.

MST1过表达对棕榈酸诱导非酒精性脂肪肝细胞模型脂滴生成的影响

目的通过构建哺乳动物STE20相关激酶(mammalian sterile 20-like kinase 1,MST1)过表达慢病毒,探讨MST1对棕榈酸孵育的HepG2细胞内脂滴生成的影响。方法构建MST1过表达载体,与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,获取慢病毒颗粒并检测其滴度。利用250μM棕榈酸诱导HepG2细胞,将MST1过表达慢病毒(LV-MST1)和对照慢病毒(LV-control)分别感染细胞。Western blot检测感染细胞中MST1的表达水平;利用油红O染色观察与检测细胞中脂滴的生成情况;利用细胞甘油三酯酶法检测细胞中甘油三酯的含量。结果成功获得MST1过表达慢病毒,其滴度达1×10~6TU/μL以上。Western blot检测显示MST1过表达的HepG2细胞中MST1的表达水平明显升高,脂滴生成和甘油三酯含量比对照组明显减少(P<0.05或<0.01)。结论成功构建MST1过表达慢病毒,MST1过表达明显抑制棕榈酸诱导的非酒精性脂肪肝细胞模型的脂滴生成。

小干扰RNA沉默MST1基因减轻TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的：探讨丝／苏氨酸蛋白激酶（mammaliansterile20-likekinase1，MSTl）对肿瘤坏死因子．a（tumornecrosisfactorqTNF-α）诱导的人脐静脉内皮细胞（humanumbilicalveinendothelialcell，HUVEC）凋亡的影响及作用机制。方法：用不同浓度的TNF-α（0-100ng／mE）诱导内皮细胞凋亡，24h后通过TUNEL法观察内皮细胞凋亡率，Western印迹分析TNF-α对MSTl活性的影响；随后将构建的MSTl小干扰RNA（smallinterferenceRNA，siRNA）在脂质体Lipofectamine2000的介导下转染原代HUVEC，转染后24h加入TNF-α（10ng／mL）诱导HUVEC凋亡，24h后通过Western印迹确定MSTlsiRNA的基因沉默效率；通过TUNEL法观察MSTl基因的敲除对TNF-α介导的内皮细胞凋亡的影响；并进一步用Western印迹观察MSTl基因敲除对Caspase，3活性的影响。结果：TNF-α（10，40，100ng／mL）能导致内皮细胞凋亡显著增多（P〈0．001），并且呈剂量依赖性；随着TNF-α浓度增加，MSTl的活化增多，MSTl激酶活性相应增加；MSTlsiRNA对内皮细胞中MSTI基因表达的抑制呈剂量依赖性，100nmol／LMSTlsiRNA能特异性沉默内皮细胞中MSTl基因的表达（P〈0．05）；MSTlsiRNA能明显减少TNF-α诱导的内皮细胞凋亡（P〈0．05），抑制TNF-α诱导的MSTl裂解活化，同时caspase-3的活性也相应减少。结论：MSTlsiRNA通过抑制caspase-3的级联放大效应减少TNF-α诱导的HUVEC凋亡。

MST1/2抑制剂促进大鼠脊髓损伤修复的实验研究

目的探讨MST1/2抑制剂对大鼠脊髓损伤后Yes相关蛋白YAP、神经生长相关蛋白43、神经胶质纤维蛋白GFAP、细胞凋亡因子Caspase3表达及运动功能恢复的影响。方法选取105只体重180~200 g成年雌性SD大鼠,对35只仅做椎板切除手术且不注射药物为假手术组,对70只大鼠建立脊髓顿挫损伤模型,分为生理盐水组、MST1/2抑制剂组,腹腔注射生理盐水、1 mg/kg XMU-MP-1。在手术后第1、3、7、14、21、28天,进行斜板实验及BBB运动功能评分,然后处死大鼠收集脊髓损伤区周围组织,进行免疫荧光染色和免疫印迹检测,观察各组大鼠脊髓组织中YAP、GAP43、Caspase3、GFAP表达变化情况。结果斜板实验与BBB运动功能评分结果显示,从术后第7天起,MST1/2抑制剂组评分明显高于生理盐水组,一直持续到术后第28天,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫印记结果显示,术后第14天MST1/2抑制剂组的YAP表达明显高于生理盐水组,差异有统计学意义(P<0.05);术后第14天MST1/2抑制剂组GFAP、Caspase3表达明显低于生理盐水组,同时发现GAP43出现表达,差异有统计学意义(P<0.05)。荧光染色显示,MST1/2抑制剂组较少炎症细胞浸润、形成神经组织结构框架,生理盐水组明显炎症细胞浸润、形成大量神经胶质瘢痕。免疫荧光染色结果显示,假手术组YAP在神经细胞中出现表达,生理盐水组和MST1/2抑制剂组YAP在神经胶质细胞出现表达,且MST1/2抑制剂组YAP、GAP43阳性细胞数量明显高于其他两组,MST1/2抑制剂组成熟肥大的星形胶质细胞数量明显少于生理盐水组;免疫荧光双标结果显示,YAP与GFAP出现共同表达。结论脊髓损伤后大剂量应用MST1/2抑制剂能明显促进YAP表达,减轻炎症损伤反应,抑制神经细胞凋亡,改善脊髓损伤区微环境,促进星形胶质细胞形成原始神经组织结构框架,有利于神经突起再生修复,促进运动功能恢复。

Mst1基因对人喉癌Hep2细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨Mst1基因对人喉癌Hep2细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法以Hep2细胞为对照组,转染pcDNA3.1-Mst1的Hep2细胞为转染组,SB203580处理的Mst1转染细胞为处理组。采用MTT法测定三组细胞的增殖抑制率,双标流式细胞法检测其凋亡率,用Western blot法检测三组细胞中Mst1蛋白、磷酸化p38(p-p38)和总p38蛋白(t-p38)的表达情况。结果与对照组相比,转染组Mst1和p-p38蛋白表达增强明显t,-p38的表达无明显变化,凋亡率由2.46%升高至7.37%,细胞增殖抑制率为41.8%。与转染组相比,处理组p-p38蛋白表达增强降低t,-p38表达无明显变化,细胞凋亡率由7.37%降低至2.65%,细胞抑制率为-10.1%,细胞增殖活力显著降低。结论 Mst1基因能够通过p38 MAPK通路参与喉癌细胞凋亡和增殖的调控。

Hippo信号通路核心元件MST1在急性白血病患者中的表达及意义

本研究旨在探讨Hippo信号通路核心元件MST1基因在急性白血病患者中的表达情况及其与白血病发生、发展的关系。采用实时定量PCR检测50例初治急性白血病患者、33例正常人、23例完全缓解缓解患者及12例难治/复发患者的MST1基因的表达情况,采用Western blot进一步验证其蛋白的表达水平,结合临床资料对患者的预后因素进行分析。结果表明,与正常人相比,急性白血病初治患者MST1基因的表达水平明显减低(P<0.05),完全缓解前后差异有统计学意义(P<0.05),难治/复发患者与初治患者MST1基因表达水平无明显差异(P>0.05),完全缓解患者与正常人MST1表达水平无明显差异(P>0.05)。结论:MST1基因的低表达与急性白血病的发病及预后相关。

MST1基因在肾癌中的表达及对细胞凋亡影响的研究

目的探讨Mst1基因与肾癌的相关性及其表达增高对肾癌细胞凋亡、增殖能力的影响。方法荧光定量PCR检测47例肾癌及相应的癌旁正常组织中Mst1基因的表达;真核表达载体pcDNA3.1-Mst1转染769-P细胞;western检测转染后Mst1基因的表达;MTT法测定细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 Mst1基因在肾癌组织中表达明显下调;成功构建重组载体;转染后Mst1基因表达增强明显,凋亡明显升高,增殖能力明显下降(P<0.05)。结论 Mst1基因的表达异常与肾癌的发生相关,是肾癌潜在的肿瘤抑制基因,其表达增高能够抑制肿瘤细胞的增殖并促进细胞凋亡。